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次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型EL/4细胞系的建立

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江苏大学学报（医学版） 2011年第4期21卷 285-288页

作者：龚文禚娅蒋砚秋潘晓园邵启祥江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学研究室江苏镇江212013

目的:建立稳定的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase,HG-PRT)缺陷型EL/4细胞系,为小鼠T细胞杂交瘤的制备奠定基础。方法:通过乙基甲磺酸(ethyl methanesulfonate,EMS)提高EL/4细胞的基础突变率,用8-氮杂鸟嘌呤(8-Azaguanine,8-AG)从5μg/ml到80μg/ml浓度逐渐筛选出对8-AG有稳定抗性的细胞株EL/4,并对其生物性状与基因表型进行鉴定。结果:通过筛选获得能够耐受高浓度(80μg/ml)8-AG的EL/4细胞,并能长期在20μg/ml 8-AG培养液中正常生长,但不能耐受次黄嘌呤-氨甲蝶呤-胸腺嘧啶(hypoxanthine-aminopterin-thymidine,HAT)培养基(3 d全部死亡),RT-PCR未能从该EL/4细胞中检测出HGPRT基因的表达,由此可见该EL/4细胞的HGPRT基因发生突变或者缺失。将该细胞经克隆后获得单克隆细胞株,并命名为突变的EL/4(mutant EL/4,mEL/4)。该细胞株能与磁珠分离的小鼠脾脏来源的CD4+T细胞在PEG作用下顺利进行融合。结论:成功建立了HGPRT缺陷型EL/4细胞系mEL/4,为制备T细胞杂交瘤奠定了基础。

关键词：乙基甲磺酸 8-氮杂鸟嘌呤次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶突变 EL/4淋巴瘤细胞

日本血吸虫中国株次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶真核重组质粒的构建及其动物免疫保护性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 565-569页

作者：余俊龙汪世平何卓戴橄徐绍锐刘雪琴中南大学湘雅医学院寄生虫学系长沙410078

目的克隆日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长编码基因,研究其DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护作用。方法将全长SjHGPRT基因克隆到真核表达载体pcD- NA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT,用经双酶切、PCR和测序鉴定正确... 详细信息

目的克隆日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长编码基因,研究其DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护作用。方法将全长SjHGPRT基因克隆到真核表达载体pcD- NA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT,用经双酶切、PCR和测序鉴定正确的真核表达质粒免疫昆明小鼠3次,每次间隙2周,第3次免疫后第2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42 d处死小鼠,收集成虫、肝脏和24 h粪便,计算减虫率和减卵率。结果成功构建真核表达质粒pcDNA3- SjHGPRT。动物免疫实验结果显示:pcDNA3-SjHGPRT疫苗组减虫率23.17%、肝减卵率41.64%、粪减卵率40.57%,每雌虫子宫内卵减卵率26.95%,与对照组相比差异均具有统计学意义(P次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶DNA疫苗可诱导抗血吸虫卵胚发育或抗生殖作用,具有潜在的疫苗研究与开发价值。

关键词：日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 DNA疫苗

成体兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的打靶研究

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实验动物与比较医学 2010年第4期30卷 233-240页

作者：王伟张传山郭毅谷瑞环丁雷姚刚陈学进新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 新疆医科大学一附院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830052 上海交通大学医学院实验动物科学部上海200025 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040

目的构建兔HPRT基因打靶载体。方法在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPR乃基因BAC克隆（LBNL1—304M19）的基础上，利用Red重组系统，从此克隆上将一段12．... 详细信息

目的构建兔HPRT基因打靶载体。方法在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPR乃基因BAC克隆（LBNL1—304M19）的基础上，利用Red重组系统，从此克隆上将一段12．5kb无启动子的HGPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上，产生pKS-HGPRT质粒。然后基于pKS-HGPRT和pEGFP—C1-SD1211质粒，构建了含有绿色荧光蛋白（GFP）及新霉素（neo）筛选标记基因的打靶载体pKS-HGPRT-GFP—neo。结果将线性化的打靶载体通过脂质体转染的方法整合到成体兔成纤维细胞基因组中，利用G418及6-TG进行细胞克隆的抗药物筛选，共得到抗性细胞克隆20个。对细胞克隆进行PCR及测序初步鉴定，获得8个发生同源重组的细胞克隆，还需利用Southern blotting做进一步验证。结论成功快速地构建了且PR丁基因敲除型打靶载体，为下一步进行体细胞核移植制备HGPRT基因敲除转基因克隆兔奠定基础。

关键词：基因敲除兔成纤维体细胞次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶细胞筛选

金鱼(红龙睛)次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的分离及特性初步研究

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中国生物化学与分子生物学报 1988年第1期 56-60页

作者：于建康,陆德裕中国科学院发育生物学研究所中国科学院发育生物学研究所北京北京

从金鱼肝脏分离并部分纯化了HGPRT。初步结果表明,该酶的分子量为78,000左右。由3个亚基组成,每个亚基的分子量约为27,000。金鱼的HGPRT很稳定,在85℃加热10分钟,至少保留80％的酶活性。该酶与PRPP的反应产物在淀粉凝胶电泳图谱上出现... 详细信息

从金鱼肝脏分离并部分纯化了HGPRT。初步结果表明,该酶的分子量为78,000左右。由3个亚基组成,每个亚基的分子量约为27,000。金鱼的HGPRT很稳定,在85℃加热10分钟,至少保留80％的酶活性。该酶与PRPP的反应产物在淀粉凝胶电泳图谱上出现两条反应带。

关键词：淀粉凝胶电泳次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶

慢性吗啡处理对大鼠嘌呤核苷酸补救合成酶基因表达的影响

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中国药理学通报 2003年第3期19卷 357-359页

作者：刘剑凯洪敏张家颖张莲芝吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室长春130021

对一些原代细胞及细胞系的体外研究表明，吗啡或其它阿片类大多抑制脑来源细胞的DNA或RNA合成，而促进脑外来源细胞的DNA或RNA合成，有关机制还不清楚。吗啡或其它阿片类是否通过干扰核苷酸代谢相关酶的基因表达影响核苷酸代谢，进而影... 详细信息

对一些原代细胞及细胞系的体外研究表明，吗啡或其它阿片类大多抑制脑来源细胞的DNA或RNA合成，而促进脑外来源细胞的DNA或RNA合成，有关机制还不清楚。吗啡或其它阿片类是否通过干扰核苷酸代谢相关酶的基因表达影响核苷酸代谢，进而影响核酸代谢？国内外尚未见此类研究报道。中枢神经系统调控阿片类产生的躯体依赖与精神依赖。脑组织中只能进行嘌呤核苷酸的补救合成。本文采用反转录一聚合酶链反应RT-PCR检测吗啡依赖大鼠部分组织中嘌呤核苷酸补救合成途径的两个关键酶次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶HGPRT和腺苷激酶AK的mRNA含量。

关键词：大鼠吗啡次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶腺苷激酶基因表达

Lesch-Nyhan综合征8例临床特征及HPRT1基因变异分析

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临床儿科杂志 2023年第12期41卷 931-936页

作者：卢婷婷陆相朋廉文君张尧郑宏杨艳玲河南中医药大学第一附属医院河南郑州450000 河南中医药大学儿科医学院河南郑州450000 北京大学第一医院北京100034

目的分析Lesch-Nyhan综合征的临床特征及HPRT1基因变异特点,以提升对该病的认识。方法回顾性分析2015年7月至2019年11月诊断并随访的8例患儿的临床表现、实验室检查及基因检测结果,总结患儿的临床特征及HPRT1基因变异特点。结果8例患儿... 详细信息

目的分析Lesch-Nyhan综合征的临床特征及HPRT1基因变异特点,以提升对该病的认识。方法回顾性分析2015年7月至2019年11月诊断并随访的8例患儿的临床表现、实验室检查及基因检测结果,总结患儿的临床特征及HPRT1基因变异特点。结果8例患儿均为男性,于3月龄至11月龄起病,主因发育落后就诊,同时有锥体系及锥体外系症状,4例在就诊前已出现自残行为,4例目前尚未出现自残行为,血清尿酸不同程度增高。HPRT1基因检测出6种变异(c.609+5G>A、exon 2-3 del、c.131G>A、exon7-8 del、c.384+2T>A、c.212G>A)。经口服碳酸氢钠片、别嘌呤醇片、巴氯芬及家庭康复等治疗后,5例患儿脑损伤症状缓解,1例窒息死亡,1例死于肺部感染,1例未规律服药和复查,病情加重。结论Lesch-Nyhan综合征患者的临床症状轻重不一,主要临床特征为神经系统功能障碍、自残行为、高尿酸血症,基因测序是确诊的关键,对症治疗可改善症状。

关键词： Lesch-Nyhan综合征次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶自残行为高尿酸血症 HPRT1基因

芒果苷对高尿酸血症小鼠血尿酸及嘌呤代谢相关酶表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第2期25卷 55-59页

作者：林华袁丽仙高丽辉李玲牛艳芬昆明医科大学生物医学工程研究中心昆明650500 云南省曲靖市第二人民医院云南曲靖655000

目的:研究芒果苷对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸的影响以及对磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPS),磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶(PRPPAT)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT) mRNA表达水平的影响。方法:雄性昆明种小鼠60只,随机分为正... 详细信息

目的:研究芒果苷对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸的影响以及对磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPS),磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶(PRPPAT)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT) mRNA表达水平的影响。方法:雄性昆明种小鼠60只,随机分为正常组、高尿酸血症模型组、芒果苷1. 5,3. 0,6. 0 mg·kg^-1组、别嘌醇组(1. 0 mg·kg^-1),每组10只。按10 m L·kg-1每天灌胃给药2次,连续10次,给药后1 h再灌胃给予氧嗪酸钾(500. 0 mg·kg^-1)诱导形成高尿酸血症小鼠。磷钨酸法测血清尿酸水平,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小鼠肝脏PRPS,PRPPAT和脑组织中HGPRT mRNA的表达水平。结果:灌胃给予氧嗪酸钾后,与正常组比较,模型组小鼠血尿酸水平显著升高(P 嘌呤代谢相关酶PRPS,PRPPAT和HGPRT mRNA的表达无关。

关键词：芒果苷高尿酸血症磷酸核糖焦磷酸合成酶磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响

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中国实验诊断学 2010年第2期14卷 162-164页

作者：李昆何海涛李鸿梅刘剑凯洪敏吉林大学白求恩医学院生物化学教研室吉林长春130021 吉林大学护理学院

目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢酶的影响。方法将50只雄性Wis-tar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。采用real-timePCR的方法检测大鼠脑皮质中腺苷脱氨酶(ADA... 详细信息

目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢酶的影响。方法将50只雄性Wis-tar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。采用real-timePCR的方法检测大鼠脑皮质中腺苷脱氨酶(ADA)、黄嘌呤氧化酶(XO)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)和腺苷激酶(AK)mRNA的表达水平。结果海洛因组ADA、XO的mRNA比对照组明显升高(P嘌呤核苷酸的分解代谢,降低合成代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。

关键词：嘌呤核苷酸海洛因腺苷脱氨酶黄嘌呤氧化酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶腺嘌呤磷酸核糖转移酶腺苷激酶

嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸代谢关键酶基因表达的影响

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中国实验诊断学 2012年第9期16卷 1556-1559页

作者：崔佳乐洪新雨赵丽艳刘剑凯洪敏吉林大学白求恩医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021 吉林大学第一医院神经外科吉林长春130021 吉林大学第二医院检验科吉林长春130041 吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸分解代谢关键酶腺苷脱氨酶(ADA)、嘌呤核苷酸补救合成关键酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因表达的影响,阐明海洛因对垂体嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对... 详细信息

目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸分解代谢关键酶腺苷脱氨酶(ADA)、嘌呤核苷酸补救合成关键酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因表达的影响,阐明海洛因对垂体嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对抗作用。方法建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的雄性Wistar大鼠随机分成对照组(生理盐水)、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因组、海洛因+核苷酸组(同时给药)、海洛因戒断3d组、海洛因戒断9d组、核苷酸3d组(海洛因停药后给核苷酸3d)及核苷酸9d组(海洛因停药后给核苷酸9d)(每组10只)。检测垂体组织内ADA及HGPRT基因表达的情况。结果与对照组比较,海洛因组、戒断3d组大鼠垂体ADA mRNA水平有所增高,但差异均无显著性(P>0.05)。垂体组织核苷酸组HGPRT mRNA水平高于对照组(P0.05)。结论海洛因有增强大鼠垂体组织ADA基因表达,减弱HGPRT的基因表达作用,但作用不显著;补偿嘌呤核苷酸保持海洛因依赖大鼠垂体ADA和HGPRT基因表达的相对稳定。

关键词：海洛因嘌呤核苷酸腺苷脱氨酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶垂体