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一种基于智能手机平台比率荧光生物传感器用于检测Al3+和H2O

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光谱学与光谱分析 2020年第S1期40卷 219-220页

作者：张树欣黎检陈俗汝陈茂婷鲁志伟饶含兵四川农业大学理学院四川雅安625014

碳点作为最为新型的零维碳纳米材料,具有尺寸小(<10 nm)、优异的光学稳定性和表面易修饰等特点,因此被广泛应用于各个领域[1]。其中生物质作为来源最广泛,最廉价的碳基材料,所制备成的碳点易被引入杂原子,使其具有独特的荧光性质[2]。... 详细信息

碳点作为最为新型的零维碳纳米材料,具有尺寸小(荧光性质[2]。在本次工作中,我们利用溶热法,以樟属植物叶为碳源合成一类具有多功能的生物质碳点(BD-CDs)。在405 nm的激发下,BD-CDs在470和670 nm处具有双发射荧光。基于聚集诱导荧光增强效应(AEE),利用470 nm处的发射峰可实现铝离子的检测;根据溶剂效应,利用670 nm处的发射峰可实现水含量的检测。另外,还构建了一种基于便携式智能手机结合荧光信号对Al3+和H2O含量现场检测的平台(图1)。实验结果证明基于BD-CDs的荧光传感体系和智能手机检测平台能够达到快速,准确的检测效果,并在食品安全和环境监测方面具有很大的应用潜力。

关键词：生物质碳点智能手机比率荧光目标检测物

用于半胱氨酸检测的比率荧光探针的合成与应用

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精细化工 2014年第4期31卷 817-819,824页

作者：刘涛程忠玲吴效楠扈显琦承德石油高等专科学校化工系河北承德067000

合成了一个衍生于吡咯并吡咯二酮的用于半胱氨酸（Cys）检测的比率荧光探针，用核磁共振谱和质谱鉴定了其结构。探针与Cys作用后荧光发射最大波长由576 nm蓝移至536 nm，荧光颜色由黄色变为绿色，可裸眼直观识别。并且该探针可以专一性... 详细信息

合成了一个衍生于吡咯并吡咯二酮的用于半胱氨酸（Cys）检测的比率荧光探针，用核磁共振谱和质谱鉴定了其结构。探针与Cys作用后荧光发射最大波长由576 nm蓝移至536 nm，荧光颜色由黄色变为绿色，可裸眼直观识别。并且该探针可以专一性地识别Cys而不受其他氨基酸的影响。当Cys溶液浓度在0～300 μmol/L内变化时，该探针荧光变化F536/F576符合线性关系（R = 0.997），可以实现其定量检测。

关键词：半胱氨酸比率荧光吡咯并吡咯二酮功能材料

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分子印迹双发射比率荧光传感器的构建及其对微囊藻毒素的灵敏检测

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分析科学学报 2024年第5期40卷 493-500页

作者：周雯欣沈丽孙沐阳张敬初张瑜孔令凯胡雪萍临沂大学化学化工学院山东临沂276000 中国科学院烟台海岸带研究所山东烟台264000

本文以水体中的微囊藻毒素(MCs)为研究对象,通过制备硼掺杂碳量子点(B-CDs)和氮掺杂碳量子点(N-CDs),以二甲双胍为虚拟模板进行分子印迹,构建了一种检测水体中MCs含量的双发射比率荧光传感器。二甲双胍和常见的MCs(MC-LR,-RR,-YR)具有... 详细信息

本文以水体中的微囊藻毒素(MCs)为研究对象,通过制备硼掺杂碳量子点(B-CDs)和氮掺杂碳量子点(N-CDs),以二甲双胍为虚拟模板进行分子印迹,构建了一种检测水体中MCs含量的双发射比率荧光传感器。二甲双胍和常见的MCs(MC-LR,-RR,-YR)具有同样的胍基,通过印迹洗脱,可在SiO_(2)微球表面形成与MCs相类似的空腔结构。当溶液中存在MCs时,所制备分子印迹聚合物中的B-CDs荧光会对MCs产生响应,出现较为明显的荧光猝灭现象,而N-CDs不发生荧光猝灭,因此,以B-CDs荧光作为目标敏感信号,N-CDs荧光作为参比信号,从而实现MCs的比率荧光分析。实验结果表明,所构建的传感器对MCs有较好的选择性和较高的灵敏度,MCs浓度在0.5~150μg/L之间与荧光信号存在线性关系,其线性方程为I=0.00375c+1.03019,相关系数R2为0.9870,检测限为0.025μg/L。所建立方法对实际样品中MCs检测具有很好的应用前景。

关键词：微囊藻毒素分子印迹比率荧光碳量子点

量子点/多肽水凝胶比率荧光传感器用于镉离子检测研究

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量子点/多肽水凝胶比率荧光传感器用于镉离子检测研究

作者：于真真东南大学

学位级别：硕士

量子点(Quantum dots,QDs)是一类具有独特光学性能的荧光团,具有高亮度、高光稳定性、宽吸收且窄发射等优良特性。量子点与生物分子如功能核酸、蛋白质、酶等偶联可方便地构筑纳米生物传感器,实现各种靶标的高灵敏检测。多肽是由10～10... 详细信息

量子点(Quantum dots,QDs)是一类具有独特光学性能的荧光团,具有高亮度、高光稳定性、宽吸收且窄发射等优良特性。量子点与生物分子如功能核酸、蛋白质、酶等偶联可方便地构筑纳米生物传感器,实现各种靶标的高灵敏检测。多肽是由10～100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物。以多肽为良性基质,可构筑多肽纳米水凝胶(polypeptide nanogel,PNG),其具有三维网状、可调形态、多孔结构、富集效应等优点,提供了与纳米传感器生物相容性良好的载体。近年来,基于各种微纳材料制备的光子晶体结构以及光子晶体-等离子体杂合结构,因其具有显著的表面增强光学/光谱效应,提供了纳米传感器的电磁场增益载体。本文综合利用新型纳米生物传感及载体技术,制备了量子点球形核酸(QD-SNA),继而将QD-SNA包覆于多肽纳米水凝胶载体中,制备了核壳型的gQD/rQD-SNA@PNG 比率荧光传感器,再将该比率荧光传感器固定在场增益载体上,构建了便携式的纸分析器件。所制备的纳米生物传感器/纸分析器件借助双足步行器介导的信号放大、多肽纳米水凝胶的富集效应、光子晶体的慢光效应与金纳米聚集体的局域表面等离子体共振(LSPR)效应,输出双光量子点比率荧光,实现了镉离子(Cd2+)的超灵敏、智能手机定量检测。论文的主要研究结果包括:***-SNA的可控制备。基于水溶性红色量子点,通过酰胺化反应偶联包含适体酶(aptazyme)的三链体DNA及猝灭剂BHQ修饰的发夹DNA(适体酶底物),制备得到QD-SNA。QD-SNA呈球形结构,呈现荧光猝灭状态。***-SNA的传感原理:适体酶双足步行器介导的信号放大机制。所设计的适体酶具有“Zn2+识别区—Cd2+识别区—Zn2+识别区”结构。加入靶标Cd2+并在Zn2+存在条件下,靶标Cd2+的特异性结合,触发适体酶构象改变形成双Zn2+依赖性DNA酶步行器,并以发夹DNA为行走轨道,实现其在量子点表面的双足行走。该双足步行器对底物的持续性剪切,导致淬灭剂远离,QD荧光恢复,介导实现对镉离子的荧光“OFF-ON”检测。全内反射荧光显微镜(TIRF)测量表明QD上双DNA酶步行器的行走时间为30 min。***/rQD-SNA@PNG 比率荧光传感器的可控构筑及其用于Cd2+检测。构筑过程分为三步:氨基化二氧化硅球为核,表面静电吸附红色量子点球形核酸(rQD-SNA);进一步静电吸附工程多肽PC10A,利用其自组装特性形成水凝胶壳层;超声法将油溶性绿色量子点(gQD)装载到水凝胶壳层的疏水区,制得gQD/rQD-SNA@PNG。所制备的gQD/rQD-SNA@PNG具有核壳结构、～158 nm粒径、表面呈负电以及双光发射的性质。该传感器基于QD-SNA的信号放大和多肽纳米水凝胶的靶标富集效应,有效提高了 Cd2+检测的灵敏度,检测限低至～1 pM。4.纸分析器件的构建及其用于Cd2+的现场智能手机检测。以二氧化硅光子晶体为模板,利用硝基纤维素(NC)溶液填充和氢氟酸刻蚀,制备了反蛋白石光子晶体结构载体(PC NC);以吸附纳米金的二氧化硅光子晶体为模板,同法制备了光子晶体-等离子体杂合结构载体(AuNP/PC NC)。分别将gQD/rQD-SNA@PNG传感器吸附于两种载体上,并置于图案化疏水NC纸上,制备出两种纸分析器件。光子晶体结构纸分析器件检测镉离子的检测限为～0.1 pM;光子晶体-等离子体杂合结构纸分析器件实现了镉离子的超灵敏检测,检测限低至～10 fM。检测灵敏度提高的原因为光子晶体的慢光效应或其与金纳米聚集体的LSPR效应的协同,致使局域电磁场增强。定制了便携式的纸分析器件专用检测盒,实现了实际样品(湖水、饮用水、血清)中镉离子的现场、智能手机定量检测,检测灵敏度优于通用ICP-MS方法。

关键词：量子点球形核酸适体酶 DNA步行器多肽纳米水凝胶纸分析器件比率荧光 Cd2+检测智能手机检测

双色比率荧光寡核苷酸探针的设计及其在生物分析中的应用

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双色比率荧光寡核苷酸探针的设计及其在生物分析中的应用

作者：宁殿华中国科学技术大学

学位级别：硕士

端粒酶作为一种核糖蛋白酶,可以催化合成真核细胞生物染色体末端的端粒重复序列,延长端粒的长度,以至达到细胞的“永生”。端粒酶是重要的肿瘤标志物之一,近些年来端粒酶无疑成为研究的热点,根据组织细胞内是否有可检测的端粒酶活性,可... 详细信息

端粒酶作为一种核糖蛋白酶,可以催化合成真核细胞生物染色体末端的端粒重复序列,延长端粒的长度,以至达到细胞的“永生”。端粒酶是重要的肿瘤标志物之一,近些年来端粒酶无疑成为研究的热点,根据组织细胞内是否有可检测的端粒酶活性,可以判定组织细胞癌变与否。无论体外还是体内检测,对于端粒酶检测的方法都相当成熟,并且仍有大量的报道在探索新的方法。人体端粒酶RNA是端粒酶重要组成之一,充当端粒酶催化反应过程中的逆转录模板。人体端粒酶RNA在正常细胞和肿瘤细胞中都普遍存在,可根据其在细胞内表达水平对细胞进行肿瘤分级。然而,对于人体端粒酶RNA检测的热度远不及端粒酶。荧光手段是一种简便快捷的检测核酸的方法,但往往很多方法都没有有效的避免假阳性信号的策略。因此找到一种能高效便捷且具有稳定可靠信号的方法检测人体端粒酶RNA成为本论文的研究重点。本论文中,我们基于荧光共振能量转移原理设计了一种双色比率荧光寡核苷酸探针,实现了对于人体端粒酶RNA的定量检测。本文主要架构如下:第一章,主要综述了端粒酶和人体端粒酶RNA并列举当前对于二者比较经典的检测方法。同时也简单介绍了荧光共振能量转移的原理及其在化学和生物学领域的应用。第二章,论述了双色比率荧光寡核苷酸探针的设计及检测原理。合成出探针,并对探针本身的信号稳定性、选择性、可逆性等性质进行了研究与探讨,用凝胶电泳技术对探针检测原理进行了验证。结果表明,该探针具有很好的信号稳定性好并且对目标物具有较高的特异选择性,检测过程中还呈现肉眼可见的颜色变化。最后,对于细胞提取液中人体端粒RNA,探针也表现出良好的检测效果。第三章,介绍了几种合成介孔二氧化硅及其表面修饰、制备不同粒径金纳米粒子、银包金纳米粒子、二氧化硅包金纳米粒子和纳米四氧化三铁的方法。介孔二氧化硅表面修饰后与金、银包金、四氧化三铁粒子一样,都具有表面吸附单链寡核苷酸的能力,基于此性质,可以设计丰富的对端粒酶或人体端粒酶RNA检测的探针。此举有望为日后的研究提供一种可选择的新思路。

关键词：端粒酶人体端粒酶RNA 荧光共振能量转移比率荧光寡核苷酸探针

荧光聚乙烯亚胺/曙红Y比率荧光法测定十二烷基硫酸钠

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华侨大学学报（自然科学版） 2016年第3期37卷 336-341页

作者：龚未彬杨传孝孙向英华侨大学材料科学与工程学院福建厦门361021

通过聚乙烯亚胺(PEI)与甲醛反应合成发蓝色荧光的聚乙烯亚胺(FPEI),根据十二烷基硫酸钠(SDS)与FPEI结合能力强于曙红Y(EY),使EY与FPEI间的距离增加,导致EY荧光恢复,并建立FPEI/EY双荧光体系测定SDS的比率荧光法.结果表明:SDS的浓度为0.6... 详细信息

通过聚乙烯亚胺(PEI)与甲醛反应合成发蓝色荧光的聚乙烯亚胺(FPEI),根据十二烷基硫酸钠(SDS)与FPEI结合能力强于曙红Y(EY),使EY与FPEI间的距离增加,导致EY荧光恢复,并建立FPEI/EY双荧光体系测定SDS的比率荧光法.结果表明:SDS的浓度为0.62~60.00μmol·L^(-1),F550/F460与SDS的浓度具有较好的线性关系,检测限为0.062μmol·L^(-1),用于实际样品的测定,回收率为93.5%~105.5%.

关键词：双荧光体系十二烷基硫酸钠比率荧光聚乙烯亚胺曙红Y

信号反向变化的量子点比率荧光探针的设计及可视化应用

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信号反向变化的量子点比率荧光探针的设计及可视化应用

作者：刘馨月浙江工业大学

学位级别：硕士

可视化检测是一种利用肉眼识别检测结果颜色的变化来直接读取目标分析物相关信息的方法,具有简单、快速、成本低等优点,在环境监测、食品安全、医疗诊断等领域受到广泛关注。可视化检测中最常用的是比色法和荧光法。其中,荧光法中的比... 详细信息

可视化检测是一种利用肉眼识别检测结果颜色的变化来直接读取目标分析物相关信息的方法,具有简单、快速、成本低等优点,在环境监测、食品安全、医疗诊断等领域受到广泛关注。可视化检测中最常用的是比色法和荧光法。其中,荧光法中的比率荧光技术因其灵敏度高,荧光颜色变化明显等优点而备受关注。比率荧光探针通常含有两个发射带,以二者的荧光强度比来定量检测分析物,具有自校准功能。传统方法构建的比率荧光探针,主要以水相量子点、碳点、有机染料等作为荧光团,通过混合、偶联以及包埋等方式组合在一起。由于组装过程的繁琐以及实验条件的苛刻,荧光团很容易受到环境的影响发生荧光猝灭,探针稳定性差,影响结果的准确性。比率荧光探针的信号输出模式可以分为两大类,一类是固定参比单信号响应,另一类是双信号反向变化。目前报道的比率荧光探针以单信号变化为主,灵敏度较低。为了构建稳定的双信号反向变化的比率荧光探针,本论文进行了以下的研究工作:(1)开发了亲和配体驱动组装新策略,将疏水性的绿色(Cd Zn Se/Cd S/Zn S,G-QDs)和红色(Cd Se/Cd S/Zn S,R-QDs)量子点与巯基化修饰的树状介孔二氧化硅球载体(d Si O)在有机相中直接亲和组装,成功制备了双发射分层二氧化硅纳米复合材料。首先,通过巯基-金属配位作用将绿色量子点负载于树状介孔二氧化硅球的内孔道上(d Si O@G-QDs,SQ),经过硅烷化修饰完成疏水组装体的相转移,接着通过St?ber法在其外部包覆二氧化硅层(d Si O@G-QDs@Si O,SQS)。进一步在该复合纳米球表面修饰巯基,并组装红色量子点(d Si O@G-QDs@Si O@R-QDs,SQSQ),经转相及可控包覆二氧化硅保护层后得到双发射量子点纳米复合物(d Si O@G-QDs@Si O@R-QDs@Si O,SQSQS)。我们可以通过改变绿色和红色量子点的浓度来精确调控纳米复合物的荧光强度比和颜色。所构建的纳米复合物探针表现出完好的原始量子点的荧光特征和良好的光学/胶体稳定性。(2)研究发现,金纳米粒子(Au NPs)分散和聚集状态的吸收光谱分别与量子点纳米复合物的绿色和红色发射光谱部分重叠,对双色量子点有不同程度的猝灭作用。基于此,将制备的双发射量子点纳米复合材料(SQSQS)与金纳米粒子结合,设计了一种基于内滤效应的比率荧光探针,借助手机app图像分析软件,发展了一种基于颜色色调变化的高灵敏可视化检测三聚氰胺的新方法。对实际样品牛奶和奶粉中的三聚氰胺进行了光谱和视觉检测,光谱检测限低至7 n M,视觉检测限为18 n M。此外,基于三聚氰胺引起的双色量子点的反向信号变化,构建了一种三聚氰胺检测的逻辑门策略。

关键词：量子点比率荧光可视化检测金纳米粒子三聚氰胺

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新型比率荧光纸基芯片的制备及应用

新型比率荧光纸基芯片的制备及应用

作者：马昕陕西师范大学

学位级别：硕士

比率荧光分子印迹技术将比率型荧光信号变化和对模板分子的高特异性识别位点相结合,其结果更加准确,且可以通过肉眼识别两种荧光的变化。该技术可有效地拓宽分子印迹荧光传感器的颜色变化范围,使其应用更加便捷、快速。同时有利于实现... 详细信息

比率荧光分子印迹技术将比率型荧光信号变化和对模板分子的高特异性识别位点相结合,其结果更加准确,且可以通过肉眼识别两种荧光的变化。该技术可有效地拓宽分子印迹荧光传感器的颜色变化范围,使其应用更加便捷、快速。同时有利于实现可视化检测,可有效解决残留农药食品样品基质复杂、现场检测耗时长、操作难等问题。鉴于此,本文分别利用两种不同的量子点材料,与荧光染料NBD-Cl相结合,制备了 2,4-D 比率荧光印迹传感器与苯醚甲环唑比率荧光印迹传感器,并对其荧光检测特性进行了详细的考察,实现了果蔬中与湖水中残留的2,4-D及苯醚甲环唑的高灵敏性与高选择性的检测。本文采用了纤维素纸作为基底材料,并与比率荧光分子印迹技术相结合,最后将微流控技术引入其中,为构建多通道可视化比率荧光微流控纸芯片奠定了技术基础。本文的主要研究内容和结果如下:（1）基于CdTe量子点的2,4-D比率荧光印迹微流控纸芯片以纤维素纸作为基底材料,将红色的CdTe量子点与绿色的NBD-Cl荧光染料接枝在其表面,构建一种基于FRET荧光机理的比率型分子印迹荧光传感器,用于高灵敏性且高选择性的检测农残2,4-D。该传感器表现出优越的荧光特性,并且在0.56-80 μM范围内表现出了良好的线性关系,检测限低至90 nM。该荧光传感器已成功应用于豆芽样品以及湖水样品中的农残2,4-D的检测,且回收率为86.2-109.5%,精度低于4.19%。该传感器首次将比率荧光与分子印迹技术相结合并作用于纤维素纸上,对实际样品中的2,4-D农残的分离、检测具有特异性和高灵敏性。（2）基于碳量子点的苯醚甲环唑比率荧光印迹微流控纸芯片本研究所构建的印迹纸芯片是以纤维素纸作为基底材料,将绿色无毒的蓝色碳量子点复合物通过化学手段修饰在其表面,并将偶联物NBD-APTES通过耦合的方式也接枝在纤维素纸表面,从而构建了一种基于单荧光猝灭的可视化比率荧光印迹纸芯片。当苯醚甲环唑溶液滴加在印迹纸芯片上时,苯醚甲环唑的芳香环和碳量子点复合物之间发生强电荷转移相互作用,导致碳量子点复合物发生荧光淬灭现象,而偶联物NBD-APTES作为对照荧光存在,以实现对苯醚甲环唑的快速检测。该荧光传感器的荧光特性表现出较好的结果,其线性范围在0.3-60 μM,检测限为75 nM,样品检测表现出较高的回收率且回收率范围为102.1-11 1.2%,准确度在3.1-4.2%。本研究可快速、便捷的检测食品样品中的苯醚甲环唑残留,在现场快速检测方面有很大的应用前景。2,4-D及苯醚甲环唑两种比率型印迹传感器的成功应用为未来多通道农残可视化检测提供了理论和技术依据,也为其新型多通道传感器的成功构建提供了可能性。

关键词：表面分子印迹技术比率荧光 2,4-D 苯醚甲环唑微流控传感器量子点

建立一种基于Pdots和双CRISPR/Cas12a辅助增强信号的比率荧光法检测类鼻疽伯克霍尔德菌

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建立一种基于Pdots和双CRISPR/Cas12a辅助增强信号的比率荧光法检...

作者：林寿佳海南医学院

学位级别：硕士

目的:由类鼻疽伯克霍尔德菌（Bp）感染引起的类鼻疽在临床中具有高重症率和高死亡率的特点,早期诊断和及时治疗对控制患者的病情至关重要。目前,用于类鼻疽检测的主要技术有细菌培养、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应... 详细信息

目的:由类鼻疽伯克霍尔德菌（Bp）感染引起的类鼻疽在临床中具有高重症率和高死亡率的特点,早期诊断和及时治疗对控制患者的病情至关重要。目前,用于类鼻疽检测的主要技术有细菌培养、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应和环介导等温扩增等。细菌培养法耗时长,血清学检测方法缺乏适当的统一诊断阈值,对早期感染阶段的诊断敏感性不理想。核酸检测方法仍然受到精密设备和复杂热循环步骤的限制。因此,研发针对Bp的快速、特异且灵敏的检测手段势在必行。本研究拟建立一种基于Pdots和CRISPR/Cas12a辅助增强信号的比率荧光法,实现对Bp核酸的快速高灵敏检测。方法:以能够高特异性地区分Bp与其他伯克霍尔德菌的III型分泌系统保守基因（TTS1-orf2）作为目标模型,设计一种基于Pdots和双CRISPR/Cas12a辅助增强信号的比率荧光生物传感器。首先通过经典的共沉淀法合成PFBT Pdots,将TAMRA-DNA和PFBT Pdots共同作为信号报告探针,TAMRA-DNA在酸性缓冲液中可吸附在Pdots表面产生荧光共振能量转移（FRET）,得到F/F比率荧光信号。在该FRET传感平台中引入Cas12a酶作为识别工具,并在单个Bp靶标上设计两个Cas12a的识别位点。Cas12a可特异性地识别并且切割靶标的双链DNA（ds DNA）,激活Cas12a的反式切割活性,非特异性地切割TAMRA-DNA,减少Pdots表面TAMRA-DNA的吸附量,F/F信号增大。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和荧光平台验证Cas12a的酶活性、TAMRA和Pdots的耐酸性、TAMRA-DNA与Pdots的吸附作用及机制、HCl的关键作用以及该传感方法的可行性。对该传感平台的参数进行优化,在最佳条件下评估所提出方法的灵敏性、特异性和模拟实际样本的检测能力。通过构建基于Cas12a的猝灭型荧光检测平台,比较猝灭型荧光传感器与比率型荧光传感器的检测性能。结果:（1）通过15%的PAGE电泳分析,在Cas12a、cr RNA1/2和靶标DNA同时存在的反应泳道中,靶标DNA切割产物条带的出现和TAMRA-DNA条带的消失,验证了Cas12a的顺式切割和反式切割活性被靶标DNA成功激活。在不同p H值的缓冲液中加入TAMRA-DNA和PFBT Pdots,随着p H降低,TAMRA的荧光强度增加,Pdots的荧光强度降低,表明TAMRA-DNA可在酸性条件下吸附在Pdots表面并发生FRET。固定信号输出环境的p H值后,反应体系中存在Bp靶标可减弱FRET效率,比率荧光信号增大。以上结果均验证了该传感器的成功构建。（2）为了验证Cas12a双识别位点的设计在本策略中的重要性,我们分别设计了Bp核酸序列的单识别位点靶标(Bp )和双识别位点靶标(Bp)。对Bp 和Bp 两个体系的实验条件进行优化,确定了以下实验参数的最优条件。Bp 体系中:Cas12a的浓度为50 n M,Cas12a与cr RNA的浓度比为1:1.5,Pdots的浓度为1.4μg/m L,0.1 M HCl的体积为3.5μL,Pdots的浓度为1.4μg/m L,Cas12a的反应时间为40 min。Bp 体系中:Cas12a的浓度为30 n M,Cas12a与cr RNA的浓度比为1:1.25,Pdots的浓度为1.4μg/m L,0.1 M HCl的体积为3.0μL,Pdots的浓度为1.4μg/m L,Cas12a的反应时间为80 min。（3）在最优的实验条件下对两个反应体系进行性能分析。Bp 在1 p M～10 n M的检测范围内得到的线性方程为F/F=0.1587 lgcBp +0.3998（R=0.9921）,Bp 则在5 p M～10 n M的检测范围中得到线性方程F/F=0.2196 lgcBp +0.2655（R=0.9990）,两个反应体系的检测限均为1 p M。（4）为了突出比率型荧光传感器的检测性能,本文构建了TAMRA-BHQ2猝灭型荧光传感器,在最优的实验条件使用猝灭荧光传感器进行Bp 的灵敏性试验。该传感策略在50 p M～20 n M的检测范围内得到的线性方程为y=47.6017lgc–72.3898（R=0.9982）,检测限为23 p M。（5）本文使用该传感器对Bp靶标进行特异性试验和回收试验。在特异性试验中,两个识别位点同时碱基错配的靶标产生的信号与背景管几乎一致,单个识别位点的碱基错配仍能产生明显的信号变化。在模拟的实际样本中进行回收试验,Bp 的回收率为101.4%～109.5%,相对标准偏差为2.6%～4.1%。本研究展现了该传感器在Bp核酸检测中的优异灵敏性、特异性、重复性和实际应用潜力。结论:本研究成功构建了一种基于Pdots和双CRI

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌 CRISPR/Cas12a 聚合物点比率荧光信号增强 DNA传感