检索结果-南通市图书馆

分析化学 2004年第3期32卷 273-277页

作者：刘和春杨春杨青张维冰张玉奎中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116011

设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速... 详细信息

设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速分离分析 ,验证了该二维分离平台的可行性及分离效能。实验结果表明 :二维分离系统总的峰个数和分离效能都比各自一维分离系统有较大提高。

关键词：中空纤维接口二维分离平台毛细管等电聚焦电泳毛细管无胶筛分电泳

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

毛细管凝胶及无胶筛分电泳分离检测宽分子量范围DNA片段的研究

毛细管凝胶及无胶筛分电泳分离检测宽分子量范围DNA片段的研究

引用

作者：任怡梦河北大学

学位级别：硕士

人类基因组计划的迅速发展促进了核酸分析技术在突变检测、分子诊断和疾病预防以及治疗评估中的应用,寻找快速、易定量、自动化和高通量的核酸检测分析方法至关重要。毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)具有分离效率高、操作模... 详细信息

人类基因组计划的迅速发展促进了核酸分析技术在突变检测、分子诊断和疾病预防以及治疗评估中的应用,寻找快速、易定量、自动化和高通量的核酸检测分析方法至关重要。毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)具有分离效率高、操作模式多、试样消耗少等优点,已成为蛋白质和核酸等生物大分子分离分析中不可或缺的工具。毛细管凝胶电泳(Capillary gel electrophoresis,CGE)和毛细管无胶筛分电泳(Non-gel capillary electrophoresis,NGCE)是两种常用的操作模式。CGE可有效分离分子量范围为50000 bp的较小DNA片段,具有较高分辨率。但是其凝胶黏度较大,制备和运行过程中容易产生气泡,使体系的稳定性和重现性变差,对于较宽分子量范围的DNA片段分辨率较低。NGCE以低粘度的线性高分子溶液为筛分介质,溶液中高分子之间相互交缠形成网孔,可起到筛分作用。这些低粘度的高分子溶液可提供更快速,更稳定的分离,允许更大的灵活性和压力注射,也更容易实现自动化。NGCE可以提供更大孔隙的筛分介质,有利于分离较宽分子量范围的DNA片段,提高DNA测序对大分子片断的认读长度。本论文分别用CGE和NGCE分离分析宽分子量范围DNA片段,并建立方法学,发现方法存在的问题,用新方法制作涂层毛细管柱解决分离过程中重现性差,柱寿命短等问题。本论文主要内容如下:第一章:综述了核酸分离分析的意义和常用的技术手段,介绍了CGE和NGCE的基本概念及其在核酸分离分析中的应用。第二章:以文献方法制作的线性聚丙烯酰胺(Linear polyacrylamide,LPA)涂层毛细管柱为分离通道,LPA为凝胶,采用CGE分离模式,优化分离条件建立了100000bp分子量范围DNA片段的分离方法。在优化的CGE分离条件下,选择QDL 2,000 DNA Marker(包含100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp六个DNA片段)为测试样品,建立了DNA片段分子量和迁移时间的函数关系;对该CGE分离方法进行了方法学验证,并用于PCR扩增产物中DNA片段的定性和定量分析。结果表明,该方法虽然制备凝胶柱时不易产生气泡,但是CGE凝胶柱使用寿命较短,需要多次更换凝胶。这可能是由于CGE的凝胶不稳定造成的。第三章:以文献方法制作的LPA涂层毛细管柱为分离通道,LPA为筛分介质,采用NGCE分离模式,建立了2500000 bp分子量范围DNA片段的分离方法。在优化的分离条件下,选择DL 10,000 DNA Marker(包含250 bp、500 bp、1000 bp、2000 bp、4000 bp、7000 bp和10000 bp七个DNA片段)为测试样品,对建立的NGCE分离方法进行了方法学验证。结果表明,该方法对2000 bp以下分子量范围的DNA片段,结果准确可靠,重现性好;对2000 bp以上分子量范围的DNA片段,结果重现性较差,这可能是由于毛细管涂层柱的稳定性不好,容易脱落,造成较大分子量DNA片段(2000bp以上)在分离柱内壁上的吸附。第四章:以丙烯酰胺(Acrylamide,AA)为反应单体,过硫酸铵(Ammonium persulfate,APS)为引发剂,四甲基乙二胺(N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine,TEMED)为加速剂,配制预聚合溶液,充入预处理过的毛细管中原位聚合制备LPA涂层毛细管柱。选择DL 10,000 DNA Marker为测试样品,在第三章优化的NGCE分离条件下,考察了不同浓度AA制备的LPA涂层毛细管柱对2500000 bp分子量范围DNA片段的分离性能,考察涂层柱的柱内和柱间稳定性。结果表明,当AA单体浓度为5%时,LPA涂层毛细管柱具有良好的稳定性和较长的使用寿命,可以用于较宽分子量范围DNA片段的分离分析。第五章:结论与展望。

关键词：毛细管凝胶电泳毛细管无胶筛分电泳宽分子量范围DNA片段毛细管涂层柱聚丙烯酰胺

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：