检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=正常发育和性逆转性腺"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗体制备及其在正常发育和性逆转性腺中的表达研究

尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2抗体制备及其在正常发育和性逆转...

引用

作者：王婷茹西南大学

学位级别：硕士

性别决定和性别分化是脊椎动物性腺发育的两个关键事件,涉及多种转录因子、生长因子和性类固醇激素,如Dmrt1、Amh、雌激素等。同样作为性类固醇激素的雄激素却不参与性别决定,而是与精子发生有着密切的关系。Dmrtl (Doublesex and mab-3... 详细信息

性别决定和性别分化是脊椎动物性腺发育的两个关键事件,涉及多种转录因子、生长因子和性类固醇激素,如Dmrt1、Amh、雌激素等。同样作为性类固醇激素的雄激素却不参与性别决定,而是与精子发生有着密切的关系。Dmrtl (Doublesex and mab-3related transcription factor1)是DM家族成员之一,是迄今发现的从无脊椎动物到人最保守的与性别决定相关的基因,它所编码的蛋白质包含一个具有DNA结合能力的保守基序,即DM结构域。Amh(Anti-Mullerian Hormone)是一种糖蛋白,属于TGF-β超家族,诱导雄性哺乳动物缪勒氏管的退化。真骨鱼类虽然没有缪勒氏管,但仍然有Amh表达,那么,它在真骨鱼类性别分化中发挥怎样的作用,还有待研究。真骨鱼类雄激素11-酮基睾酮(11-KT)合成所必需的关键酶是Cypllb2(11β-hydroxylase),它直接催化睾酮转变为11p-羟基睾酮,后者再由11β-HSD催化形成11-KT。真骨鱼类雌激素合成所必需的关键酶是Cypl9ala (aromatase),它直接催化睾酮形成雌二醇。Dmrt1、Amh和Cyp11b2在真骨鱼类性腺发育中均有重要作用,在尼罗罗非鱼也有相应研究,但因缺乏相应的抗体,导致其蛋白水平的研究几乎无法开展。故本研究制备了尼罗罗非鱼Dmrt1、Amh和Cyp11b2多克隆抗体,并对其在正常和性逆转尼罗罗非鱼性腺中蛋白水平的表达进行了初步研究。尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)具有生长速度快、性成熟时间短、繁殖周期短等特点,因此,它是研究性别决定及分化的好材料。且本实验室具有成熟的获得尼罗罗非鱼全雄、全雌鱼苗及人工诱导其性逆转(外源雌激素可诱导XY雄鱼向雌鱼逆转,外源雌激素合成酶抑制剂可诱导XX雌鱼向雄鱼逆转)技术,取材方便快捷,故本实验选择罗非鱼作为实验动物。本研究利用RT-PCR扩增出完整的Dmrt1、Amh和Cyp11b2ORF(open reading frame),将其连接进pCold I表达载体中进行原核表达,重组蛋白经过镍柱亲和纯化并尿素梯度透析复性后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,利用CNBr激活的Sepharose4B对抗体进行亲和纯化,获得Dmrt1、Amh和Cyp11b2多克隆抗体。之后,利用Western blot检测1年龄尼罗罗非鱼性腺组织Dmrt1、Amh和Cypllb2表达,免疫组化方法检测其在尼罗罗非鱼不同发育时期精巢和卵巢组织中表达情况,同时利用实验室已有的Cypl9a1a抗体,检测Dmr1、Amh、Cyp11b2和Cypl9ala在性逆转性腺中的表达情况。 Western blot检测发现,Dmrtl多克隆抗体可以特异的识别Dmrt1重组蛋白,分子量约为35kD,同时,在精巢总蛋白识别单一条带,而在卵巢并未检测到条带,证实Dmrt1抗体具有特异性,且Dmrt1在尼罗罗非鱼只在精巢特异表达,而在卵巢组织几乎不表达。免疫组化检测发现,Dmrt1从性别决定关键时期5dah(dah,days after hatching)开始高表达于XY精巢Sertoli前体细胞,在精巢发育后期表达于Sertoli细胞和输精管上皮细胞。同期的XX卵巢中未见表达。而在外源雌激素E2(Estradiol)诱导XY性逆转过程中,到10-15dah时Dmrt1表达量明显降低,到70dah己完全检测不到,Letrozole(雌激素合成关键酶Cypl9a1a抑制剂)诱导XX性逆转过程中,Dmrt1在15dah时开始表达,随后表达量逐渐升高,到70dah时与XY对照组没有差别。此结果暗示,Dmrt1在尼罗罗非鱼性别决定、精巢维持及性逆转中发挥至关重要的作用。同时,检测性逆转尼罗罗非鱼性腺中Cyp19a1a发现,E2诱导XY性逆转过程中,Cypl9ala在10dah时开始表达,随后表达量逐渐上升,到60dah时与XX对照组没有差别。Letrozole诱导XX性逆转过程中,Cypl9ala表达量逐渐减少并在60dah时消失。有趣的是,在E2和Letrozole处理10-15dah时,性腺组织同时表达Dmrt1和Cypl9alao说明在性逆转过程中,存在雌雄通路的对抗作用。 Western blot检测Amh多克隆抗体发现,该抗体可特异识别出Amh重组蛋白,分子量约为54kD,且在精巢和卵巢组织同时检测到单一条带,证实Amh抗体具有特异性,且Amh在尼罗罗非鱼精巢和卵巢组织均有表达。免疫组化检测发现,Amh在5-180dah均高表达于卵巢颗粒细胞和鞘膜细胞,及精巢叶边细胞和Sertoli细胞。免疫组化检测性逆转性腺发现,Amh在Letrozole诱导XX鱼性逆转过程中表达量逐渐升高,而在E2诱导XY鱼性逆转

关键词： Dmrt1 Amh Cyp11b2 抗体制备 Western blot 免疫组化正常发育和性逆转性腺

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：