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2019—2020年河北部分地区鸡源致病性大肠杆菌的血清型及毒力基因分布

中国兽医学报 2022年第4期42卷 686-691,697页

作者：张海龙何云凤党儒尧陈玥李佩国李蕴玉河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604

为确定河北部分地区鸡源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,***)的流行血清型及毒力基因变迁情况,本研究对2019—2020年来自河北部分地区的225份病死鸡组织样品,通过细菌分离纯化、PCR法共分离鉴定出181株致病性***(2019年105株、2020年7... 详细信息

为确定河北部分地区鸡源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,***)的流行血清型及毒力基因变迁情况,本研究对2019—2020年来自河北部分地区的225份病死鸡组织样品,通过细菌分离纯化、PCR法共分离鉴定出181株致病性***(2019年105株、2020年76株)。采用玻板凝集试验、PCR法对其进行血清型及毒力基因的研究,结果显示分离的菌株属于18种血清型,以O78(14.92%)、O1(14.36%)、O2(11.60%)、O18(10.50%)、O26(10.50%)为主要流行的血清型,其中2019年以O26、O1、O18、O78、O2血清型为主,检出率为7.62%~18.10%;2020年以O1、O2、O6、O9、O12血清型为主,检出率为7.89%~22.37%。分离菌株携带16种不同的毒力基因,未检测到Ler、eaeA、papC、sfa 4种毒力基因。其中2019年iutA毒力基因检出率最高,为96.19%(101/105);Vat、iutB、fyuA等9种毒力基因检出率为7.62%~76.19%;2020年的hlyF毒力基因检出率最高为100%;Vat、iutB毒力基因检出率较低,分别为2.63%和23.68%。分离菌株均携带多种毒力基因,其中2019年的菌株同时携带2~15种毒力基因;2020年的菌株同时携带4~15种毒力基因。优势血清型菌株的致病性试验结果发现,攻毒组的雏鸡发病率为100.00%,总病死率高达82.00%。本研究为河北部分地区鸡源***的有效防控提供了科学依据。

关键词：鸡大肠杆菌血清型毒力基因毒力谱

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新城疫贵州不同分离株的蚀斑克隆与毒力鉴定

新城疫贵州不同分离株的蚀斑克隆与毒力鉴定

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作者：瞿继红贵州大学

学位级别：硕士

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病，被世界动物卫生组织(OIE)定为A类传染病。目前国内对于新城疫的诊断，主要是采用传统的病原分离鉴定及血凝抑制(HI)等血清学试验，虽为大家所公认... 详细信息

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病，被世界动物卫生组织(OIE)定为A类传染病。目前国内对于新城疫的诊断，主要是采用传统的病原分离鉴定及血凝抑制(HI)等血清学试验，虽为大家所公认，但这些方法费时、费力。本文主要开展了RT-PCR技术检测新城疫病毒和鉴别新城疫强弱毒株的研究及蚀斑克隆技术纯化NDV，为我省对新城疫的快速准确诊断奠定了技术基础。 1．应用RT-PCR试验，鉴定NDV及其强弱毒株采用有关文献设计合成的针对NDV F蛋白的3对引物，对15株NDV进行RT-PCR试验，鉴定NDV及其强弱毒株。三对引物分别对15株NDV分离株进行鉴定，其结果与传统毒力测定结果一致，该方法可以用于ND的诊断和NDV强弱毒株的鉴定。为了将RT-PCR及上述引物应用于新城疫的临床诊断并推广，使之具有更广泛的应用价值，我们采用该方法对贵州的13例禽类送检病例进行鉴定。结果表明：RT-PCR可直接对病料进行检测，能在6h内确诊并区分NDV强弱毒株，其病毒检出率为15.38％(2／13)，与病毒分离率15.38％(2／13)完全相符。RT-PCR应用于临床诊断具有准确、快速的特点，克服了传统方法的不足。 2．利用蚀斑克隆技术对ND毒株进行纯化对2株NDV贵州分离株(GN、ND)及2株疫苗毒株(Ⅰ系和Ⅱ系)进行挑斑纯化，结果得到12株克隆毒。经RT-PCR技术检测，7株为弱毒，形成蚀斑的大小在0.3～1.0mm;5株为强毒，其中4株形成蚀斑的大小在1.0～2.0mm，1株为形成蚀斑的直径为0.4mm的红色蚀斑;在胰酶存在的情况下，低毒力和中等毒力的NDV在鸡胚成纤维细胞上都能形成蚀斑，所形成蚀斑的大小与病毒毒力具有相关性。 3．新城疫毒株毒力谱的构建通过传统毒力指数测定结果和针对HN蛋白单克隆抗体的分群研究，结合RT-PCR对NDV贵州分离株的鉴定，综合评价不同现场流行毒株的毒力，构建新城疫病毒分离物的毒力谱如下： FE＞FW＞BY＞H＞ND＞P＞P＞P＞L＞Ⅰ系＞GN＞Ⅱ系＞Ⅳ系＞ND＞ND

关键词：新城疫 RT-PCR 毒力鉴定蚀斑克隆毒力谱

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