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榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠血管内皮的保护作用

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食品科学技术学报 2023年第1期41卷 56-66页

作者：苏新李钰李芳芳张蕊萌沈明花延边大学医学院吉林延吉133002

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LU... 详细信息

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LUFE(400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),阳性对照组于饮食诱导第5周开始灌胃阿托伐他汀钙片(5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),分别于诱导4、8周后进行指标检测。采用苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理学形态变化,油红O染色观察主动脉内膜脂质斑块的分布情况。检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LD L-C)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、内皮素-1(ET-1)、6-酮前列腺素F1α(6-keta-PGF1α)水平,并计算动脉粥样硬化指数。采用Western blot法检测主动脉核因子E2相关因子2(Nrf2)、沉默信息调节因子3(Sirt3)、乙酰化超氧化物歧化酶2(Ac-SOD2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。结果表明:LUFE可减轻高脂血症大鼠主动脉病理性损伤,减少主动脉内膜脂质斑块分布的相对面积,降低血浆TC、TG、LD L-C、ET-1、MDA水平,增加6-keta-PGF1α、CAT和SOD2的水平,上调主动脉组织Nrf2、HO-1、Sirt3蛋白表达,降低主动脉组织Ac-SOD2的相对蛋白表达。研究结果证实,LUFE可减轻高脂血症所致的大鼠血管内皮损伤,其机制可能与降低血脂、减轻氧化应激损伤有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶高脂血症血管内皮动脉粥样硬化

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用

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食品与机械 2023年第4期39卷 156-162页

作者：李钰苏新张俊慧张蕊萌沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关... 详细信息

目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)对高脂血症大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法:以高脂饮食建立高脂血症模型,用不同剂量的LUFE灌胃模型大鼠。HE染色观察肝脏病理形态学变化;比色法检测大鼠血浆生化指标;蛋白免疫印迹法观察炎症相关蛋白的表达水平。结果:LUFE可以缓解高脂血症大鼠的肝组织损伤,降低血浆血脂水平、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,下调TLR4、MyD88和磷酸化的PI3K、Akt、NF-кB水平。结论:LUFE通过调控PI3K/Akt/NF-кB和TLR4/MyD88/NF-кB信号通路,可以保护高脂血症所致的大鼠肝损伤。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶高脂血症肝损伤炎症

榆干离褶伞溶栓酶对过氧化氢诱导所致内皮细胞损伤的保护作用研究

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榆干离褶伞溶栓酶对过氧化氢诱导所致内皮细胞损伤的保护作用研究

作者：张蕊萌延边大学

学位级别：硕士

目的:探究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对过氧化氢(HO)所致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法:将HUVEC分为正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。使用900μmol/L HO建立细胞氧... 详细信息

目的:探究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对过氧化氢(HO)所致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法:将HUVEC分为正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。使用900μmol/L HO建立细胞氧化损伤模型。CCK8法检测细胞活力,TBA法检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)水平,磷酸铵法检测过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,WST-8法检测超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平,免疫荧光法观察细胞及线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平以及线粒体跨膜电位水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹方法观察细胞核因子相关因子2(nuclear factor erythroid 2-relted factor,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)、NADPH醌氧化还原酶1(NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1)、沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)、Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemias-2,Bcl2)、Bcl 2相关蛋白X(Bcl2 associated x protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9(cysteine aspartic acid specific protease 9,caspase 9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase 3)蛋白表达水平。加入Nrf2抑制剂ML385后,将HUVEC分为正常对照组、模型组、ML385组、LUFE组、LUFE+ML385组。采用蛋白免疫印迹观察细胞内Nrf2、Sirt3蛋白表达情况,WST-8法检测SOD2活性。结果:1.LUFE抑制HO诱导的细胞凋亡:CCK8结果表明,LUFE抑制HO所致细胞存活率的降低,并明显减少HO诱导的细胞凋亡。免疫印迹结果表明,LUFE上调Bcl2蛋白表达水平并下调Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白表达。2.LUFE对HO所致细胞氧化损伤有保护作用:LUFE逆转HO诱导的细胞及线粒体ROS水平的升高以及线粒体跨膜电位的下降,并提高抗氧化酶SOD2、CAT、GSH-PX的活力、提高ATP水平,同时降低MDA水平。免疫印迹结果显示,LUFE可以上调氧化应激损伤后细胞的Nrf2、HO-1、NQO1、Sirt3蛋白表达水平并下调Keap-1蛋白水平。以Nrf2抑制剂ML385处理后检测Nrf2、Sirt3蛋白表达水平和SOD2活性,结果表明,LUFE可通过调节Nrf2上调Sirt3蛋白水平,提高SOD2活性。结论:LUFE可能通过调控Nrf2/Sirt3信号通路减轻HO诱导的血管内皮细胞氧化损伤,减少细胞凋亡,从而保护血管内皮细胞。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶血管内皮细胞氧化应激凋亡

榆干离褶伞溶栓酶对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用

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食品科学 2021年第17期42卷 121-126页

作者：李芳芳张蕊萌丛贺沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为4组,即正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外,其余各组每日按10 mL/kg mb灌胃体积分... 详细信息

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对酒精诱导大鼠肝损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为4组,即正常对照组,模型组,LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外,其余各组每日按10 mL/kg mb灌胃体积分数40%的酒精诱导肝损伤。LUFE低、高剂量组分别以100、400 mg/kg mb的剂量灌胃LUFE,正常对照组和模型组以等量生理盐水灌胃,共28 d。末次给药后次日处死大鼠,苏木精-伊红染色观察大鼠肝组织病理形态学变化,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、清蛋白(albumin,Alb)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平。蛋白免疫印迹法检测抑制性-κBα(inhibitory kappa B-alpha,I-κBα)蛋白表达水平和核转录因子(nuclear factor,NF)-κB p65磷酸化(p-NF-κB)水平。结果:LUFE干预能减轻肝组织的病理性损伤,抑制酒精所致的血清AST、ALT、γ-GT、ALP活力及TG、T-CHO、LDL-C、T-BIL水平的升高和Alb水平的降低,其中高剂量LUFE能达到显著抑制效果(P干预能提高I-κBα蛋白表达水平,抑制NF-κB p65蛋白的磷酸化,其中高剂量LUFE能达到显著改善效果(P<0.05,P<0.01)。结论:LUFE对酒精所致大鼠肝损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化、抗炎作用有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶酒精肝损伤

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榆干离褶伞溶栓酶对大鼠动脉血栓的抑制作用

食品科学 2021年第1期42卷 180-186页

作者：李芳芳卫莹刘雪沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立... 详细信息

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和LUFE低、高剂量组,除假手术组以外,其余4组均以三氯化铁建立颈动脉血栓模型。造模前阳性对照组和LUFE低、高剂量组分别以10 mg/kg mb阿司匹林以及100、400 mg/kg mb LUFE灌胃7 d。观察血栓质量和颈动脉血管组织病理变化;酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)、可溶性血栓调节蛋白(soluble thrombomodulin,sTM)、E-选择素和组织因子(tissue factor,TF)水平;流式细胞仪检测血小板CD62P表达水平。为观察LUFE对血小板功能的影响,在体外以胶原诱导血小板活化,观察LUFE对大鼠富血小板血浆中P-选择素、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)和血小板膜糖蛋白IIbIIIa(glycoprotein IIbIIIa,GPIIbIIIa)水平的影响;Western blot方法观察LUFE对大鼠血小板磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)表达水平的影响。结果:LUFE能明显减轻血栓质量和血管受损程度,抑制血栓模型大鼠血清sTM、E-选择素、TF、TNF-α、IL-6和PAF水平的上调,下调血小板CD62P的表达。同时,在体外LUFE能够下调胶原诱导的富血小板血浆中P-选择素、β-TG和GPIIbIIIa水平,下调血小板PI3K、Akt和p38 MAPK蛋白的磷酸化水平。结论:LUFE具有抗血栓作用,其机制可能与LUFE对血管内皮细胞的保护作用以及对血小板活化的抑制作用有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶抗血栓作用血管内皮细胞血小板

榆干离褶伞溶栓酶对酒精损伤血管内皮细胞的保护作用

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食品科学 2020年第5期41卷 108-114页

作者：李芳芳丛贺沈明花延边大学医学院吉林延吉133002

目的:研究榆干离褶伞溶栓酶(fibrinolytic enzyme from Lyophyllum ulmarium,LUFE)对酒精所致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制。方法:以酒精诱导HUVECs损伤,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;吖啶橙-溴化乙啶双染法观察细胞凋亡;用荧光染料双氢罗丹明123和罗丹明123分别检测细胞总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体跨膜电位;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、细胞色素c、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved caspase)-9和cleavedcaspase-3的表达水平。结果:LUFE能够提高内皮细胞存活率,降低LDH和MDA水平,提高SOD、GSH-Px活力,减少ROS的生成,并抑制酒精所致的线粒体跨膜电位的下降和细胞凋亡。Western blot结果表明,LUFE提高Bcl-2蛋白表达水平,并减少细胞色素c、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达。结论:LUFE对酒精所致血管内皮细胞的损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制酒精诱导的线粒体途径细胞凋亡有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶人脐静脉内皮细胞酒精保护作用

榆干离褶伞溶栓酶对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

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食品科学 2016年第1期37卷 171-175页

作者：周广亮丛贺全吉淑沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

目的:探讨榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,L.u)溶栓酶对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用。方法:用H_2O_2诱导HUVEC氧化损伤,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨ_m)和总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blotting法检测Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表达水平。结果:L.u溶栓酶可显著提高HUVEC的存活率,明显抑制H_2O_2诱导的细胞内ROS生成和线粒体跨膜电位的下降,并能降低Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达水平。结论:L.u溶栓酶对氧化应激损伤的HUVEC有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶人脐静脉内皮细胞线粒体跨膜电位活性氧凋亡

榆干离褶伞溶栓酶对酒精诱导的大鼠肝损伤的保护作用

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食品科学 2021年

作者：李芳芳张蕊萌丛贺沈明花延边大学医学院

目的：研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme，LUFE)对酒精诱导的大鼠肝损伤的保护作用。方法：将大鼠随机分为四组，正常对照组、模型组、LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外，其余组每日按10 mL/kg体质量灌... 详细信息

目的：研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme，LUFE)对酒精诱导的大鼠肝损伤的保护作用。方法：将大鼠随机分为四组，正常对照组、模型组、LUFE低、高剂量组。除正常对照组以外，其余组每日按10 mL/kg体质量灌胃40%的酒精诱导肝损伤。LUFE低、高剂量组分别以100 mg/kg、400 mg/kg体质量灌胃LUFE，正常对照组和模型组以等量生理盐水灌胃，共28 d。末次给药后次日处死大鼠，苏木素-伊红染色观察大鼠肝组织病理形态学改变，检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase， ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase， AST）、清蛋白（albumin， Alb），γ-谷氨酰转移酶（γ-glutamyltranspeptidase， γ-GT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase， ALP）、总胆红素(total bilirubin， T-BIL)、甘油三酯（triglyceride， TG）、总胆固醇（total cholesterol， T-CHO）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol， LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol， HDL-C）水平。蛋白印迹法检测I-κB蛋白表达水平和NF-κB p65磷酸化水平。结果：LUFE干预后减轻肝组织的病理性损伤，抑制酒精所致的血清AST、ALT、γ-GT、ALP活力及TG、T-CHO、LDL-C、TBIL水平的升高，提高Alb水平。Western blot结果表明，LUFE提高I-κB蛋白表达水平，抑制NF-κB p65蛋白的磷酸化水平。结论：LUFE对酒精所致大鼠肝损伤有保护作用，其机制可能与其抗氧化、抗炎作用有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶酒精肝损伤

榆干离褶伞溶栓酶对脂多糖诱导的大鼠炎性肝损伤的保护作用

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食品工业科技 2018年第20期39卷 293-297页

作者：刘雪王玉娇沈明花延边大学医学院吉林延吉133000

本实验研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。将大鼠随机分为五组,分别为对照组、模型组、阳性对照组、LUFE低剂量组、LUFE高剂量组。L... 详细信息

本实验研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。将大鼠随机分为五组,分别为对照组、模型组、阳性对照组、LUFE低剂量组、LUFE高剂量组。LUFE分别以200、400 mg/kg体质量灌胃2周。除对照组以外其余四组均以腹腔注射LPS诱导大鼠肝脏炎性损伤模型。阳性对照组在造模前腹腔注射地塞米松(5 mg/kg)。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变;检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平; Western bolt方法观察肝组织Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、p-TAK1和p-NF-κB p65蛋白水平。实验结果表明,LUFE可缓解LPS诱导的肝组织的炎性损伤,降低血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量和AST、ALT活性,提高ALB水平。Western bolt结果显示,LUFE下调TLR4、p-TAK1、p-NF-κBp65蛋白水平。以上结果表明LUFE抑制肝脏炎性损伤,其机制可能与其下调TLR4-NF-κB通路相关蛋白的表达有关。

关键词：榆干离褶伞溶栓酶炎症肝保护