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榆干离褶伞溶栓酶对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用

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食品科学 2021年第17期42卷 121-126页

作者：李芳芳张蕊萌丛贺沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为4组,即正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外,其余各组每日按10 mL/kg mb灌胃体积分... 详细信息

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为4组,即正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外,其余各组每日按10 mL/kg mb灌胃体积分数40%的酒精诱导肝损伤。LUFE低、高剂量组分别以100、400 mg/kg mb的剂量灌胃LUFE,正常对照组和模型组以等量生理盐水灌胃,共28 d。末次给药后次日处死大鼠,苏木精-伊红染色观察大鼠肝组织病理形态学变化,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、清蛋白(albumin,Alb)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平。蛋白免疫印迹法检测抑制性-κBα(inhibitory kappa B-alpha,I-κBα)蛋白表达水平和核转录因子(nuclear factor,NF)-κB p65磷酸化(p-NF-κB)水平。结果:LUFE干预能减轻肝组织的病理性损伤,抑制酒精所致的血清AST、ALT、γ-GT、ALP活力及TG、T-CHO、LDL-C、T-BIL水平的升高和Alb水平的降低,其中高剂量LUFE能达到显著抑制效果(P干预能提高I-κBα蛋白表达水平,抑制NF-κB p65蛋白的磷酸化,其中高剂量LUFE能达到显著改善效果(P<0.05,P<0.01)。结论:LUFE对酒精所致大鼠肝损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化、抗炎作用有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶酒精肝损伤

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榆干离褶伞溶栓酶对大鼠动脉血栓的抑制作用

食品科学 2021年第1期42卷 180-186页

作者：李芳芳卫莹刘雪沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立... 详细信息

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立颈动脉血栓模型。造模前阳性对照组和LUFE低、高剂量组分别以10 mg/kg mb阿司匹林以及100、400 mg/kg mb LUFE灌胃7 d。观察血栓质量和颈动脉血管组织病理变化;酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)、可溶性血栓调节蛋白(soluble thrombomodulin,sTM)、E-选择素和组织因子(tissue factor,TF)水平;流式细胞仪检测血小板CD62P表达水平。为观察LUFE对血小板功能的影响,在体外以胶原诱导血小板活化,观察LUFE对大鼠富血小板血浆中P-选择素、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)和血小板膜糖蛋白IIbIIIa(glycoprotein IIbIIIa,GPIIbIIIa)水平的影响;Western blot方法观察LUFE对大鼠血小板磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)表达水平的影响。结果:LUFE能明显减轻血栓质量和血管受损程度,抑制血栓模型大鼠血清sTM、E-选择素、TF、TNF-α、IL-6和PAF水平的上调,下调血小板CD62P的表达。同时,在体外LUFE能够下调胶原诱导的富血小板血浆中P-选择素、β-TG和GPIIbIIIa水平,下调血小板PI3K、Akt和p38 MAPK蛋白的磷酸化水平。结论:LUFE具有抗血栓作用,其机制可能与LUFE对血管内皮细胞的保护作用以及对血小板活化的抑制作用有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶抗血栓作用血管内皮细胞血小板

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠血管内皮的保护作用

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食品科学技术学报 2023年第1期41卷 56-66页

作者：苏新李钰李芳芳张蕊萌沈明花延边大学医学院吉林延吉133002

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LU... 详细信息

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LUFE(400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),阳性对照组于饮食诱导第5周开始灌胃阿托伐他汀钙片(5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),分别于诱导4、8周后进行指标检测。采用苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理学形态变化,油红O染色观察主动脉内膜脂质斑块的分布情况。检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LD L-C)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、内皮素-1(ET-1)、6-酮前列腺素F1α(6-keta-PGF1α)水平,并计算动脉粥样硬化指数。采用Western blot法检测主动脉核因子E2相关因子2(Nrf2)、沉默信息调节因子3(Sirt3)、乙酰化超氧化物歧化酶2(Ac-SOD2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。结果表明:LUFE可减轻高脂血症大鼠主动脉病理性损伤,减少主动脉内膜脂质斑块分布的相对面积,降低血浆TC、TG、LD L-C、ET-1、MDA水平,增加6-keta-PGF1α、CAT和SOD2的水平,上调主动脉组织Nrf2、HO-1、Sirt3蛋白表达,降低主动脉组织Ac-SOD2的相对蛋白表达。研究结果证实,LUFE可减轻高脂血症所致的大鼠血管内皮损伤,其机制可能与降低血脂、减轻氧化应激损伤有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶高脂血症血管内皮动脉粥样硬化

榆干离褶伞溶栓酶对酒精损伤血管内皮细胞的保护作用

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食品科学 2020年第5期41卷 108-114页

作者：李芳芳丛贺沈明花延边大学医学院吉林延吉133002

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(fibrinolytic enzyme from Lyophyllum ulmarium,LUFE)对酒精所致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制。方法:以酒精诱导HUVECs损伤,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;吖啶橙-溴化乙啶双染法观察细胞凋亡;用荧光染料双氢罗丹明123和罗丹明123分别检测细胞总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体跨膜电位;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、细胞色素c、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved caspase)-9和cleavedcaspase-3的表达水平。结果:LUFE能够提高内皮细胞存活率,降低LDH和MDA水平,提高SOD、GSH-Px活力,减少ROS的生成,并抑制酒精所致的线粒体跨膜电位的下降和细胞凋亡。Western blot结果表明,LUFE提高Bcl-2蛋白表达水平,并减少细胞色素c、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达。结论:LUFE对酒精所致血管内皮细胞的损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制酒精诱导的线粒体途径细胞凋亡有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶人脐静脉内皮细胞酒精保护作用

榆干离褶伞溶栓酶对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

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食品科学 2016年第1期37卷 171-175页

作者：周广亮丛贺全吉淑沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:探讨榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,L.u)溶栓酶对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用。方法:用H_2O_2诱导HUVEC氧化损伤,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨ_m)和总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blotting法检测Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表达水平。结果:L.u溶栓酶可显著提高HUVEC的存活率,明显抑制H_2O_2诱导的细胞内ROS生成和线粒体跨膜电位的下降,并能降低Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达水平。结论:L.u溶栓酶对氧化应激损伤的HUVEC有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶人脐静脉内皮细胞线粒体跨膜电位活性氧凋亡

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用

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食品与机械 2023年第4期39卷 156-162页

作者：李钰苏新张俊慧张蕊萌沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关... 详细信息

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关蛋白的表达水平。结果:LUFE可以缓解高脂血症大鼠的肝组织损伤,降低血浆血脂水平、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,下调TLR4、MyD88和磷酸化的PI3K、Akt、NF-кB水平。结论:LUFE通过调控PI3K/Akt/NF-кB和TLR4/MyD88/NF-кB信号通路,可以保护高脂血症所致的大鼠肝损伤。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶高脂血症肝损伤炎症

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榆干离褶伞发酵液对血管内皮细胞的保护作用

食品与生物技术学报 2014年第2期33卷 177-180页

作者：彭瀛周广亮沈明花延边大学医学院

为了探讨榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,简写为LU)发酵液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,分别用20、40、80 mg/L LU干预HUVEC后用过氧化氢诱导凋亡,采用MTT法观察LU发酵液对细胞存活率的影响;通过比色法测定细胞上清液乳酸脱氢... 详细信息

为了探讨榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,简写为LU)发酵液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,分别用20、40、80 mg/L LU干预HUVEC后用过氧化氢诱导凋亡,采用MTT法观察LU发酵液对细胞存活率的影响;通过比色法测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测bcl-2、bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白质的表达。结果显示:LU发酵液显著提高内皮细胞的存活率,降低细胞上清液LDH活性,抑制H2O2诱导的细胞凋亡,降低bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,提高bcl-2的表达。这说明LU发酵液对血管内皮细胞有保护作用,其机制可能与抑制凋亡有关。

关键词：榆干离褶伞发酵液血管内皮细胞凋亡保护作用

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榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究

食品与发酵工业 2007年第8期33卷 45-47页

作者：沈明花金成俊延边大学医学部分子生物学实验室吉林延吉133000 韩国朝鲜大学校自然科学大学

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明... 详细信息

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn^(2+)和Mg^(2+)激活酶活性,而Cu^(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶纯化溶栓活性

榆干离褶伞溶栓酶对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护机制研究

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食品科技 2017年第3期42卷 268-271页

作者：王玉娇周广亮刘雪沈明花延边大学医学院延吉133000

目的:研究榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,LU)溶栓酶对氧化应激所致损伤血管内皮细胞的保护机制研究。方法:以过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性来分析... 详细信息

目的:研究榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,LU)溶栓酶对氧化应激所致损伤血管内皮细胞的保护机制研究。方法:以过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性来分析细胞损伤程度;ELISA方法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;硝酸还原酶法测定细胞NO含量;Western印记法检测NF-κB p65、iNOS和eNOS蛋白表达。结果:LU溶栓酶预处理后显著提高细胞存活率,抑制过氧化氢所致的LDH、TNF-α和NO水平的升高,同时抑制NF-κB、p-NF-κB、iNOS和eNOS的表达。结论:LU溶栓酶对血管内皮细胞的保护作用是通过下调NF-κB信号通路来实现的。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶血管内皮细胞氧化应激炎症核转录因子κB