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毛壳素靶向Hsp90抑制食管鳞癌细胞Eca109生长的机制研究

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现代肿瘤医学 2023年第15期31卷 2815-2822页

作者：蒋杭遇楚月明李雨奇李林刘康川北医学院药学院四川南充637000 南充市中医医院药剂科四川南充637000 川北医学院第二临床医学院药学部四川南充637000 川北医学院第二临床医学院组织工程与干细胞研究所四川南充637000

目的:探讨毛壳素对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的影响及潜在作用机制。方法:采用不同浓度毛壳素处理Eca109细胞,CCK-8法、3D肿瘤成球实验、克隆形成实验检测毛壳素... 详细信息

目的:探讨毛壳素对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的影响及潜在作用机制。方法:采用不同浓度毛壳素处理Eca109细胞,CCK-8法、3D肿瘤成球实验、克隆形成实验检测毛壳素对食管鳞癌细胞增殖活力的影响,流式细胞仪检测毛壳素对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响,划痕愈合实验和Transwell实验检测毛壳素对迁移、侵袭的影响。分子对接、细胞热位移实验验证毛壳素与Hsp90的相互作用。蛋白免疫印迹法检测周期、凋亡、迁移侵袭及分子机制相关蛋白的表达变化。结果:毛壳素能显著抑制Eca109细胞的增殖活性,抑制成球能力和集落形成能力(P毛壳素处理组G 2/M期的比例明显增加(P毛壳素处理组Eca109细胞的迁移和侵袭能力均显著降低(P毛壳素与Hsp90具有较强的结合能力。Western blot结果显示,毛壳素处理细胞后,周期相关分子CDK1表达下调,p-Histone H3上调,凋亡相关蛋白Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3上调,迁移侵袭相关蛋白E-Cadherin上调,N-Cadherin和Snail下调,Hsp90客户蛋白p-EGFR、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2表达下降。结论:毛壳素可能通过靶向Hsp90抑制其客户蛋白活性,从而抑制食管鳞癌细胞增殖。

关键词：毛壳素食管鳞状细胞癌 Hsp90蛋白增殖凋亡迁移侵袭

毛壳素对猪核移植胚胎体外发育潜能的影响研究

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中国兽医科学 2021年第6期51卷 792-797页

作者：王婷李海艳刘晨孙乐杨婷石德顺李湘萍广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西南宁530004

为了解H3K9三甲基化表达水平对德保猪核移植胚胎发育潜能的影响,本试验使用毛壳素处理德保猪胎儿成纤维细胞,利用体细胞核移植技术观察猪核移植胚胎的体外发育和相关基因mRNA表达情况。结果显示,不同浓度毛壳素处理(20、30、50 nmol/L)... 详细信息

为了解H3K9三甲基化表达水平对德保猪核移植胚胎发育潜能的影响,本试验使用毛壳素处理德保猪胎儿成纤维细胞,利用体细胞核移植技术观察猪核移植胚胎的体外发育和相关基因mRNA表达情况。结果显示,不同浓度毛壳素处理(20、30、50 nmol/L)德保猪成纤维细胞24 h时,20 nmol/L处理组的细胞生长曲线与未处理组相似,呈“S”型。实时定量PCR检测结果显示,20 nmol/L和30 nmol/L毛壳素处理均会显著降低SUV39H1/2和G9a在成纤维细胞中的表达(P毛壳素处理可降低德保猪核移植胚胎中H3K9me3的表达,提高核移植早期胚胎的发育潜能。

关键词：毛壳素 SUV39H1/2 H3K9me3 胚胎发育

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毛壳素对肝内胆管癌细胞的影响及其机制

中华实验外科杂志 2017年第4期34卷 599-601页

作者：何景亮周文杰张锦前夏正林贺柯向国安广东医科大学研究生学院湛江524023 广东医科大学广东省第二人民医院普外一科广州510317 广东医科大学广东省第二人民医院检验医学部广州510317

目的观察毛壳素对人肝内胆管癌细胞CCLP-1活性的影响并探讨其相关作用机制。方法毛壳素以不同浓度分为1组（0 nmol/L）、2组（50 nmol/L）、3组（100 nmol/L）和4组（200 nmol/L）与CCLP-1细胞共培养，细胞增殖法检测CCLP-1细胞活性... 详细信息

目的观察毛壳素对人肝内胆管癌细胞CCLP-1活性的影响并探讨其相关作用机制。方法毛壳素以不同浓度分为1组（0 nmol/L）、2组（50 nmol/L）、3组（100 nmol/L）和4组（200 nmol/L）与CCLP-1细胞共培养，细胞增殖法检测CCLP-1细胞活性；吉姆赛染色观察CCLP-1细胞形态学改变；流式细胞技术检测细胞凋亡；荧光显微镜检测CCLP-1胞内活性氧（ROS）；蛋白质印迹法检测凋亡信号调节激酶1（ASK-1）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）蛋白表达。结果细胞增殖法提示毛壳素随浓度增加及作用细胞时间延长，细胞活性抑制率上升，呈剂量-效应关系（F＝102.369，P＝0.000）及时间-效应关系（F＝141.377，P＝0.000），并剂量与时间呈交互作用（F＝15.418，P＝0.000）；CCLP-1细胞经毛壳素作用后吉姆赛染色可见细胞核固缩，出现分页状、碎片形状及凋亡小体。流式细胞技术显示细胞总凋亡率：1组：（6.42±3.10）%；2组：（10.82±2.84）%；3组：（13.67±1.71）%和4组：（17.91±6.16）%，总凋亡率呈增多趋势并差异有统计学意义（F＝4.788，P＝0.034）；荧光显微镜检测实验组细胞内荧光值（24.126±9.587）高于空白组荧光值（5.114±1.937）并差异有统计学意义（P＝0.006）；Western blot法实验显示磷酸化ASK-1蛋白表达量：0.255±0.150 （1组）、0.680±0.039（2组）、1.356±0.125（3组）和1.916±0.367（4组）。磷酸化JNKs蛋白表达量：0.493±0.233（1组）、1.542±0.573（2组）、1.639±0.342（3组）、2.480±1.001（4组），提示随毛壳素浓度增加各蛋白表达量均上调（ASK-1：F＝36.946，P＝0.000，JNKs：F＝5.291，P＝0.027）。结论毛壳素对CCLP-1细胞有显著抑制作用并诱导其凋亡，并且ROS-ASK-1/JNKs信号参与CCLP-1细胞凋亡。

关键词：毛壳素人肝内胆管癌细胞细胞凋亡活性氧

毛壳素对德保黑猪核移植胚胎体外发育潜能影响的初步研究

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毛壳素对德保黑猪核移植胚胎体外发育潜能影响的初步研究

作者：李海艳广西大学

学位级别：硕士

体细胞重编程的不完全以及克隆胚胎在表观遗传修饰、多能性维持等方面的异常是造成体细胞核移植技术效率低下的重要原因。组蛋白H3K9三甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在体细胞重编程和胚胎发育过程中具有重要作用。毛壳素(chaetocin)... 详细信息

体细胞重编程的不完全以及克隆胚胎在表观遗传修饰、多能性维持等方面的异常是造成体细胞核移植技术效率低下的重要原因。组蛋白H3K9三甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在体细胞重编程和胚胎发育过程中具有重要作用。毛壳素(chaetocin)是真菌类的一种天然代谢物,为组蛋白H3K9三甲基化SUV39H1/2和二甲基化转移酶G9a的特异性抑制剂,可降低细胞中H3K9me3的表达。为了解降低H3K9me3表达水平对德保黑猪核移植胚胎发育潜能的影响,本研究采用组蛋白甲基化转移酶特异性抑制剂毛壳素处理德保黑猪核移植胚胎和成纤维细胞,探究毛壳素处理对德保黑猪核移植胚胎体外发育潜能的影响。1.探究了毛壳素处理猪孤雌胚胎的适宜条件。采用不同浓度毛壳素处理猪PA胚胎24 h,发现2 nM毛壳素处理24 h可以显著提高猪PA的4-细胞率和囊胚率(81%vs69%,46%vs37%,P毛壳素处理不同时间发现,处理24 h可以显著提高猪PA的4胞率和囊胚率(81%vs69%,46%vs37%,P毛壳素处理24h整体降低了*SUV39H1、SUV39H2和G9a基因在早期胚胎中的表达,且在2-细胞、4-细胞期胚胎中表达显著降低(P毛壳素处理24h降低了猪孤雌胚胎中H3K9me3的表达,其中在4-细胞期显著降低(P毛壳素处理德保黑猪核移植胚胎对其发育潜能的影响。结果发现,用2 nM毛壳素处理激活后的核移植胚胎24 h可以显著提高其2-细胞分裂率和囊胚率(79%vs 68%,21%vs 13%,P毛壳素处理整体降低了克隆胚胎SUV39H1、SUV39H2和G9a基因的表达,其中SUV39H1、G9a和SUV39H2基因在2-细胞、4-细胞期胚胎中的表达显著降低(P毛壳素处理整体降低了猪核移植胚胎中H3K9me3的表达,其中在2-细胞和4-细胞期胚胎中是显著降低(P毛壳素处理供体细胞对德保黑猪核移植胚胎发育潜能的影响。当用不同浓度毛壳素处理德保黑猪成纤维细胞24 h时,20 nM毛壳素处理组的细胞生长曲线与未处理组接近,均呈“S”型。随着毛壳素浓度的增加,细胞呈现不同程度的形变和死亡。采用20 nM和30 nM毛壳素处理的成纤维细胞进行核移植,发现仅20 nM毛壳素处理可以显著提高核移植胚胎的囊胚率(19%vs 13%,P毛壳素处理供体细胞降低了H3K9me3在核移植胚胎中的表达,其中在2-细胞和4-细胞期是显著降低(P毛壳素处理德保黑猪供体细胞或核移植胚胎可以降低核移植胚胎的H3K9me3表达,上调eIF3A和TFIIA等合子激活基因以及囊胚中Nanog和Oct-4等多能性标志基因的表达,从而提高核移植早期胚胎的发育潜能。

关键词：毛壳素 SUV39H1/H2 G9a H3K9me3 胚胎发育

毛壳素对绒山羊胎儿成纤维细胞组蛋白甲基化影响的研究

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毛壳素对绒山羊胎儿成纤维细胞组蛋白甲基化影响的研究

作者：刘洁内蒙古大学

学位级别：硕士

表观遗传学重编程是实现体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎体外发育的关键,其中组蛋白甲基化修饰是重要的表观遗传修饰方式之一,并参与卵母细胞成熟、早期胚胎发育、多能性维持、细胞分化和凋亡以及肿瘤形成过程。... 详细信息

表观遗传学重编程是实现体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎体外发育的关键,其中组蛋白甲基化修饰是重要的表观遗传修饰方式之一,并参与卵母细胞成熟、早期胚胎发育、多能性维持、细胞分化和凋亡以及肿瘤形成过程。当前,组蛋白甲基化研究的主要方向集中在组蛋白H3K4、H3K9、H3K27、H3K36、H4K20的单甲基化、二甲基化和三甲基化。毛壳素是组蛋白甲基化位点H3K9me3特异性甲基转移酶抑制剂,经研究发现毛壳素对猪克隆胚的重编程及发育潜能具有重要的影响作用。H3K9me1和H3K9me2为H3K9me3的底物,但目前尚未发现毛壳素对H3K9me1和H3K9me2及其它位点(H3K4、H3K27、H3K36、H4K20)甲基化修饰影响作用的研究。因此,本实验探究了毛壳素对绒山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)组蛋白甲基化修饰相关位点的影响,为今后提高绒山羊体细胞核移植技术效率提供参考依据。1.毛壳素处理gFFCs最适浓度筛选本实验通过CCK8细胞活性检测及q RT-PCR检测对毛壳素处理gFFCs细胞的最适浓度进行了筛选,绘制了gFFCs细胞生长曲线图,细胞呈“S”型生长,生长状态良好;通过q RT-PCR对G9A进行检测,结果显示毛壳素处理细胞24 h 20 n M时,相对其他实验组而言转录水平表达显著降低,为对照组的0.72倍。为进一步验证最适浓度筛选结果,通过CCK8检测了毛壳素对细胞活性的影响,结果显示24 h 20 n M时,毛壳素对细胞活性影响最低,为对照组的0.92倍。本实验最终确定24 h 20 n M为毛壳素处理细胞最适处理浓度与时间。2.毛壳素对gFFCs细胞组蛋白甲基化的影响q RT-PCR实验结果显示,毛壳素处理gFFCs细胞后,H3K4、H3K27及H4K20me1位点上组蛋白甲基化相关酶表达水平显著升高,去甲基化相关酶表达水平显著降低,其中H3K4位点甲基化转移酶KMT2A、KMT2D表达量分别为实验组的1.14倍、1.99倍,去甲基化转移酶KDM1A表达量为实验组的0.57倍;H3K27位点甲基化转移酶EZH1、EZH2表达量分别为对照组的1.34倍、1.18倍,去甲基化转移酶KDM6B、KDM6A表达量分别为对照组的0.37倍、0.92倍;H4K20me1位点的甲基化转移酶KMT5A表达量为实验组的1.73倍,去甲基化转移酶PHF8表达量为实验组的0.31倍。H3K9me1、H4K20me2/3、H3K36位点的甲基化相关酶表达水平显著降低,去甲基化相关酶表达水平显著升高:H3K9me1的甲基化转移酶SETDB1表达量为实验组的0.46倍,去甲基化转移酶JMJD1C表达量为实验组的1.42倍;H4K20me2/3甲基化转移酶KMT5B、KMT5C表达量分别为实验组的0.72倍、0.42倍,去甲基化转移酶PHF2表达量为实验组的1.6倍;H3K79位点甲基化相关酶的表达量并无显著变化,甲基化转移酶DOT1表达量为实验组的1.05倍,去甲基化转移酶KDM2B表达量为实验组的1.05倍。WB实验进一步验证结果显示,H3K4、H3K27、H4K20蛋白表达量显著增加,H3K9me1位点蛋白表达量显著降低。3.毛壳素对gFFCs细胞体外生长特性的影响通过q RT-PCR、WB、流式细胞术、细胞免疫荧光及EDU细胞增殖检测,结果显示,毛壳素处理gFFCs后,细胞体外生长特性产生变化。抑制了细胞的增殖,增殖相关基因PCNA、KI67表达量均降低,分别为对照组的0.7倍、0.6倍。细胞周期停滞于G0/G1期,从而影响其向S、G2/M期的转变;G0/G1期相关基因CDK2、CDK4、CCNC、CCND2,表达量分别为对照组的1.37倍、1.46倍、1.31倍、1.41倍;S期CCNA2基因的表达水平下降,为对照组的0.77倍;与G2/M期相关基因CCNB2表达量显著下降,为对照组的0.79倍,CDKN1B表达量降低,为对照组的0.80倍。抑制了细胞凋亡,凋亡相关基因BAX、P53表达量明显降低,分别实验组的0.42倍、0.49倍。抑制了细胞多能性基因SOX2、OCT4、NANOG的表达,表达量分别为对照组的0.24倍、0.19倍、0.42倍。我们的研究结果表明,毛壳素对于阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞中组蛋白甲基化修饰有重要的影响,通过调控组蛋白甲基转移酶和去甲基化转移酶来实现其生物学作用并对细胞体外生长特性产生影响。这些结果有助于进一步了解毛壳素的生物学功能,以及对SCNT和组蛋白甲基化修饰的基础研究等方面提供了重要的理论支持。

关键词：体细胞核移植表观修饰组蛋白甲基化细胞生长特性毛壳素

毛壳素诱导胃癌SGC-7901细胞自噬及作用机制研究

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毛壳素诱导胃癌SGC-7901细胞自噬及作用机制研究

作者：周培海南医学院

学位级别：硕士

目的胃癌是一种多见的恶性疾病,在中国的发生率较高。由于胃癌的早期诊断较困难,术后生存率较低,故单独使用手术治疗差,往往需要结合放化疗以期达到治愈。虽然胃癌的放化疗取得了部分效果,但是化疗药物的治疗效果仍未达到预期效果而且... 详细信息

目的胃癌是一种多见的恶性疾病,在中国的发生率较高。由于胃癌的早期诊断较困难,术后生存率较低,故单独使用手术治疗差,往往需要结合放化疗以期达到治愈。虽然胃癌的放化疗取得了部分效果,但是化疗药物的治疗效果仍未达到预期效果而且毒副反应较严重。故需要开发一种可以杀死肿瘤细胞且毒副反应低的新型抗肿瘤药物,目前较热门方法便是从天然产品中提取有效活性物质。毛壳素是从毛壳菌属真菌产生的小分子天然产物,在血液系统肿瘤的临床诊疗方面有较好的疗效。同时,毛壳素在实体瘤的治疗方面拥有广阔的前景。本课题旨在探究毛壳素通过促进胃癌SGC-7901细胞出现自噬,发挥毛壳素抑制肿瘤细胞增殖作用,并探究毛壳素在诱导细胞自噬中的作用机制,为胃癌的临床诊疗增加理论支撑。方法通过CCK8实验检测毛壳素对胃癌SGC-7901细胞活力的影响;使用流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染法检测毛壳素对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用。利用光学显微镜观察毛壳素干预胃癌SGC-7901细胞后细胞形态学改变和荧光显微镜观察被MDC染色的自噬体;通过western blotting检测自噬相关蛋白LC3蛋白和p62蛋白的相对表达量的改变,反映细胞自噬活化程度在分子生物学水平上的变化。最后使用western blotting检测调控自噬的经典信号通路PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白分子的表达量的改变,探究其是否参加毛壳素诱发的自噬过程。结果毛壳素能抑制胃癌SGC-7901细胞增长,随着毛壳素浓度的增大抑制作用会变强。流式细胞术Annexin-V-FITC/PI双染检测结果如下:同对照组相比,当使用0.25、0.5和1.0mmol/L的毛壳素处理胃癌SGC-7901细胞后,早期凋亡率分别为2.37%、2.73%、5.17%,晚期凋亡及坏死率分别为9.47%、13.67%、18.63%。光学显微镜检测结果如下:毛壳素作用胃癌SGC-7901细胞后细胞形态发生明显改变,随着毛壳素浓度的增大,细胞会出现变圆、缩小,最终脱离瓶壁而悬浮在培养液中。荧光显微镜检测结果如下:随着毛壳素浓度的增大,可观察到的荧光光点增多。Western blotting中:随着毛壳素给药时间和给药浓度变大,胃癌SGC-7901细胞中LC3-II蛋白的表达水平也增加。最后Western blotting中:随着毛壳素浓度的增大,Akt、mTOR磷酸化蛋白的相对表达量也会降低。结论毛壳素能够抑制胃癌SGC-7901细胞增长。在毛壳素促进胃癌SGC-7901细胞出现死亡的过程中,细胞自噬和凋亡都有激活,而细胞凋亡以晚期凋亡和坏死为主。毛壳素可能通过PI3K/Akt/mTOR通路来调节细胞自噬。

关键词：毛壳素凋亡自噬胃癌

非ROS诱导的Bid/AIF途径介导毛壳素促胃癌细胞凋亡的机制研究

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非ROS诱导的Bid/AIF途径介导毛壳素促胃癌细胞凋亡的机制研究

作者：范亚琼厦门大学

学位级别：硕士

胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。随着科技的发展,我们对胃癌的发生、发展及治疗有了很深的认识,但肿瘤的生物多样性、耐药性和侵袭转移性等使胃癌的治疗仍然是人类难以攻克的难题。因此寻求和探索治疗胃癌的新药成为很多研究人... 详细信息

胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。随着科技的发展,我们对胃癌的发生、发展及治疗有了很深的认识,但肿瘤的生物多样性、耐药性和侵袭转移性等使胃癌的治疗仍然是人类难以攻克的难题。因此寻求和探索治疗胃癌的新药成为很多研究人员的目标。毛壳素是从毛壳属真菌中分离出来的一种天然代谢产物,属表硫代二酮吡嗪复合物。研究表明,毛壳素是真核细胞组蛋白甲基转移酶Su(VAR)3-9和G9a的特异性抑制剂,此外,毛壳素还具有抗病毒、改善心血管疾病、抗肿瘤等多种生物活性,因此逐渐受到重视。尽管毛壳素在肺癌、肝癌、结肠癌等多种肿瘤中被发现具有抗肿瘤效果,但它是否同样适用于抗胃癌目前并不清楚。本文旨在研究毛壳素诱导胃癌细胞发生凋亡的作用及相关机制。本论文我们选取胃癌细胞株AGS、HGC-27、NCI-N87为研究对象。首先,通过MTT法、PI染色结合流式细胞术和Hoechst33342染色观察凋亡小体,发现毛壳素能够诱导胃癌细胞发生凋亡,且呈剂量和时间依赖性,并得出以上三种细胞的IC50浓度分别为120 nM、400 nM和880 nM。为了进一步揭示毛壳素诱导胃癌细胞凋亡的机制,通过Western Blotting检测凋亡相关指标,显示毛壳素能够激活Caspase依赖的凋亡相关通路;用Caspase的广谱抑制剂Z-VAD-FMK和毛壳素共同处理胃癌细胞,通过MTT实验检测细胞存活率,发现Caspase的广谱抑制剂Z-VAD-FMK只能部分阻止细胞发生凋亡,表明毛壳素诱导的胃癌细胞凋亡还包括非Caspase依赖的凋亡。接着,我们首先利用慢病毒介导的RNA干扰技术敲低胃癌细胞内源AIF表达,通过MTT实验和流式细胞术发现敲低AIF后极大的削弱了毛壳素诱导的细胞凋亡。免疫荧光和核质蛋白分离实验进一步表明,毛壳素能够诱导胃癌细胞线粒体中的AIF发生转位进入细胞核,;当我们用AIF上游蛋白BID的抑制剂BI-6C9预处理细胞后再加毛壳素,发现抑制BID蛋白活性后可阻止AIF的核转位,并抑制毛壳素诱导的胃癌细胞的凋亡,表明毛壳素能够通过BID蛋白调控AIF入核进而促进胃癌细胞非Caspase依赖的凋亡。此外,尽管毛壳素并不诱导ROS释放,它依然能够引起线粒体膜电位下降,且可能与控制线粒体膜通道开关的凋亡相关蛋白Bcl-2和BAX的表达有关。细胞自噬在药物诱导细胞死亡过程中常发挥拮抗作用。我们通过Western blotting和吖啶橙染色发现毛壳素还能够诱导胃癌细胞发生自噬,而当用自噬抑制剂CQ处理后可显著促进毛壳素对胃癌细胞凋亡的诱导作用,这为毛壳素联合自噬抑制剂来增强胃癌治疗效果提供了有力的理论依据。以上的研究较为系统的阐明了毛壳素诱导胃癌细胞凋亡的作用及相关分子机制,特别提出了毛壳素能够通过BID介导的AIF核转位促进caspase非依赖的凋亡信号通路。与此同时,我们意外的发现毛壳素介导的胃癌细胞凋亡过程不依赖于ROS的释放,这一现象在药物诱导细胞凋亡过程中是极其少见的,具体的机制和优缺点还有待进一步的探索。这些发现丰富了毛壳素的抗肿瘤作用,也为其临床应用奠定了良好的理论基础。

关键词：胃癌毛壳素凋亡 ROS BID/AIF 自噬

毛壳素对卵巢癌细胞侵袭和迁移的调控机制研究

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中国计划生育和妇产科 2024年第4期16卷 47-51,58,F0004页

作者：吴伟权苏裕东萧丽娟陈艳雅东莞市人民医院妇产科广东东莞523000

目的体外研究毛壳素(chaetocin)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响,并通过探讨硫氧还蛋白还原酶-1(TrxR1)和NF-κB通路的作用机制以期发现并验证毛壳素可能的抗癌属性。方法培养卵巢癌细胞系SK-OV-3和OVCAR-3,用毛壳素处理卵巢癌细胞,用CCK-... 详细信息

目的体外研究毛壳素(chaetocin)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响,并通过探讨硫氧还蛋白还原酶-1(TrxR1)和NF-κB通路的作用机制以期发现并验证毛壳素可能的抗癌属性。方法培养卵巢癌细胞系SK-OV-3和OVCAR-3,用毛壳素处理卵巢癌细胞,用CCK-8法分析毛壳素的细胞毒性和IC50,用EdU染色验证毛壳素的细胞毒性。将细胞分为6组,包括毛壳素0μm组、毛壳素8μm组、生理盐水+毛壳素0μm组、生理盐水+毛壳素8μm组、NF-κB激活剂1+毛壳素0μm组、NF-κB激活剂1+毛壳素8μm组。体外细胞伤口愈合实验检测细胞迁移率。Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭率。qRT-PCR检测TrxR1 mRNA的表达。Western blot检测细胞质和细胞核中NF-κB的表达及检测全细胞中TrxR1、p-NF-κB、p-IKKα/β和p-IκBα的表达。结果毛壳素对卵巢癌细胞增殖有较强的抑制作用。毛壳素24 h对SK-OV-3和OVCAR-3细胞的IC50分别为(72.92±9.18)μm和(61.28±8.56)μm。8μm毛壳素为无细胞毒性的最大剂量。与毛壳素0μm组比,毛壳素8μm组抑制了SK-OV-3和OVCAR-3细胞的迁移和侵袭,并显著下调TrxR1、p-NF-κB、p-IKKα/β和p-IκBα的表达。与生理盐水+毛壳素8μm组比,NF-κB激活剂1+毛壳素8μm组显著促进了SK-OV-3和OVCAR-3细胞的迁移和侵袭,并显著上调了TrxR1、p-NF-κB、p-IKKα/β和p-IκBα的表达。结论毛壳素抑制卵巢癌细胞的增殖和TrxR1的表达,并通过抑制NF-κB通路的激活减少卵巢癌细胞的侵袭和迁移。

关键词：毛壳素硫氧还蛋白还原酶-1 核因子-κB 卵巢癌细胞侵袭迁移

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毛壳素显著抑制柯萨奇病毒B3的体外复制

微生物与感染 2013年第3期8卷 138-143页

作者：张世仑张媛媛尹隽钟江复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200433

柯萨奇病毒B3(CVB3)是一种常见的人类病原体,与多种疾病有关。本研究旨在探讨球毛壳菌代谢产物毛壳素对CVB3在体外培养细胞系中复制的影响。结果显示,毛壳素显著抑制CVB3在体外培养细胞系中的复制。250nmol/L毛壳素可使CVB3感染的HeLa... 详细信息

柯萨奇病毒B3(CVB3)是一种常见的人类病原体,与多种疾病有关。本研究旨在探讨球毛壳菌代谢产物毛壳素对CVB3在体外培养细胞系中复制的影响。结果显示,毛壳素显著抑制CVB3在体外培养细胞系中的复制。250nmol/L毛壳素可使CVB3感染的HeLa细胞相对存活率从未加毛壳素时的(21.9±1.8)%提高至(70.1±4.3)%。同时,毛壳素处理的HeLa细胞中病毒产量仅为对照组的(5.3±0.8)%,而病毒RNA水平也仅为对照组的(13.0±8.3)%。毛壳素也可使CVB3感染的Vero细胞相对存活率从(64.6±1.7)%提高至(87.2±4.8)%。毛壳素的这种抑制作用可被抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸部分抑制。研究毛壳素抑制病毒复制的具体作用机制将有助于新型抗病毒药物的研制。

关键词：柯萨奇病毒B3 毛壳素抗病毒药物