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蔬菜上根结线虫种群检测、毒性分化及防治研究

蔬菜上根结线虫种群检测、毒性分化及防治研究

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作者：徐红兵浙江大学

学位级别：硕士

根结线虫(Meloidogyne spp.)是重要的植物病原线虫,目前在我国发生并造成严重危害的主要有南方根结线虫(M. incognita)、爪哇根结线虫(M. javanica)、花生根结线虫(M. arenaria)、北方根结线虫(M. hapla)和象耳豆根结线虫(***)等5种根... 详细信息

根结线虫(Meloidogyne spp.)是重要的植物病原线虫,目前在我国发生并造成严重危害的主要有南方根结线虫(M. incognita)、爪哇根结线虫(M. javanica)、花生根结线虫(M. arenaria)、北方根结线虫(M. hapla)和象耳豆根结线虫(***)等5种根结线虫。本研究主要就我国东南部地区蔬菜上根结线虫种群进行了形态学及分子检测、南方根结线虫群体的毒性分化、以及常用杀线虫剂的有效性和持效性进行了比较研究,主要研究结果概述如下： 1利用形态学和多重PCR结合SCAR-PCR等分子鉴定方法,对浙江、福建和云南等地发生的18份根结线虫样本进行了鉴定,结果表明：浙江台州、杭州、永嘉等地均发现了南方根结线虫和爪哇根结线虫的混合侵染,其中,南方根结线虫都是优势种群,这系在浙江省首次发现根结线虫种群混合侵染的现象;从福建漳州胡萝卜上鉴定出南方根结线虫;云南元谋同一田块内同时检测到南方根结线虫、爪哇根结线虫、象耳豆根结线虫及北方根结线虫。 2通过对浙江杭州、永嘉和萧山等地的南方根结线虫群体在抗性番茄品种‘春展7号’、‘春展8号’、‘仙客1号’及‘线虫绝1号’等的致病力测定发现：‘春展7号’、‘春展8号’和‘仙客1号’品种对杭州南方根结线虫群体表现为抗病,‘线虫绝1号’则为高抗;‘春展7号’、‘春展8号’对萧山群体表现为高抗,‘仙客1号’和‘线虫绝1号’则为为抗病;‘春展7号’、‘春展8号’及‘线虫绝1号’对永嘉群体为高抗,而‘仙客1号’为抗病;这些结果显示因线虫群体的不同,致病力有一定的分化,其中杭州群体的致病力最强。通过南方根结线虫梯度接种番茄试验发现：植株的生物指标如株高、鲜重及干重等都随着接种量的增加而下降,接种量为8000J2/株时,各项生物指标降幅最大且受害最重,鲜重降低69.8%,干重降低66.8%。但单卵囊内卵数及繁殖系数均随着接种量增加而减少,1000J2接种量下,单卵囊内卵数为531,繁殖系数14.8,均明显高于其它处理;8000J2接种量下,单卵囊内卵数和繁殖系数均降至最低,分别为306和8.5。 32013-2014年进行两年杀线虫剂防治及比较试验,涉及杀线剂产品包括棉隆、噻唑磷、灭线磷、阿维菌素、红土运、宁盾一号和益生源共七种药剂或制剂,此外还包括种植一种新的抗性资源—紫背天葵。试验表明,处理90d后棉隆和噻唑磷处理防效好、稳定且持效期长,2013年防效分别为75.1%和72.6%,阿维菌素、灭线磷和红土运防效分别为20.4%、42.8%和45.2%;2014年棉隆和噻唑磷防效分别为66.3%和53.2%,阿维菌素、灭线磷、红土运、宁盾一号及益生源防效分别为21.5%、25.1%、13.3%、33.8%和19.4%。紫背天葵对黄瓜上根结线虫显示明显的田间抗性,系一很好的抗性资源。

关键词：根结线虫多重PCR SCAR-PCR 混合侵染毒性分化化学防治梯度接种繁殖系数

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芒果采后蒂腐菌可可球二孢毒性分化与遗传多样性分析

芒果采后蒂腐菌可可球二孢毒性分化与遗传多样性分析

引用

作者：陈小莉海南大学

学位级别：硕士

芒果(.Mangifera indica L.)是一种著名的热带水果,被誉为热带水果之王。中国是芒果主产国之一,芒果主要分布在海南、广东、广西、云南、四川、福建和台湾。芒果蒂腐病是芒果采后最为严重的病害之一,主要危害芒果果实,发病部位最初在果... 详细信息

芒果(.Mangifera indica L.)是一种著名的热带水果,被誉为热带水果之王。中国是芒果主产国之一,芒果主要分布在海南、广东、广西、云南、四川、福建和台湾。芒果蒂腐病是芒果采后最为严重的病害之一,主要危害芒果果实,发病部位最初在果蒂周围先出现褐色斑点,然后病斑迅速扩展,最后整个芒果出现褐变并发出酸臭味,导致芒果在贮藏、运输期间腐烂并造成严重的经济损失。目前,芒果蒂腐病的研究远远滞后于芒果炭疽病!这与芒果蒂腐在芒果采后保鲜中的重要影响所不符,而缺乏重视与缺少研究技术也导致了芒果蒂腐病害危害加剧及病原菌抗药性的产生。因此,本研究从2013至2014年期间,对海南三亚、乐东、东方和昌江等海南芒果主产区的芒果蒂腐病菌进行采集分离,重点在于对芒果蒂腐菌可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)的毒性分化、抗药性差异及遗传多样性分析,通过形态学和药剂学以及分子生物学方法寻找可可球二孢病菌毒性分化、抗药性及遗传分化之间的关系,以期更深入地了解病菌自然群体的遗传多样性和遗传分化情况;另外,为评价目前海南主要芒果品种对于蒂腐病菌株入侵、定植的风险,为芒果蒂腐菌的流行动态预测提供依据,也为芒果大田病害防治及采后的防腐保鲜选择高效的杀菌剂提供了依据。主要研究结果如下：1.从海南省不同地区不同芒果品种的自然发病的病果中分离并鉴定出大量的芒果蒂腐菌可可球二孢、拟茎点、炭疽等病菌共132株,其中,可可球二孢B. theobromae菌株124株,占93.9%。研究表明,芒果蒂腐可由多种病菌侵染所致,但海南芒果蒂腐病主要由可可球二孢B. theobromae引起。2.根据对124株可可球二孢B. theobromae菌株的致病力测定结果,选出5个致病力较高的菌株：SYTN31605、SYTN21610、LDJH21611、LDJH21608、LDYM11601,针对海南常见的11个芒果品种进行抗病性测定。结果表明：除‘白象牙’1个品种为高感(HS)外,其余10个品种均表现为感病(S),本次测定并未发现对供试5个菌株均表现出抗性的品种3.生物学特性测定结果发现：30个芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae菌株生长的最适培养基为PDA,其次是高氏培养基,麦芽汁培养基不利于菌丝生长,最佳培养条件是12h光照,12h黑暗的培养方式,最适pH为6-8,孢子萌发最适温度是30℃,4h,菌丝生长的最适宜温度是30℃,菌丝的致死温度是65℃,10min。4.13种杀菌剂对62个可可球二孢B. theobromae菌株进行室内毒力测定,以10m/L为鉴别剂量进行抗药性初步检测,供试菌株对多种杀菌剂表现出抗药性,对多菌灵和甲基托布津的抗性频率分别为87.1%和83.9%,对嘧菌酯和醚菌酯的抗性频率分别为79.0%和87.1%,对吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑、咪鲜胺、异菌脲、咯菌腈、百菌清、代森锰锌的抗性频率分别为82.3%、83.9%、87.1%、83.9%、54.8%、19.4%、56.5、1.6%、0、83.9%、87.1%,对从中筛选出表现出较高抗性的6种杀菌剂针对15株可可球二孢菌株进行精密毒力测定。研究表明：用于防治芒果蒂腐可可球二孢菌株的最佳药剂是咯菌腈,其次是异菌脲,6种药剂中药性效果最差的是多菌灵,EC50值范围大小为3.23-33113.11mg/L,平均抗性水平2479.16,多菌灵与甲基硫菌灵存在明显的交叉抗性,表明海南大多数地区的芒果蒂腐病菌可可球二孢已对苯并咪唑类杀菌剂和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂产生极大的抗性。5.利用分子标记RAPD方法对30个芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae病菌遗传多样性分析,针对30个菌株,从21条引物中筛选出6条随机引物,根据6条引物扩增的结果,一共扩增出64条谱带,集中在250-2500bp,多态性条带58条,DNA多态率高达90.6%,遗传相似性系数在0.58-0.86之间,表明这30个芒果蒂腐病菌遗传分化大,群体之间的结构多样性丰富,在相似系数为0.594时,所有菌株可聚合为2大类,群I有26个菌株,占全部菌株的86.7%,群II有4个菌株,聚合类型与菌株的地理来源不一致,抗药性结果结合RAPD结果分析发现,抗药性强的菌株一般与其他抗药性低的菌株亲缘关系较远,推测这可能是遗传物质基础的改变才导致了抗药性的发生。

关键词：芒果芒果蒂腐菌可可球二孢毒性分化遗传多样性 RAPD

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