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高氧液对反复低温处理正常成纤维细胞培养观察研究

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高氧液对反复低温处理正常成纤维细胞培养观察研究

胃癌组织中胃癌相关成纤维细胞、胃正常成纤维细胞的分离鉴定及增殖情况观察

全国烧伤创面处理、感染专题研讨会

作者：官浩贾赤宇汤进武西安第四军医大学西京医院烧伤科西安第四军医大学西京医院烧伤科西安第四军医大学西京医院烧伤科

目的观察并讨论高氧液对反复低温处理正常成纤维细胞形态功能的影响。探讨高氧习复减轻组织损伤的机理,为冷习复训练提供试验依据。方法将培养的正常成纤维细胞分为高氧处理组、高氧对照组、常氧处理组和常氧对照组,根据已测得降温曲线... 详细信息

目的观察并讨论高氧液对反复低温处理正常成纤维细胞形态功能的影响。探讨高氧习复减轻组织损伤的机理,为冷习复训练提供试验依据。方法将培养的正常成纤维细胞分为高氧处理组、高氧对照组、常氧处理组和常氧对照组,根据已测得降温曲线按一定计划反复予以处理组降温处理,每次处理后37℃水浴迅速复温,继续培养并动态观察:细胞形态变化并以 Image—J 软件分析变化趋势、观察细胞活力变化,扫描电镜观察细胞及细胞链接的超微结构变化、培养液中 LDH 含量测定。结果过冷度范围内(降温最低点)高氧处理组与高氧对照组相比细胞损伤小,且低温对成纤维细胞形态功能、影响小,反复处理后对照组和处理组没有明显差别;过冷度范围内常氧处理组较常氧对照组损伤大,细胞形态,结构变化有明显差异, 细胞经过反复低温处理后较对照组形态变化明显,细胞活力增加(P＜0．05),过冷度以下温差大于15℃常氧处理组较高氧处理组细胞形态明显减小,核浆比例变大,反复处理后连续培养,细胞形态逐渐恢复;细胞活力先降低后增加;出现细胞器脱水,细胞核肿胀。结论高氧液处理可以提高反复低温处理的成纤维细胞耐寒能力,进行冷习复训练时保持高氧状态对对机体组织损伤较小。

关键词：正常成纤维细胞低温处理高氧处理高氧液

来源： cnki会议评论

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山东医药 2018年第31期58卷 5-8页

作者：封兰兰孙伟朱吉海刘珺赵珺刘燕青海大学医学院西宁810016

目的从胃癌组织中分离胃癌相关成纤维细胞(CAFs)及胃正常成纤维细胞(NFs),并鉴定其功能。方法3例胃癌患者,均行胃癌切除术,术中保留胃癌组织及胃正常黏膜组织。采用组织贴壁块法及胶原酶消化法分离胃癌组织中的胃CAFs及胃正常黏膜组织... 详细信息

目的从胃癌组织中分离胃癌相关成纤维细胞(CAFs)及胃正常成纤维细胞(NFs),并鉴定其功能。方法3例胃癌患者,均行胃癌切除术,术中保留胃癌组织及胃正常黏膜组织。采用组织贴壁块法及胶原酶消化法分离胃癌组织中的胃CAFs及胃正常黏膜组织中的胃NFs。原代培养胃CAFs、胃NFs,差速贴壁传代法分离并纯化细胞,差速贴壁20 min。倒置显微镜下观察胃CAFs、胃NFs细胞形态,采用免疫细胞化学染色法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白18(CK18)、波形蛋白(Vimentin)。取3个来源分离的胃CAFs、胃NFs,分别于细胞贴壁24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d采用MTT法测算细胞光密度(OD)值,绘制细胞生长曲线。结果胃癌CAFs细胞大小不一,呈梭形或星形,排列不规则并呈重叠生长;胃NFs细胞均匀一致,呈长梭形,排列规则。胃CAFs细胞存在α-SMA、Vimentin阳性表达,CK18阴性表达,胃NFs细胞存在Vimentin阳性表达,α-SMA、CK18阴性表达。培养3~6天,各来源胃CAFs细胞OD值均高于胃NFs(P均<0.05)。结论成功分离胃CAFs、胃NFs。胃CAFs、胃NFs均存在Vimentin表达。胃CAFs增殖能力优于胃NFs。

关键词：胃癌癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞细胞角蛋白18 波形蛋白 α-平滑肌肌动蛋白细胞增殖

维通注射剂对大鼠腹膜正常与粘连成纤维细胞增殖活性与细胞周期的影响

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中国新药杂志 2011年第3期20卷 245-248页

作者：曾煦欣王春霞王芳杨西晓侯连兵佛山科学技术学院佛山528000 南方医科大学南方医院广州510515 广东药学院广州510006

目的:研究维通注射剂(Weitong injection,WTI)对大鼠腹膜正常成纤维细胞(normal fibroblast,NFB)与粘连成纤维细胞(adhesive fibroblast,AFB)增殖活性与细胞周期的影响。方法:利用原代培养获得大鼠NFB与AFB,以地塞米松为阳性对照药,采用... 详细信息

目的:研究维通注射剂(Weitong injection,WTI)对大鼠腹膜正常成纤维细胞(normal fibroblast,NFB)与粘连成纤维细胞(adhesive fibroblast,AFB)增殖活性与细胞周期的影响。方法:利用原代培养获得大鼠NFB与AFB,以地塞米松为阳性对照药,采用MTT法和流式细胞术考察WTI对2种成纤维细胞(fibro-blast,FB)增殖活性与细胞周期的影响。结果:WTI对AFB的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)显著低于NFB(P细胞周期与空白对照组相比无显著性差异。结论:WTI通过将AFB停滞于G0与G1期,延缓其进入S期,抑制AFB增殖活性,WTI对AFB的作用强于NFB。

关键词：维通注射剂正常成纤维细胞粘连成纤维细胞

卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异

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中国妇幼保健 2011年第6期26卷 909-912页

作者：王晓翊韩方唐慧娟王泽华华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科湖北武汉430022

目的:对卵巢癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)及卵巢正常成纤维细胞(Normalfibroblasts,NFs)进行分离、培养、纯化,并分析两者多种基因表达的差异。方法:①用组织块贴壁培养法获得原代卵巢癌CAFs和卵巢NFs,通... 详细信息

目的:对卵巢癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)及卵巢正常成纤维细胞(Normalfibroblasts,NFs)进行分离、培养、纯化,并分析两者多种基因表达的差异。方法:①用组织块贴壁培养法获得原代卵巢癌CAFs和卵巢NFs,通过胰酶消化法和反复传代法进行细胞的纯化;②观察细胞形态,多种基因的免疫细胞化学染色检测及相应mRNA的半定量分析,对CAFs和NFs进行初步鉴定;③应用RT-PCR的方法对CAFs和NFs中多种基因进行分析比较。结果:①获得了纯化的卵巢CAFs和NFs;②卵巢CAFs的细胞免疫化学染色α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色呈阳性,角蛋白呈阴性,卵巢NFs波形蛋白(Vimentin)阳性,而α-SMA和细胞角蛋白阴性;③卵巢CAFs与NFs中Vimentin与α-SMA的mRNA发现均有表达,但CAFs中表达增加,差异有统计学意义(P细胞因子等。结论:与NFs相比,CAFs在mRNA、蛋白表达等方面均有统计学差异;卵巢癌中CAFs基因表达的检测表明,其基因表达有显著变化,提示这些成纤维细胞可能为卵巢癌细胞的生长提供了最适合的微环境。推测卵巢-宿主界面微环境在上皮性卵巢癌的发展中可能起重要作用。

关键词：卵巢肿瘤癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞成纤维细胞活化蛋白

口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响

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华西口腔医学杂志 2015年第5期33卷 524-528页

作者：陈思源高攀常征宣鸣四川大学华西医院西藏驻成都办事处分院口腔科成都610041 四川大学华西医院口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院头颈肿瘤外科四川大学成都610041

目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs... 详细信息

目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs(实验A组)、NFs(实验B组)与人淋巴管内皮细胞(HLEC)共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力。结果培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。结论口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs。

关键词：口腔鳞状细胞癌癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞人淋巴管内皮细胞

成纤维活化蛋白在眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞中的表达研究

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国际眼科杂志 2021年第8期21卷 1345-1350页

作者：周金蕙王宁母强元刘朱王大庆川北医学院附属医院眼科中国四川省南充市637000 川北医学院眼视光学系中国四川省南充市637000 中国四川省遂宁市中心医院眼科 629000

目的:通过培养、分离、纯化、鉴定眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs),将两种成纤维细胞的生物学特性和成纤维活化蛋白(FAP)表达情况进行对比研究,以进一步探究FAP以及CAFs在眼睑基底细胞癌发病及其发展... 详细信息

目的:通过培养、分离、纯化、鉴定眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs),将两种成纤维细胞的生物学特性和成纤维活化蛋白(FAP)表达情况进行对比研究,以进一步探究FAP以及CAFs在眼睑基底细胞癌发病及其发展中的作用及意义。方法:将眼睑基底细胞癌及眼睑正常皮肤组织块贴壁培养获得原代CAFs及NFs,于倒置相差显微镜下观察纯化的两种细胞第3代的细胞形态并用细胞免疫化学染色(SP法)鉴定两种细胞;MTT法检测细胞生长增殖活力;通过RT-qPCR、Western Blot分别检测其FAP mRNA、蛋白在两种细胞中的表达差异。结果:眼睑CAFs呈长梭形或纺锤形,胞质突明显减少,而胞浆内具有较多颗粒,细胞体积差异明显,排列紊乱且密集,丧失接触抑制,存在明显的重叠生长现象;NFs呈长梭形,但胞浆内颗粒少见,细胞体积较均一,放射状排列,存在接触抑制,未见重叠生长。眼睑CAFs的增殖速度明显快于NFs。RT-qPCR法检测眼睑CAFs中FAP mRNA相对于内参的表达量为3.672±0.221,明显高于眼睑NFs中的含量1.034±0.024(P细胞中FAP蛋白表达水平发现,FAP在眼睑CAFs中高表达,而眼睑NFs中几乎不表达(P细胞癌的发生发展相应地发生了一些变化,进而诱导NFs生物学特性和功能发生改变,最终转变为CAFs。此外,眼睑CAFs较NFs高表达分泌FAP,表明肿瘤细胞微环境中FAP可能参与肿瘤的发生发展,与眼睑基底细胞癌浸润性生长有一定关系。

关键词：成纤维活化蛋白眼睑基底细胞癌癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞

FAP在眼睑基底细胞癌及良性肿瘤相关成纤维细胞中的表达及作用研究

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FAP在眼睑基底细胞癌及良性肿瘤相关成纤维细胞中的表达及作用研究

作者：王宁川北医学院

学位级别：硕士

目的:通过原代细胞培养、分离,获得纯化的眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)、眼睑良性肿瘤皮内痣相关成纤维细胞(BAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs),并检测三种不同成纤维细胞表达成纤维活化蛋白(FAP)的差异,进一步探讨CAFs表达FA... 详细信息

目的:通过原代细胞培养、分离,获得纯化的眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)、眼睑良性肿瘤皮内痣相关成纤维细胞(BAFs)及正常眼睑皮肤成纤维细胞(NFs),并检测三种不同成纤维细胞表达成纤维活化蛋白(FAP)的差异,进一步探讨CAFs表达FAP在眼睑基底细胞癌中的作用及意义。方法:(1)用组织块贴壁法培养获得原代眼睑基底细胞癌CAFs、眼睑良性肿瘤皮内痣相关成纤维细胞(BAFs)及眼睑正常皮肤NFs,胰酶差速消化法和反复传代培养法进行细胞分离、纯化;(2)在倒置相差显微镜下观察CAFs、BAFs及NFs细胞形态,运用免疫细胞组织化学染色法检测三种成纤维细胞中波形蛋白(VIM)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞角蛋白(CK)及FAP表达情况并对其进行鉴定;(3)采用MTT比色法检测3种细胞的生长增殖活力并绘制生长曲线;通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法检测CAFs、BAFs及NFs细胞中FAP的mRNA表达差异;应用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测CAFs、BAFs及NFs中FAP蛋白表达差异。结果:(1)成功获得纯化的眼睑CAFs、BAFs及NFs。(2)眼睑CAFs呈纺锤形或长梭形,细胞大小不一,胞质突减少,胞浆内较多颗粒,增殖较快,排列紊乱不规则,重叠生长现象明显,丧失接触抑制现象;BAFs生长速度介于CAFs与NFs之间,细胞多数呈长梭形,放射状排列,可有重叠生长现象,部分接触抑制作用丧失;NFs呈长梭形,放射状排列,增殖速度较CAFs及BAFs慢,胞浆内颗粒少见,无重叠生长现象,存在接触抑制。(3)细胞免疫化学染色,CAFs组VIM(+)、α-SMA(+)、FAP(+),CK(-);BAFs组VIM(+),α-SMA和FAP表达阴性或弱阳性,CK(-);NFs组VIM(+),CK(-)、α-SMA(-)及FAP(-)。(4)RTQ-PCR法检测CAFs、BAFs、NFs三种不同组织来源的成纤维细胞FAP mRNA扩增含量分别为:3.6715±0.2212,1.4810±0.0904,1.0340±0.0236,用ONE-WAY ANOVA中SNK法进行统计检验,差异具有统计学意义(F=103.676,P细胞中FAP蛋白表达水平,与其内参蛋白相比较,显示CAFs高表达FAP蛋白,BAFs不表达或弱表达,NFs组不表达,存在明显差异。结论:肿瘤微环境在肿瘤发生发展中起着重要作用,其微环境中成纤维细胞在形态、结构、分泌功能等方面发生了变化。眼睑基底细胞癌CAFs、眼睑良性肿瘤BAFs及眼睑正常皮肤NFs生物学特性(如形态结构、生长增殖、生长因子表达等方面)存在显著差异。提示眼睑基底细胞癌肿瘤微环境发生了变化,进一步诱导NFs生物学特性和功能发生变化,转变为BAFs及CAFs。CAFs、BAFs及NFs中FAP表达差异显著,且与肿瘤恶性程度相关,提示FAP在眼睑基底细胞癌中可能发挥着重要作用,可作为眼睑基底细胞癌诊断和治疗的一个新的靶点,但其具体作用机制有待进一步深入研究。

关键词：眼睑BCC 癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞 FAP

基于真皮成纤维诱导条件下胃癌细胞BGC-823的转化现象及其机制

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基于真皮成纤维诱导条件下胃癌细胞BGC-823的转化现象及其机制

作者：徐雯浙江大学

学位级别：硕士

1.研究背景肿瘤转移是威胁人类健康的第一大问题,90%以上的肿瘤病人死于肿瘤远处转移。多数患者在初诊时并未出现明显的肿瘤转移,随着肿瘤的进展而出现肿瘤的转移,但目前对肿瘤转移的相关机制仍在探索中。目前已经明确,肿瘤细胞通过外... 详细信息

1.研究背景肿瘤转移是威胁人类健康的第一大问题,90%以上的肿瘤病人死于肿瘤远处转移。多数患者在初诊时并未出现明显的肿瘤转移,随着肿瘤的进展而出现肿瘤的转移,但目前对肿瘤转移的相关机制仍在探索中。目前已经明确,肿瘤细胞通过外渗作用进入周围组织是肿瘤转移的首要条件。进入组织中的肿瘤细胞首先与细胞外基质直接接触,它会受到正常组织内的细胞及细胞外基质的影响而发生转变,同时,细胞-细胞、细胞-细胞外基质的相互作用共同调节肿瘤细胞生物学行为,包括细胞增殖、表型、分泌等,因此,我们认为正常的成纤维细胞在肿瘤发生及进展过程起关键作用。成纤维细胞是细胞外基质中主要细胞。成纤维细胞不仅可以提供从细胞外微环境的刺激,还可通过旁分泌途径分泌大量的细胞因子。研究指出肿瘤相关的成纤维细胞与肿瘤发生发展密切相关,然而正常的成纤维细胞对肿瘤细胞的作用一直存在争议。正常成纤维细胞抑制永生化的前列腺上皮细胞恶性转化。而在乳腺癌中,成纤维细胞促进了导管内癌转变为浸润癌。而实验方法的不同可能是导致差异结果的一个原因。在实验中,我们通过将胃癌细胞BGC-823s与正常的成纤维细胞进行体外共同培养以模拟体内肿瘤细胞与正常成纤维细胞的相互作用,我们发现,正常成纤维细胞可将胃癌BGC-823s诱导转化为散在的短梭形细胞,该细胞生物学行为与BGC-823截然不同,包括增殖、侵袭、迁移、转移和化疗敏感性。动物实验中,我们证实该细胞成瘤能力明显减低,但转移能力却增强,尤其是淋巴转移能力,我们初步研究发现该群细胞E-钙粘素显著下调,证实该细胞具有上皮间质转化相关的特性。2.实验方法2.1正常成纤维细胞与胃癌细胞BGC-823长期共观察肿瘤细胞大体变化;2.2通过不同荧光素标记成纤维细胞及BGC-823,并进行体外及体内示踪;2.3通过细胞增殖和细胞周期实验检测BGC-823细胞增殖能力,通过迁移和划痕实验检测细胞迁移能力,通过侵袭实验和三维培养检测细胞侵袭能力,并通过药物抑制实验及细胞凋亡检测肿瘤细胞对顺铂和5-FU药物化疗敏感性;2.4通过实时荧光定量PCR,蛋白凝胶电泳及细胞免疫荧光方法观察转化后的BGC-823细胞内E-钙粘素表、波型蛋白、p-连环蛋白和N-钙粘素表达情况,并与未转化的BGC-823细胞对照;2.5将肿瘤细胞通过鼠尾静脉注射建立静脉注射模型观察两组肿瘤细胞在体内分布的差异;2.6通过皮下注射肿瘤细胞建立皮下种植模型观察肿瘤细胞成瘤能力和转移能力;2.7通过荧光示踪方法观察早期肿瘤细胞在体内的情况;2.8通过免疫组化的方法观察各个时间点淋巴结中E-钙粘素表和p-链蛋白表达情况。3.实验结果3.1正常成纤维细胞与胃癌细胞BGCs在体外多次长期共培养诱导肿瘤细胞形成散在分布的短梭形细胞TBGCs;3.2诱导后的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力增强,对顺铂的敏感性明显降低;3.3TBGCs中E-钙粘素表达显著下降,而波型蛋白、p-连环蛋白和N-钙粘素表达升高,提示肿瘤细胞在长期高密度成纤维细胞作用下可能发生上皮间质转化;3.4静脉注射模型中,TBGCs组裸鼠早期即出现淋巴和肠道转移能力;而BGCs组裸鼠则以肺脏转移为主;3.5皮下致瘤模型中TBGCs组裸鼠基本无成瘤能力,表现为淋巴结转移能力增强;4.研究结论正常成纤维细胞可诱导胃癌细胞BGC-823s通过上皮间质转化等机制转化为新的细胞：TBGCs.这种细胞成瘤能力减弱,而侵袭及转移能力增强,并对常规化疗药物耐药。

关键词：正常成纤维细胞共培养上皮间质转化转移 E-钙粘素

眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞的分离培养及生物学特性研究

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眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞的分离培养及生物学特性研究

作者：赵佐芳川北医学院

学位级别：硕士

目的:对眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及眼睑正常成纤维细胞(NFs)进行分离、培养、纯化、鉴定,初步研究CAFs与NFs的细胞形态、生长增殖及骨膜蛋白(PN或POSTN)表达等生物学特性的差异。方法:(1)用组织块贴壁法培养获得原代眼睑基... 详细信息

目的:对眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞(CAFs)及眼睑正常成纤维细胞(NFs)进行分离、培养、纯化、鉴定,初步研究CAFs与NFs的细胞形态、生长增殖及骨膜蛋白(PN或POSTN)表达等生物学特性的差异。方法:(1)用组织块贴壁法培养获得原代眼睑基底细胞癌CAFs和眼睑正常NFs,通过胰酶差速消化法和反复传代培养法进行细胞的分离、纯化;(2)通过倒置相差显微镜观察CAFs和NFs细胞形态,应用免疫细胞化学染色法检测细胞表达的特异性蛋白,对CAFs和NFs进行鉴定;(3)采用MTT比色法对连续培养7天的细胞数量进行检测并绘制生长曲线,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测CAFs与NFs细胞培养上清液中PN的含量,应用免疫荧光细胞化学染色方法检测CAFs与NFs中PN的表达。结果:(1)成功分离出了纯化的眼睑CAFs和NFs;(2)眼睑CAFs呈长梭形,胞质突减少,胞浆内可见较多颗粒,细胞大小不一,生长较快,排列紊乱,有重叠生长现象;眼睑CAFs和NFs的细胞免疫化学染色,前者波形蛋白(VIM)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)呈阳性,细胞角蛋白(CK)呈阴性,后者仅VIM呈阳性,CK、α-SMA、FAP均呈阴性。(3)与NFs相比,眼睑CAFs生长增殖较快,倍增时间较短;ELISA法测定CAFs与NFs细胞培养上清液中PN的含量,分别为((9.26±2.35)ng/ml)和((2.57±0.41)ng/ml);细胞免疫荧光化学染色检测眼睑CAFs中PN表达强于NFs,差异具有统计学意义(P细胞癌中CAFs在形态结构、生长增殖、骨膜蛋白表达等生物学特征存在显著差异,提示眼睑基底细胞癌细胞微环境的变化导致NFs生物学特性和功能的改变而形成了CAFs,同时与眼睑基底细胞癌细胞相互作用,促进或抑制眼睑基底细胞癌的发生发展。

关键词：眼睑基底细胞癌癌相关成纤维细胞正常成纤维细胞分离培养生物学特性