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宁波-舟山港口航道水域致病性细菌的毒力基因型鉴定

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应用海洋学学报 2016年第2期35卷 183-189页

作者：管峰陈吉刚毛芝娟杨季芳浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315100 宁波市微生物与环境工程重点实验室浙江宁波315100

根据标准对宁波-舟山港口航道致病性细菌进行分离,结合16S r DNA等方法鉴定分离菌株,研究其生理生化特征,通过PCR方法判断其毒力基因型,分析危害风险.结果表明,4个样品采集区的样品经分离鉴定,菌种分别为埃希氏大肠杆菌(Escherichia co... 详细信息

根据标准对宁波-舟山港口航道致病性细菌进行分离,结合16S r DNA等方法鉴定分离菌株,研究其生理生化特征,通过PCR方法判断其毒力基因型,分析危害风险.结果表明,4个样品采集区的样品经分离鉴定,菌种分别为埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、李斯特菌(Listeria monocytogenes)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等9种,其中粪肠球菌分离率最高.各种细菌的生理生化及形态特征与已报道陆源细菌相近,携带毒力基因型多样性丰富,提示具备致病力.运行Blast程序对所有分离株16S r DNA序列进行比对,发现与已知序列相似度均在98%以上.研究结果对海洋微生物的毒力基因多样性研究以及危害风险评估提供了基础.

关键词：海洋生物学致病性细菌毒力基因型港口航道宁波舟山

肝脓肿高毒力肺炎克雷伯菌耐药性及毒力基因型流行性分析

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中华医院感染学杂志 2016年第24期26卷 5531-5533,5586页

作者：汪强葛玉梅刘建芳王寅孙爱华浙江中医药大学附属第二医院检验科浙江杭州310005 浙江省人民医院检验科浙江杭州310005 杭州医学院浙江杭州310053

目的了解肝脓肿分离的高毒力肺炎克雷伯菌耐药性及毒力基因分型流行性分析,为临床治疗提供参考依据。方法选择2011年-2015年医院肝脓肿患者穿刺液和确诊为肝脓肿患者血液分离112株高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),采用PCR及其产物测序了解上述... 详细信息

目的了解肝脓肿分离的高毒力肺炎克雷伯菌耐药性及毒力基因分型流行性分析,为临床治疗提供参考依据。方法选择2011年-2015年医院肝脓肿患者穿刺液和确诊为肝脓肿患者血液分离112株高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),采用PCR及其产物测序了解上述hvKP菌株毒力基因型。结果 112株高毒力肺炎克雷伯菌临床菌株经过拉丝试验检测,结果显示阳性提示均为高毒力株;ESBLs阳性26株,阳性率为23.2%;除亚胺培南与美洛培南之外,抗菌药物在ESBLs阳性耐药率显著高于ESBLs阴性,差异有统计学意义(P毒力中102株检出毒力基因,其余10株未检出,102株高毒力基因中以K1+rmpA+wcaG基因携带为主,共34株占33.3%。结论肝脓肿分离肺炎克雷伯菌均为高毒力菌株;rmpA、wcaG和K1基因是医院分离hvKP所携带的主要毒力基因型,而K1+rmpA+wcaG为优势毒力基因型携带模式。

关键词：肺炎克雷伯菌肝脓肿毒力基因型

105株携带耶尔森菌强毒力岛大肠杆菌的毒力基因型和部分菌株毒力因子序列研究

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中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 71-73页

作者：吕殿红魏文康黄忠温肖会广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

为了解105株携带耶尔森菌强毒力岛(HPI)的大肠杆菌(E.coli)中相关毒力因子的流行情况和基因序列,根据GenBank中参考序列设计引物,采用PCR方法对广东地区养殖场来源的105分离株HPI+E.coli的fyuA、tsh、iucD、iss 4种毒力基因进行检测,统... 详细信息

为了解105株携带耶尔森菌强毒力岛(HPI)的大肠杆菌(E.coli)中相关毒力因子的流行情况和基因序列,根据GenBank中参考序列设计引物,采用PCR方法对广东地区养殖场来源的105分离株HPI+E.coli的fyuA、tsh、iucD、iss 4种毒力基因进行检测,统计基因类型;并对部分分离株的5种毒力基因(irp2和fyuA、tsh、iucD、iss)进行了克隆与序列分析。结果显示105株HPI+E.coli中4种毒力因子携带情况不尽一致,基因fyuA、tsh、iucD和iss的阳性率分别为55.24%、17.14%、49.52%和23.81%,105株HPI+E.coli共有13种基因型;分析表明,除iss基因与参考序列的同源性在88.0%～90.9%外,irp2、fyuA、tsh、iucD 4种基因与GenBank中参考序列的同源性高达96%以上;广东省养殖场E.coli毒力因子基因型复杂,并以基因型irp2+fyuA+iucD+和仅含irp2+的菌株分离率最高,分别为17.14%和28%。

关键词：大肠杆菌强毒力岛毒力基因型基因序列

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兰州市不同毒力基因型志贺菌致病力研究

中国人兽共患病学报 2009年第3期25卷 273-275页

作者：郗宁韩俭吴玲甘肃省人民医院检验科甘肃兰州730000 兰州大学病原生物学研究所甘肃兰州730000

目的检测2007年兰州市分离的不同毒力基因型志贺菌株致病力情况,探讨毒力基因型与致病力的关系。方法选用不同毒力基因型的志贺菌,以腹腔注射为感染途径,测定其对昆明种小鼠的半数致死量(LD50)。结果7株不同毒力基因型(分别为virA+ipaH+... 详细信息

目的检测2007年兰州市分离的不同毒力基因型志贺菌株致病力情况,探讨毒力基因型与致病力的关系。方法选用不同毒力基因型的志贺菌,以腹腔注射为感染途径,测定其对昆明种小鼠的半数致死量(LD50)。结果7株不同毒力基因型(分别为virA+ipaH+setlA、virA+ial+ipaH+setlA+setlB+sen、virA+setlA、virA+ial+ipaH+setlA+sen、virA+ipaH+setlA+sen、virA+ipaH+setlA+setlB、virA+ial+ipaH+setlA+setlB)志贺菌LD50分别为:1.422×109cfu/mL、6.653×107cfu/mL、6.653×108cfu/mL、1.422×109cfu/mL、1.422×109cfu/mL、6.653×108cfu/mL、3.062×109cfu/mL;结果表明,不同毒力基因型的志贺菌之间存在致病力差异,其中以基因组合为virA+ial+ipaH+setlA+setlB+sen的福氏志贺菌Ⅳ菌株的LD50最小,致病力最强。结论志贺菌的毒力基因型与致病力密切相关。

关键词：志贺菌毒力基因型致病力半数致死量(LD50)

中国香港地区幽门螺杆菌毒力基因型与十二指肠溃疡关系的研究

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中华流行病学杂志 2003年第2期24卷 123-126页

作者：尹焱张建中王振宇夏华向林兆鑫中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 香港大学玛丽医院

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)的重要毒力因子vacA ,cagA ,iceA及插入序列IS在中国香港地区分离菌株中的分布特征及其与十二指肠溃疡的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot方法 ,对 72例证实为Hp感染的胃十二指肠疾病患者的... 详细信息

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)的重要毒力因子vacA ,cagA ,iceA及插入序列IS在中国香港地区分离菌株中的分布特征及其与十二指肠溃疡的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot方法 ,对 72例证实为Hp感染的胃十二指肠疾病患者的胃黏膜标本直接进行检测。结果　72例患者中 ,69例 (95 .8% )感染的Hp菌株为vacAs1c型 ,3例 (4.2 % )为s1a型 ;2 3例(31 .9% )为vacAm1b型 ,46例 (63 .9% )为vacAm2型 ;6例 (8.3 % )为混合型。 63 .9% (46/72 )的患者感染菌株为iceA1型 ,2 9.2 % (2 1 /72 )为iceA2型。cagA的阳性率为88.9% (64/72 )。结论　Hp毒力因子vacA ,cagA和iceA在香港菌株中的分布有自己的特点 ;未发现特定cagA 。

关键词：中国香港地区幽门螺杆菌毒力基因型十二指肠溃疡

嗜水气单胞菌分离株毒力基因型分析及胞外蛋白酶的表达、提取和蛋白研究

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嗜水气单胞菌分离株毒力基因型分析及胞外蛋白酶的表达、提取和蛋...

作者：郭婧南京农业大学

学位级别：硕士

嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,Ah）广泛存在于水环境中,对水生动物、爬行类、两栖类、鸟类及人类均可致病,是一种已引起广泛重视的人畜共患病病原菌。本实验室通过抑制性差减杂交方法得到18个与致病性相关的基因片段,通过与其它... 详细信息

嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,Ah）广泛存在于水环境中,对水生动物、爬行类、两栖类、鸟类及人类均可致病,是一种已引起广泛重视的人畜共患病病原菌。本实验室通过抑制性差减杂交方法得到18个与致病性相关的基因片段,通过与其它致病菌株的序列进行比对,选取3个胞外蛋白酶相关基因epr1、epr2、epr3和UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶基因gneJ。设计并合成4对引物,对本实验室保存的63株嗜水气单胞菌菌株进行PCR检测,了解嗜水气单胞菌不同分离株中这4个毒力基因片段的分布。根据检测结果,可分为5个毒力基因型：epr1+ epr2+ epr3+ gneJ+占47.6%（30/63）;epr1+ epr2+ epr3+ gneJ-占15.9%（10/63）;epr1- epr2+ epr3+ gneJ-占11.1%（7/63）;epr1+ epr2- epr3+ gneJ-占9.5%（6/63）;epr1- epr2- epr3+ gneJ-占15.8%（10/63）,具备四种毒力基因的菌株比例最高。本试验从每个毒力基因型中选取一株代表菌株,进行了溶血性、溶蛋白活性、细胞毒性及小鼠半数致死量的研究。结果表明,epr1、epr2、gneJ均与嗜水气单胞菌致病性相关,epr3在所检测的菌株中都存在。不同毒力基因型的菌株在溶血性、溶蛋白性、细胞毒性及小鼠半数致死量方面存在明显差异。以强毒株J-1为代表株的epr1+epr2+ epr3+ gneJ+为主要毒力基因型,溶血价为1：256,溶蛋白效价为1：512,细胞毒性半数组织培养感染剂量（TCID50）为10-6.54,小鼠半数致死量为4.12×105。随毒力基因携带的减少,四种检测指标均有下降趋势。根据Ah J-1中epr1、epr2、epr3的测序结果,在ORF内设计编码成熟蛋白的引物进行PCR扩增,产物双酶切后定向克隆于表达载体pET-32a（+）中,同时通过双酶切将epr2,epr3在pET-32a（+）中进行串联。四个重组质粒转化表达宿主菌E. coli BL21,经IPTG诱导后epr1,epr2,epr3,epr2-3分别表达分子量为约36.4kDa、15.8kDa、38.2kDa和54kDa的蛋白。四个融合蛋白进行溶蛋白活性检测,epr1和epr2-3表达的蛋白均有明显的溶蛋白圈。免疫转印显示Ah J-1全菌抗血清可以识别这两个融合蛋白。纯化的两个表达蛋白分别免疫小鼠,三免后一周眼眶采血测抗体效价,待效价呈阳性,用50LD50（107CFU）的Ah J-1培养物,腹腔注射免疫后的小鼠,epr1、epr2-3的相对保护率分别为50%、60%。 J-1培养上清经硫酸铵沉淀,离子交换层析和分子筛层析后,可以获得一种纯化的蛋白,分子量约为38kDa,该蛋白具有溶蛋白活性。对其进行二维电泳分析,观察到单一分子量的蛋白点,质谱分析。根据结果,设计引物,在J-1中进行编码该蛋白基因的PCR扩增并测序,结果与NCBI中基因序列比对,J-1中存在该段序列,编码弹性蛋白酶（elastase）.其在细菌致病性中的作用和生物功能还待进一步研究。

关键词：嗜水气单胞菌毒力基因型胞外蛋白酶原核表达免疫保护蛋白组学

中国庄河胃癌高发区幽门螺杆菌毒力基因型菌株感染分布特征

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中华医学杂志 2006年第6期86卷 419-421页

作者：宫月华袁媛中国医科大学第一附属医院肿瘤研究所第三研究室沈阳110001

研究表明,幽门螺杆菌(Hp)致病相关基因(cagA、vacA、ieeA)不同亚型间不仅存在致病性的差异而且其分布也具有明显的地域性。目前,Hp致病基因亚型菌株在中图东北地区感染情况如何报道尚少。辽宁省庄河市是我国北方胃癌高发区.胃癌死亡率... 详细信息

研究表明,幽门螺杆菌(Hp)致病相关基因(cagA、vacA、ieeA)不同亚型间不仅存在致病性的差异而且其分布也具有明显的地域性。目前,Hp致病基因亚型菌株在中图东北地区感染情况如何报道尚少。辽宁省庄河市是我国北方胃癌高发区.胃癌死亡率男性为49.55/10万.女性为22.23/10。研究发现,庄河居民胃黏膜Hp检出率明显高于低发区居民,提示庄河地区不仅胃癌高发且Hp感染亦高流行。[第一段]

关键词：幽门螺杆菌(Hp) 胃癌高发区毒力基因型感染分布菌株致病相关基因中国胃癌死亡率 Hp检出率 vacA

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兰州市区志贺菌毒力基因型及毒力研究

兰州市区志贺菌毒力基因型及毒力研究

作者：郗宁兰州大学

学位级别：硕士

目的:调查兰州市区腹泻患者中志贺菌的感染率和感染型别;确定兰州市区分离志贺菌株的毒力基因型;测定不同毒力基因型志贺菌的毒力,以探讨毒力与毒力基因型的关系。方法:选择兰州市区三家三甲医院门、急诊急性腹泻患者,采用分离培养、... 详细信息

目的:调查兰州市区腹泻患者中志贺菌的感染率和感染型别;确定兰州市区分离志贺菌株的毒力基因型;测定不同毒力基因型志贺菌的毒力,以探讨毒力与毒力基因型的关系。方法:选择兰州市区三家三甲医院门、急诊急性腹泻患者,采用分离培养、生化反应和血清学鉴别确定兰州市区腹泻患者中志贺菌的感染率和感染型别;设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)方法,检测志贺菌肠毒素1基因(setlA和setlB)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关位点基因(ial)以及多重调控基因virA,确定兰州市区分离志贺菌株的毒力基因型;以腹腔注射为感染途径,测定不同毒力基因型的志贺菌对昆明种小鼠的半数致死量(LD50)。结果: 1.从80例急性腹泻患者粪便中分离出志贺菌16株,阳性率为20.0%。其中福氏志贺菌9株,占56.2%,宋内志贺菌6株,占37.5%,痢疾志贺菌1株,占6.2%。同一菌群的不同志贺菌间在生化反应和抗原性方面存在差异。 2.兰州市区的志贺菌毒力基因virA、setlA阳性率最高,为100%;ipaH次之,阳性率为93.7%;ial、sen阳性率分别为56.2%、62.5%;setlB阳性率最低,仅为25.0%。除virA、ipaH、setlA外,宋内志贺菌sen阳性率较高,为50.0%;ial检出率较低,为33.3%,6株宋内志贺菌均未检出setlB。福氏志贺菌ial、setlB、sen阳性率分别为66.7%、44.4%、66.7%均高于宋内志贺菌。 3.7株不同毒力基因型(virA+ipaH+setlA,virA+ial+ipaH+setlA+setlB+sen,virA+setlA,virA+ial+ipaH+setlA+sen,virA+ipaH+setlA+sen,virA+ipaH+setlA+setlB,virA+ial+ipaH+setlA+setlB)志贺菌LD50测定的结果分别为:1.422×10cfu/ml、6.653×10 cfu/ml、阴性、6.653×10 cfu/ml、1.422×10 cfu/ml、1.422×10cfu/ml、6.653×10 cfu/ml;对照宋内志贺菌51334的LD50为3.062×10 cfu/ml。结论: 1.兰州市区腹泻患者中志贺菌的感染率为20.0%左右,感染菌群以福氏志贺菌为主,其次为宋内志贺菌。宋内志贺菌感染的比例相对较高,占37.5%。 2.兰州市区志贺菌中存在virA、ial、ipaH、setlA、setlB、sen毒力基因,以virA,setlA,ipaH较稳定。志贺菌相关毒力基因检测中,福氏志贺菌检出率高于宋内志贺菌。宋内志贺菌携带setlA。 3兰州市区志贺菌的毒力与毒力基因型密切相关,以virA、ial、ipaH、setlA、setlB和sen均阳性的福氏志贺菌Ⅳ型毒力最强。 4.virA,setlA,ipaH基因可作为靶基因用于兰州市区志贺菌的检验。setlB可用于筛选福氏志贺菌Ⅳ型菌株。

关键词：志贺菌兰州市区毒力毒力基因型半数致死量(LD50)

应用多重PCR检测水生动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布

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水产学报 2005年第4期29卷 473-477页

作者：方兵李槿年祖国掌余为一安徽农业大学动物科技学院安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

粘附素(aha1)、气溶素(aerA)和细胞兴奋性肠毒素(alt)是气单胞菌的主要毒力因子。根据aha1、aerA和alt基因序列设计三对引物建立了可同时检测三种毒力基因的多重PCR方法(MPCR)。该方法扩增出气单胞菌的aha1大小为1087bp,aerA为721bp,alt... 详细信息

粘附素(aha1)、气溶素(aerA)和细胞兴奋性肠毒素(alt)是气单胞菌的主要毒力因子。根据aha1、aerA和alt基因序列设计三对引物建立了可同时检测三种毒力基因的多重PCR方法(MPCR)。该方法扩增出气单胞菌的aha1大小为1087bp,aerA为721bp,alt为480bp,其敏感度为102CFU·mL-1。而对金黄色葡萄球菌、恶臭假单胞菌、拟态弧菌以及非致病性气单胞菌均未扩增出任何条带。用限制性内切酶EcoRⅤ、BamHⅠ和FbaⅠ分别酶切PCR扩增产物,均获得与预期一致的酶切图谱。用建立的MPCR对15株水生动物源气单胞菌安徽分离株进行毒力基因检测,结果显示在13株致病性气单胞菌中10株细菌的毒力基因型为alt+aha1+aerA+,2株为alt+aha1-aerA-,1株为alt+aha1+aerA-;alt、aha1和aerA基因在气单胞菌中的携带率分别为100%、84.62%和76.92%。表明气单胞菌安徽分离株的主要毒力基因型是alt+aha1+aerA+的高毒力表型,alt毒力基因普遍存在于不同表型种气单胞菌中。

关键词：多重PCR 水生动物源气单胞菌安徽分离株毒力基因型