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整合素α5β1在正畸大鼠牙龈组织改建过程中力学传导机制的初步研究

整合素α5β1在正畸大鼠牙龈组织改建过程中力学传导机制的初步研...

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作者：徐若君广西医科大学

学位级别：硕士

目的:通过构建正畸大鼠牙龈改建模型,在前期体外实验结果的基础上进一步探讨整合素α5β1参与正畸牙龈改建过程中力学信号传导的作用机制,初步研究正畸过程中牙龈组织感应和传导力学信号、引起组织改建的相关过程。方法:1.选取120只8-1... 详细信息

目的:通过构建正畸大鼠牙龈改建模型,在前期体外实验结果的基础上进一步探讨整合素α5β1参与正畸牙龈改建过程中力学信号传导的作用机制,初步研究正畸过程中牙龈组织感应和传导力学信号、引起组织改建的相关过程。方法:1.选取120只8-10周龄SPF级雄性SD大鼠(由广西医科大学动物实验中心提供)进行实验,实验分为两个部分。第一部分构建正畸牙龈改建动物模型,随机分为2组(各30只):A组-加力组、B组-不加力组(仅安放加力装置,不进行加力);通过将恒力Ni Ti拉簧固定于双侧上颌第一磨牙,以上切牙为支抗,50g力近中牵引第一磨牙,从而构建正畸牙龈改建模型。第二部分构建ATN-161药物干预的正畸牙龈改建动物模型,随机分为2组(各30只):C组-药物干预组、D组-非药物干预组(假处理组),分别于两组大鼠上颌第一磨牙近中局部注射ATN-161(2mg/kg)溶液和等量的生理盐水。分别于安放加力装置后第1、3、7、14、21、28天处死大鼠并取材和制作标本,每个时间点各处死5只。2.苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察不同处理条件下牙龈组织的形态学和病理学变化。3.抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phospha-tase,TRAP)染色判断模型构建情况。4.采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-q PCR)及免疫组化(immunohistochemistry,IHC)染色观测上颌第一磨牙近中牙龈组织中FN、整合素α5、整合素β1、FAK、TGF-β1及COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达情况。应用Image-pro-plus6.0图像分析系统对IHC结果进行蛋白含量的半定量分析,SPSS25.0统计软件和Graphpad prism绘图软件分析和处理实验结果。结果:1.成功构建正畸大鼠牙龈改建模型及其ATN-161药物干预模型。2.HE染色结果显示:A组大鼠在明显的牙移动后,牙龈顶部呈现膨大外观,出现增生,其底部缩窄,类似于“蒂部”;其内胶原纤维排列紊乱,部分大鼠的龈沟上皮出现上皮钉突,结缔组织内少量炎性细胞浸润,其牙龈增生部位出现新生血管。B组大鼠牙龈组织未见明显异常,胶原纤维排列整齐,龈沟上皮未见明显异常,结缔组织内少量炎症细胞浸润。C组和D组大鼠牙龈组织变化差异不大,除结缔组织底部出现大量炎症细胞浸润外,其余变化与A组相似。3.TRAP染色结果显示:A、C、D组大鼠上颌第一磨牙近中面牙槽骨从加力第三天起可见破骨细胞存在;而B组大鼠在牙根周围牙槽骨少见破骨细胞。4.RT-q PCR结果显示:(1)正畸力作用力下,大鼠牙龈组织中整合素α5、FAK、TGF-β1和COL-Ⅰ的m RNA表达量在加力7天和14天时均显示上调,而整合素β1的m RNA表达量在加力14天时显示上调,差异有统计学意义(P0.05);(2)ATN-161对正畸牙龈改建模型进行干预后,大鼠牙龈组织中,整合素α5的m RNA表达量在1天、3天、7天、14天和21天时显示下调,整合素β1的m RNA表达量在14天时显示下调,TGF-β1的m RNA表达量在3天和14天时显示下调,COL-Ⅰ的m RNA表达量在1天、7天、14天和21天时显示下调,差异有统计学意义(P0.05)。5.免疫组化结果显示:(1)正畸力作用下,大鼠牙龈组织中,FN的蛋白表达量在加力14天时升高,整合素α5、整合素β1、COL-Ⅰ的蛋白表达量分别在加力7天、14天和21天时升高,FAK、TGF-β1的蛋白表达量分别在加力7天和14天时升高,差异有统计学意义(P正畸大鼠牙龈组织在受力过程中,FN蛋白表达量在加力7天时降低,整合素α5、TGF-β1和COL-Ⅰ的蛋白表达量分别在加力7天、14天和21天时降低,整合素β1的蛋白表达量在加力7天和14天时降低,FAK的蛋白表达量在加力14天时降低,差异有统计学意义(P正畸过程中牙龈组织的力学信号传导和基质纤维化过程,且在此过程中TGF-β1的活化受到整合素α5β1功能状态的影响。

关键词：正畸动物模型整合素α5β1 牙龈改建力学信号传导

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