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女贞子正丁醇部位提取物及其单体化合物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

女贞子正丁醇部位提取物及其单体化合物对免疫抑制小鼠的免疫调节...

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作者：刘双时西北农林科技大学

学位级别：硕士

免疫抑制性疾病在兽医临床上普遍存在,给养殖业带来巨大损失。而针对免疫抑制性疾病的清除,除开发新型佐剂、新型疫苗外,免疫增强剂的研究也备受关注。女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,性味甘、苦,凉;归肝... 详细信息

免疫抑制性疾病在兽医临床上普遍存在,给养殖业带来巨大损失。而针对免疫抑制性疾病的清除,除开发新型佐剂、新型疫苗外,免疫增强剂的研究也备受关注。女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,性味甘、苦,凉;归肝、肾经;具有补肝肾,强筋骨,明目的功能;主治阴虚内热,腰肢无力,肾虚滑精,视力减退。现代研究表明,女贞子含有萜类、苯乙醇类、黄酮类等多种成分,具有免疫调节、抗炎、抗氧化、保肝等作用。前期研究表明,女贞子正丁醇部位提取物和从该提取物中分离得到的单体化合物羟基酪醇在体外具有较好的免疫调节作用,但其在体内是否仍具有免疫调节作用未知。本研究经液-液萃取法制备得到女贞子正丁醇部位提取物,并通过薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)对女贞子正丁醇部位提取物中的羟基酪醇进行鉴别和含量测定后,借助环磷酰胺小鼠免疫抑制模型,研究了女贞子正丁醇部位提取物和羟基酪醇对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,取得以下结果。(1)女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇的鉴别和含量测定通过液-液萃取法制备得到女贞子正丁醇部位提取物,采用TLC和HPLC法对该提取物中的羟基酪醇进行鉴别和含量测定。结果表明,以氯仿:甲醇:水:甲酸(V:V)=8:2:0.1:0.1为展开剂,展开,取出,晾干,碘蒸气显色,供试品和对照品在色谱相应位置上,显相同颜色斑点;在色谱柱:Utimate-XBC18(250 mm×4.60 mm×5μm),流动相:水:甲醇:甲酸(V:V)=85:15:0.12,检测波长280 nm,流速0.8 m L/min,柱温28℃,进样量5μL的色谱条件下,羟基酪醇的标准曲线为y=6592.5x-43832(r=0.9999),含量在33.33～200μg/m L的范围内与峰面积具有良好的线性关系,所得主峰分离度2.318,理论塔板数11476,精密度、重复性和加样回收率良好。说明该TLC和HPLC法适用于女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇的鉴别和含量测定。经检测女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇含量为1.5964 mg/g。(2)女贞子正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用环磷酰胺免疫抑制模型建立:昆明小鼠12只,随机分为4组,分别为环磷酰胺高、中、低剂量组(200、150、100 mg/kg,腹腔注射,每天1次,连用3 d)和健康组,以小鼠脾脏组织形态变化为评价指标,筛选环磷酰胺造模剂量。结果表明,150和200 mg/kg环磷酰胺组剂量偏高,可造成小鼠脾脏白髓淋巴细胞减少,网状内皮细胞和巨噬细胞增生,而100 mg/kg环磷酰胺仅可造成小鼠白髓内淋巴细胞减少,且免疫抑制程度适度。因此,选择以100 mg/kg环磷酰胺,腹腔注射,连用3 d,建立免疫抑制模型。女贞子正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用:昆明小鼠150只,随机分为6组,分别为女贞子正丁醇部位提取物高、中、低剂量组(800、400、200 mg/kg),阳性药物组(左旋咪唑40 mg/kg),模型组和健康组。除健康组外其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,每天1次,连续3 d,随后灌胃相应药物,每天1次,连续7 d。结果表明,女贞子正丁醇部位提取物不同剂量组小鼠脾脏组织淋巴细胞和髓样细胞明显增多;与模型组相比,不同剂量组胸腺指数和800 mg/kg剂量组小鼠脾脏指数显著升高(P正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠具有显著的免疫增强作用。(3)羟基酪醇对免疫抑制小鼠的免疫调节作用昆明小鼠150只,随机分为6组,分别为羟基酪醇高、中、低剂量组(50、10、2 mg/kg),阳性药物组(左旋咪唑40 mg/kg),模型组和健康组。除健康组外其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,每天1次,连续3 d,随后灌胃相应药物,每天1次,连续7 d。结果表明,羟基酪醇不同剂量组小鼠脾脏组织淋巴细胞明显增多,2 mg/kg剂量组红髓髓样细胞明显增多,10、50 mg/kg剂量组红髓髓样细胞明显减少;不同剂量组胸腺指数显著升高(P<0.05),且3个剂量组间差异显著(P<0.05);2、10 mg/kg剂量组脾脏指数显著升高(P<0.05),50 mg/kg剂量组脾脏指数显著降低(P<0.05)。10、50 mg/kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞增殖活性显著增强(P<0.05);50 mg/kg剂量组小鼠巨噬细胞吞噬活性显著增强(P<0.05)

关键词：女贞子正丁醇部位提取物羟基酪醇免疫调节

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绵萆薢抗炎镇痛活性及其化学成分研究

绵萆薢抗炎镇痛活性及其化学成分研究

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作者：魏鹏第二军医大学

学位级别：硕士

疼痛(pain)是一种复杂的生理心理活动,是临床上最常见的症状之一。根据国际疼痛研究会(IASP)对疼痛(pain)的定义:“一种不愉快的感觉和实际的或潜在的组织损伤所引发的情感经历;或者就这一损伤所做的描述”。疼痛可以理解为机体受到来... 详细信息

疼痛(pain)是一种复杂的生理心理活动,是临床上最常见的症状之一。根据国际疼痛研究会(IASP)对疼痛(pain)的定义:“一种不愉快的感觉和实际的或潜在的组织损伤所引发的情感经历;或者就这一损伤所做的描述”。疼痛可以理解为机体受到来自内外环境的伤害性刺激时出现的一种伴有情绪反应的病理生理过程,常会使患者遭受各种心里痛苦,如:惊慌、害怕、焦虑、悲伤、愤怒、烦躁、失眠等。同时它对于机体的影响也是多方面的,从局部到整体功能,严重者还可以导致生理功能紊乱,甚至可以引发疼痛性休克,而某些长期的剧烈疼痛,对机体已成为一种难以忍受的折磨。目前临床上用于疼痛治疗的药物主要有以下几类:阿片类镇痛药;中枢作用的非阿片类镇痛药;外周作用的镇痛药;复方抗炎镇痛药。目前临床上具有镇痛活性的西药因其化学成分单一、有毒副作用、安全性不高、有一定的成瘾性等缺点而导致其临床使用的局限性。中药和天然产物药作用机制复杂,安全性高,疗效确切,长期使用毒副作用小,从天然药物中寻找高效、低毒、无依赖性的镇痛新药已成为新的发展趋势。绵萆薢是我国常用的传统中药材,始出于《神农本草经》,列为中品,具有祛风,除湿的功能,临床用于治疗尿路感染、小便混浊、乳糜尿、白带过多及风湿性关节炎等症。我国2005版《中国药典》收载了三种萆薢,分为两个品名:(1)粉萆薢Dioscoreacollettii ***(2)绵萆薢相下收两种:绵萆薢Dioscorea septemlobaThunb.或福州薯蓣Dioscorea futschauensis Uline ex ***。绵萆薢Dioscoreaseptemloba Thunb.在我国东南诸省都有分布,主要产于浙江、福建、江西、湖南、湖北西南部、广西东北部、广东北部及贵州西部等省,生于海拔450—750米的山地疏林或灌木从中。近年来,关于绵萆薢的化学成分和药理作用的文献报道很多。从植物绵萆薢的根茎的乙醇提取物中分离得到了很多甾体皂苷类的化合物:薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元、纤细薯蓣苷、原新薯蓣皂苷、原薯蓣皂甙、原新纤细薯蓣苷、原纤细薯蓣苷等,以及一些木脂素等其他的化合物成分。这些化学成分具有多种生物活性:抗肿瘤细胞活性、抗稻瘟霉活性、镇痛抗炎活性和抗骨质疏松的作用等。临床使用绵萆薢的祛风除湿,舒经通络功效来治疗尿路感染、小便混浊、乳糜尿、白带过多及风湿性关节炎、尿道炎、慢性前列腺炎。可见绵萆薢具有镇痛抗炎的临床使用功效,但是目前关于绵萆薢的镇痛药理活性以及镇痛作用机制的文献尚未报道。应用镇痛药理方法学对其总提物、氯仿部位提取物和正丁醇部位提取物进行了镇痛药理活性研究,采用经典的小鼠醋酸扭体法和福尔马林实验等对绵萆薢的乙醇提任铩⒙确虏课惶崛∥镆约罢〈疾课惶崛∥锝幸├砘钚陨秆?结果显示皂苷类成份具有良好的镇痛效果。我们对植物绵萆薢的根茎进行了乙醇提取,并对其乙醇提取物应用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行了分步骤萃取,并进一步通过活性导向对于目标化合物进行了分离和纯化:利用硅胶、sephadex LH-20、反向硅胶及HPLC等分离手段,从绵萆薢氯仿部位提取物中分离4个化合物,鉴定了3个化合物,主要为甾醇类化合物;从正丁醇部位分离得到5个化合物,鉴定了5个化合物,主要是甾体皂苷类化合物。应用理化常数测定和现代光谱技术(UV,IR,MS,H-NMR,C-NMR)对这个8个化合物进行了鉴定。实验结果表明:受试小鼠口服给药剂量为0.5g/kg,2g/kg和8g/kg绵萆薢总提取物后,对腹腔注射醋酸溶液、足底皮下注射福尔马林溶液引发的疼痛以及在小鼠热板实验中对热刺激引发的疼痛的耐受性有显著提高;在二甲苯致小鼠耳肿胀实验中,总提物的高、中剂量都具有显著的局部抗炎作用。在小鼠热板拮抗实验中,和阳性拮抗组对比,发现受试组给拮抗剂后,出现与阳性拮抗组类似的实验结果,推测绵萆薢总提物的镇痛药理作用机制可能与中枢阿片受体类药物相同,还需要进一步的研究深入和探索。

关键词：绵萆蔛镇痛乙醇提取物氯仿部位提取物正丁醇部位提取物甾体皂苷

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