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次郎柿与上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究

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次郎柿与上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究

作者：刘艺河北农业大学

学位级别：硕士

本研究以次郎柿与上西早生柿两种甜柿组培苗叶片为外植体,通过对抗生素筛选条件和根癌农杆菌介导次郎柿与上西早生柿遗传转化条件的优化,建立了次郎柿与上西早生柿遗传转化体系,将ACC氧化酶的RNAi基因导入次郎柿与上西早生柿组培苗中,... 详细信息

本研究以次郎柿与上西早生柿两种甜柿组培苗叶片为外植体,通过对抗生素筛选条件和根癌农杆菌介导次郎柿与上西早生柿遗传转化条件的优化,建立了次郎柿与上西早生柿遗传转化体系,将ACC氧化酶的RNAi基因导入次郎柿与上西早生柿组培苗中,以期通过转基因的方法抑制ACC氧化酶的表达,提高跃变型果实的耐贮性能。主要取得以下研究结果: 1次郎柿转基因体系的建立 1.1研究了抗生素对叶片再生的影响,确定了适宜的抗生素浓度。通过次郎柿叶片及组培苗对抗生素的敏感性试验,结果表明:在抗性苗生长过程中,用200mg/L头孢霉素和30mg/L壮观霉素做为筛选转化抗性苗的筛选浓度。 1.2次郎柿转基因工艺路线采用继代四年半的组培苗,取其顶端2～3片刚展开的嫩叶,从叶基部剪取4mm×4mm大小的叶片,叶背朝上,接种在DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上;暗预培养4d后,用OD值为0.5的菌液浓度侵染叶片10 min,侵染时加入50 mg/L的乙酰丁香酮。将侵染后的叶片外植体,再转到DKW(1/2N)+ZT 1.0mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上共培养3d,之后移入DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L的培养基上黑暗脱菌培养3d;最后转入DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L+Sp 30 mg/L的培养基上光照选择培养,每25d继代一次。继代7～8次后转入DKW+ZT 1.0 mg/L+Sp 30 mg/L+Cef200 mg/L的培养基中。获得了次郎柿ACC氧化酶的RNAi转基因苗。经GUS染色及PCR检测得到27株转基因植株。 2上西早生柿转基因体系的建立 2.1研究了抗生素对叶片再生的影响,确定了适宜的抗生素浓度。通过上西早生柿叶片及组培苗对抗生素的敏感性试验,结果表明:在抗性苗生长过程中,用200mg/L头孢霉素和30mg/L壮观霉素做为筛选转化抗性苗的筛选浓度。 2.2上西早生柿转基因工艺路线采用继代四年半的组培苗,取其顶端2～3片刚展开的嫩叶,从叶基部剪取4mm×4 mm大小的叶片,叶背朝上,接种在DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上;暗预培养3d后,用OD值为0.3的菌液浓度侵染叶片10 min,侵染时加入100 mg/L的乙酰丁香酮。将侵染后的叶片外植体,再转到DKW(1/2N)+ZT 1.0mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上共培养4d,之后移入DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L的培养基上黑暗脱菌培养3d;最后转入DKW(1/2N)+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L+Sp 30 mg/L的培养基上光照选择培养,每25 d继代一次。继代7～8次后转入DKW+ZT 1.0 mg/L+Sp 30 mg/L+Cef200 mg/L的培养基中。获得了上西早生柿ACC氧化酶的RNAi基因转基因苗。经GUS染色及PCR检测得到4株转基因植株。

关键词：次郎上西早生农杆菌介导遗传转化

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CPPU对次郎果实内含物的影响

江西农业大学学报 2005年第2期27卷 221-224页

作者：范国荣刘勇刘善军罗来水江西农业大学园林与艺术学院江西南昌330045 江西农业大学农学院江西南昌330045

以甜柿次郎为试材,10～25mg/L的CPPU于花后10d喷果,结果表明:均显著提高果实单果重;提高了果实还原糖、可溶性糖、总糖和TSS含量及固酸比;促进果实淀粉降解;对果实Vc含量影响不大.

关键词： CPPU 次郎碳水化合物生长发育内含物

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甜柿品种次郎在云南保山的引种表现

中国果树 2004年第4期 22-24页

作者：邹云昌云南省保山市隆阳区果树蔬菜技术推广站 678000

保山市是云南省柿树老产区,生产中栽培的均为涩柿品种.保山市林业局吴学潮等1976年从山东省果树研究所引进日本甜柿品种次郎,在当地零星试种.以笔者为主参加了从1990年开始的次郎成片试种、适宜栽培技术总结和适宜栽植区调查.经多年试... 详细信息

保山市是云南省柿树老产区,生产中栽培的均为涩柿品种.保山市林业局吴学潮等1976年从山东省果树研究所引进日本甜柿品种次郎,在当地零星试种.以笔者为主参加了从1990年开始的次郎成片试种、适宜栽培技术总结和适宜栽植区调查.经多年试种表明,该品种在保山市生长结果表现良好,有较大的发展前景.2001年保山市开始大面积发展,截至2003年末,该品种栽培面积已达1667 hm2.

关键词：栽培柿品种次郎云南引种

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次郎甜柿引种表现及栽培技术

落叶果树 2008年第2期40卷 46-47页

作者：颜景刚马金增卜祥华山东省曲阜市鲁城街道办事处 273100 曲阜市小雪镇农业服务站

2003年3月引入次郎甜柿,经试栽该品种平均单果重246g,可溶性固形物含量15.5%-16.6%,味甜,肉质致密而脆,耐贮运。采用3m×4m株行距和主干疏层形,合理修剪,疏蕾疏果,加强肥水管理,栽后第2年开花株率36%,第3年平均666.7m^2产量176kg,第4年6... 详细信息

2003年3月引入次郎甜柿,经试栽该品种平均单果重246g,可溶性固形物含量15.5%-16.6%,味甜,肉质致密而脆,耐贮运。采用3m×4m株行距和主干疏层形,合理修剪,疏蕾疏果,加强肥水管理,栽后第2年开花株率36%,第3年平均666.7m^2产量176kg,第4年638kg,第5年达1078kg。

关键词：次郎甜柿引种表现栽培技术