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溶藻弧菌中类霍乱弧菌毒力岛转座酶基因及侧翼序列分子生物学特征分析

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微生物学报 2008年第10期48卷 1367-1372页

作者：罗鹏胡超群中国科学院南海海洋研究所中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室广州510301

【目的】调查类似霍乱弧菌毒力岛(VPI)转座酶(vpiT)的基因是否在溶藻弧菌中分布,并了解其全序列及侧翼序列的分子生物学特征。【方法】对94株溶藻弧菌是否携带类似VPI的vpiT基因进行PCR检测,对阳性株进行了PCR产物直接测序,根据获得的... 详细信息

【目的】调查类似霍乱弧菌毒力岛(VPI)转座酶(vpiT)的基因是否在溶藻弧菌中分布,并了解其全序列及侧翼序列的分子生物学特征。【方法】对94株溶藻弧菌是否携带类似VPI的vpiT基因进行PCR检测,对阳性株进行了PCR产物直接测序,根据获得的部分已知序列,设计引物,通过反向PCR扩增出全长类似vpiT的基因valT及部分侧翼片段,对反向PCR产物进行克隆测序,然后对获得的valT及侧翼序列进行生物信息学分析。【结果】发现94株溶藻弧菌中只有从粤东对虾池水分离的2个株E06011、E0612在PCR检测中产生了预期扩增片段。测序表明两者序列(valT-S1)完全一致。根据反向PCR及克隆最终获得的溶藻弧菌E0601全长valT基因及部分侧翼序列valT-S3。对valT-S3生物信息学分析表明:valT是一个高度类似于霍乱弧菌毒力岛vpiT的转座酶基因。【结论】根据上述结果及相关文献,有理由相信valT基因及其侧翼片段是异源获得,霍乱弧菌VPI元件或整体很可能在包括溶藻弧菌在内的弧菌种间转移。

关键词：溶藻弧菌霍乱弧菌毒力岛转座酶

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牙周致病菌中毒力岛的研究进展

中华口腔医学杂志 2009年第8期44卷 505-507页

作者：王洁赵蕾吴亚菲四川大学华西口腔医学院口腔内科成都610041

近年来，随着分子生物学研究的不断深入，在细菌学领域出现了一些新的概念，毒力岛即为其中之一。1986年Hacker等在泌尿道致病性大肠杆菌（UPEC）536的染色体上发现两个可以发生缺失的大片段，片段丢失后，细菌产生溶血素和P菌毛的能力... 详细信息

近年来，随着分子生物学研究的不断深入，在细菌学领域出现了一些新的概念，毒力岛即为其中之一。1986年Hacker等在泌尿道致病性大肠杆菌（UPEC）536的染色体上发现两个可以发生缺失的大片段，片段丢失后，细菌产生溶血素和P菌毛的能力随之丧失，细菌的毒力受到影响。在此基础上，1997年Hacker等将具有这一特性的DNA大片段命名为毒力岛（pathogenicity islands，PAI），

关键词：毒力岛牙周致病菌尿道致病性大肠杆菌分子生物学细菌学染色体溶血素 DNA

断奶仔猪源大肠杆菌LEE及HPI毒力岛的检测

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微生物学报 2006年第3期46卷 368-372页

作者：成大荣孙怀昌徐建生高崧扬州大学兽医学院扬州225009

应用Duplex_PCR方法,对240株断奶仔猪源大肠杆菌分离株的LEE毒力岛的eaeA基因和耶尔森菌强毒力岛核心区的irp2基因进行了检测,并对HPI毒力岛的fyuA基因及其在大肠杆菌染色体中的插入位置进行了分析,以及随机选取部分PCR产物进行了克隆... 详细信息

应用Duplex_PCR方法,对240株断奶仔猪源大肠杆菌分离株的LEE毒力岛的eaeA基因和耶尔森菌强毒力岛核心区的irp2基因进行了检测,并对HPI毒力岛的fyuA基因及其在大肠杆菌染色体中的插入位置进行了分析,以及随机选取部分PCR产物进行了克隆和序列分析。结果表明:其中29株(12.08%)为LEE+HPI+,39株(16.25%)为LEE+,11株(4.58%)为HPI+;另外还发现:不同病例来源的分离株之间,两种毒力岛的携带率不同;在断奶仔猪腹泻源分离株中,29株(20.71%)为LEE+HPI+,22株(15.71%)为LEE+,9株(6.43%)为HPI+;断奶仔猪水肿病源分离株中,仅5株(6.58%)为LEE+,2株(2.63%)为HPI+,未发现LEE+HPI+菌株;断奶仔猪水肿病并发腹泻源分离株中,仅12株(50%)为LEE+,未发现HPI+及LEE+HPI+菌株。本实验克隆的eaeA(425bp)与已发表序列完全一致,irp2(280bp)f、yuA(948bp)、asn_tRNA_intB(1391bp)均与已发表的序列高度同源,同源性分别在98.2%、98.3%、95.8%以上;40株LEE+HPI+或HPI+分离株中,29株(72.5%)为fyuA+,且其HPI毒力岛位于大肠杆菌染色体asn_tRNA位点。

关键词：猪大肠杆菌毒力岛 LEE HPI

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肠球菌毒力岛基因的检测

南方医科大学学报 2008年第6期28卷 1061-1063页

作者：吴敏陈义忠胡簇琼江凌晓陈清南方医科大学公共卫生与热带医学学院流行病学系广东广州510515 广州市越秀区疾病预防控制中心广东广州510100 南方医科大学珠江医院检验科广东广州510282

目的探索肠球菌中毒力岛基因的存在情况。方法使用PCR和杂交方法对155株肠球菌进行毒力岛相关基因检测。结果155株肠球菌中,88.39%携带至少一个毒力岛基因,各基因阳性率由高至低依次为hyd(81.94%),psaA(78.06%)、nuc(57.42%)、esp(53.5... 详细信息

目的探索肠球菌中毒力岛基因的存在情况。方法使用PCR和杂交方法对155株肠球菌进行毒力岛相关基因检测。结果155株肠球菌中,88.39%携带至少一个毒力岛基因,各基因阳性率由高至低依次为hyd(81.94%),psaA(78.06%)、nuc(57.42%)、esp(53.55%)、cylB(52.90%)和gls24-like(38.06%);除esp基因,其他5个基因的阳性率均是粪肠球菌高于屎肠球菌,其中nuc、cylB、gls24-like三个基因的阳性率有统计学差异。粪肠球菌中临床分离株各基因的阳性率和所携带的基因数均高于健康人分离株。结论肠球菌普遍携带毒力岛相关基因,粪肠球菌各基因阳性率高于屎肠球菌,粪肠球菌中临床分离株所携带的毒力基因、毒力岛基因数目均明显高于健康人分离株。

关键词：粪肠球菌屎肠球菌毒力岛基因

淋球菌毒力岛分类及sac-4基因对淋球菌血清抗性作用的研究

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中华流行病学杂志 2008年第5期29卷 482-485页

作者：陈宏翔吴志洪陈嵘祎帅俊许莉俞莺涂亚庭华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤性病科武汉430022

目的研究淋球菌不同基因型别的毒力岛类型及其sac-45因与淋球菌血清抗性作用的关系。方法运用NGmast和正常人血清（NHS）的抗性比较试验，对46株淋球菌从分子水平上进行基因分型和毒力岛分类，并在此基础上探讨毒力岛sac-4基因与淋球菌... 详细信息

目的研究淋球菌不同基因型别的毒力岛类型及其sac-45因与淋球菌血清抗性作用的关系。方法运用NGmast和正常人血清（NHS）的抗性比较试验，对46株淋球菌从分子水平上进行基因分型和毒力岛分类，并在此基础上探讨毒力岛sac-4基因与淋球菌NHS抗性之间的关系。结果46株野生株中，GGI阳性菌株占80．43％，可分为含有traG和altA；含带sac-4基因的traG和altA；只含有traG一部分保守序列的三种毒力岛类型。血清抗性实验表明9株sac-4阳性的淋球菌野生株均不具有血清抗性，而sac-4阴性的2号和11号菌株却产生了部分血清抗性和完全抗性。结论不同毒力岛类型有着不同的毒力特点和基因型别，淋球菌血清抗性作用与毒力岛sac-4基因并无明显相关性。

关键词：淋球菌基因分型毒力岛

我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查

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中华流行病学杂志 2000年第2期21卷 130-133页

作者：程伯鲲崔树玉温宪芹姜桂香李连青刘巧突赵斌秀叶长芸徐建国中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所卫生部医学细菌学重点实验室北京102206 山东省卫生防疫站沈阳市卫生防疫站山西省儿童医院湖南省安仁县卫生防疫站

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹... 详细信息

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论　携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌。

关键词：大肠杆菌耶尔森氏菌毒力岛腹泻 HPI

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携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻

中华医学杂志 2001年第23期81卷 1427-1429页

作者：李连青朱庆义徐建国程伯鲲周向红赵瑞珍李一平山西省儿童医院分子微生物室太原030013 中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所

目的　探讨携带毒力岛大肠杆菌 (HPIEC)在小儿腹泻中的病原学地位。方法　采用PCR扩增和菌落原位杂交检测HPIEC irp2毒力岛基因 ,并用血清学分型和聚合酶链反应 (PCR)法检测各类致泻大肠杆菌。结果　从 10 32例腹泻患儿粪便中分离出 6 ... 详细信息

目的　探讨携带毒力岛大肠杆菌 (HPIEC)在小儿腹泻中的病原学地位。方法　采用PCR扩增和菌落原位杂交检测HPIEC irp2毒力岛基因 ,并用血清学分型和聚合酶链反应 (PCR)法检测各类致泻大肠杆菌。结果　从 10 32例腹泻患儿粪便中分离出 6 5 2株大肠杆菌 ,经血清学和PCR毒力基因分型 ,检出各类致泻大肠杆菌 2 2 5株 ,其中肠致病性大肠杆菌 (EPEC) 2 0株 ,ETEC 81株 ,产志贺样毒素大肠杆菌 (SLTEC) 4 7株 ,产志贺样毒素侵袭性大肠杆菌 (ESIEC) 74株 ,产毒素大肠杆菌 (EIEC)3株。所有致泻大肠杆菌和未能分型的普通大肠杆菌株 ,再用HPIEC irp2探针作菌落原位杂交 ,共检出携带毒力岛大肠杆菌 (HPIEC irp2 ) 112株 ,总阳性率为 17 2 %。其中 41株是从致泻大肠杆菌ESIEC(2 4/ 74)和SLTEC(17/ 47)中检出。携带毒力岛大肠杆菌性小儿腹泻的主要临床表现为食欲不振(87 5 % )、腹痛 (5 8 0 % )、腹泻 (>6次 /d ,75 9% )、发热 (5 0 9% )、以粘液便为主 (6 9 6 % )。结论　携带毒力岛大肠杆菌是引起小儿腹泻的重要病原菌之一。

关键词：大肠杆菌小儿腹泻毒力岛致病岛临床特征

山东省腹泻病人携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的调查

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中华流行病学杂志 2001年第1期22卷 46-48页

作者：崔树玉温宪芹孟蔚孙启华周国清程伯鲲徐建国山东省卫生防疫站防疫科济南250014 中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所

目的　了解携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌的易感人群、感染率、临床症状、分离率。方法　对 4个医院 1997年 6～ 11月就诊腹泻患者 ,进行流行病学调查并收集大便标本 ,进行细菌分离和鉴定。结果　在 6 71例腹泻病人中 ,共检出 2 0个... 详细信息

目的　了解携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌的易感人群、感染率、临床症状、分离率。方法　对 4个医院 1997年 6～ 11月就诊腹泻患者 ,进行流行病学调查并收集大便标本 ,进行细菌分离和鉴定。结果　在 6 71例腹泻病人中 ,共检出 2 0个属种 44 9株致病菌 ,志贺菌检出率为2 5 .48% ,致泻性大肠杆菌为 15 .0 5 % ,对于 176株疑似产志贺样毒素且具侵袭力大肠杆菌 (ESIEC)菌株采用irp 2、ipaB 基因探针进行菌落原位杂交 ,检出 42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌。与 42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌相关的腹泻病人所表现的临床症状为食欲不振、腹痛、腹泻、寒战、乏力 ,体温正常或低热 ,粪便多为粘液便或水样便 ,日腹泻次数超过 6次以上者为 33例 ,占 78.5 7%。各年龄组均有感染 ,10岁以下儿童为主 ,占 33.33 %。结论　自 6 71例腹泻病人的粪便标本中 ,分离到的志贺菌占首位 ,致泻性大肠杆菌次之 ;在致泻性大肠杆菌中以携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌为主 (6 .2 6 % )。

关键词：腹泻病大肠杆菌毒力岛耶尔森菌山东调查

毒力岛基因SPI-1和SPI-2双缺失对肠炎沙门菌形态、毒力和免疫原性影响的研究

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中国预防兽医学报 2024年第6期46卷 553-560页

作者：刘高松吕雪莲田秋丰衣菲于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

沙门菌毒力岛基因SPI-1和SPI-2分别编码Ⅲ型分泌系统(T3SS)中的T3SS-1和T3SS-2,T3SS可以将沙门菌分泌的效应蛋白转运至宿主细胞中。为分析毒力岛基因SPI-1和SPI-2缺失对肠炎沙门菌生物学特性、致病性和免疫原性的影响,本实验室前期构建... 详细信息

沙门菌毒力岛基因SPI-1和SPI-2分别编码Ⅲ型分泌系统(T3SS)中的T3SS-1和T3SS-2,T3SS可以将沙门菌分泌的效应蛋白转运至宿主细胞中。为分析毒力岛基因SPI-1和SPI-2缺失对肠炎沙门菌生物学特性、致病性和免疫原性的影响,本实验室前期构建了肠炎沙门菌SM6株毒力岛基因SPI-1和SPI-2双缺失株(SM6ΔT3SS),本研究通过绘制亲本株和缺失株的生长曲线,采用扫描电镜观察二者的形态,并测定二者对人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)的黏附性与侵袭力。生长曲线结果显示,培养5 h时,SM6ΔT3SS株的生长速度显著快于亲本株SM6(P毒力岛基因SPI-1和SPI-2的缺失可能改变了细菌的生长、代谢、分泌及或结构等特征,导致沙门菌的生物学特性的改变及降低了其对肠上皮细胞的黏附性和侵袭力。以1×10^(7)cfu/100μL的剂量经腹腔注射感染7日龄SPF鸡,并于感染后不同时间检测缺失株在SPF鸡盲肠、肝脏和脾脏的载菌量;将缺失株以1×10^(7)cfu/100μL的剂量经腹腔注射免疫7、21和35日龄鸡,在首免后不同时间采血,采用间接ELISA检测各组鸡血清中的IgG抗体水平;在首免后42 d时经腹腔注射1×10^(9)cfu/100μL/只的沙门菌SM6株,并于攻毒后7 d和14 d采血连同免疫期间采集的血一起采用间接ELISA检测各组鸡血清中IL-4和IFN-γ的分泌水平。在攻毒后14 d内观察并统计各组鸡的临床症状及死亡率。攻毒后7 d各组均剖杀部分鸡,采集其盲肠和肝脏组织制备病理切片观察各组织病理变化,评价该缺失株的免疫效力。载菌量结果显示,感染后2 d,缺失株在鸡脾脏和肝脏中的载菌量极显著低于亲本株(P<0.001),但在盲肠中的载菌量极显著高于亲本株(P<0.01);感染后4 d,缺失株在肝脏和盲肠中的载菌量极显著和显著低于亲本株(P<0.01、P<0.05);感染后8 d,缺失株在脾脏中的载菌量极显著低于亲本株(P<0.01),且两组鸡在上述脏器中的载菌量均降至较低水平;抗体和细胞因子的ELISA检测结果显示,首免后14 d,免疫组鸡的抗体水平显著高于对照组(P<0.05)。从免疫后21 d,免疫组鸡的抗体水平均极显著高于对照组鸡(P<0.001);免疫期血清中IFN-γ的分泌水平无明显变化,IL-4的含量在免疫后42 d极显著高于对照组(P<0.01);攻毒后鸡血清中IFN-γ和IL-4的含量均显著高于对照组(P<0.05)。整个实验期SM6ΔT3SS免疫组鸡均存活且无明显的临床症状、无死亡,肝脏和肠黏膜仅出现轻微病理损伤,对照组鸡组鸡攻毒后14 d内死亡率达80%,肝脏和肠黏膜均出显较明显的病变。上述结果表明,SM6ΔT3SS株能够刺激SPF鸡产生较高水平的体液免疫和细胞免疫反应,对SPF鸡的致病性降低,并对鸡有较好的免疫保护效力。本研究为阐明沙门菌致病机制和研发安全有效的沙门菌减毒活疫苗奠定了良好基础,也为沙门菌病的防控提供了新思路。

关键词：肠炎沙门菌 Ⅲ型分泌系统毒力岛形态毒力免疫效力减毒疫苗