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植酸酶产生菌的筛选与酶纯化及其性质的研究

工业微生物 2004年第2期34卷 26-29页

作者：刘永海李大力杨成丽石若夫王世明陆路德南京理工大学化工学院南京210094

对从土壤中分离得到的一株产植酸酶的细菌进行了生理生化鉴定 ,并对植酸酶进行了分离纯化 ,该酶反应的最适温度约为 5 5℃ ,最适 pH值为 5 .8,植酸酶蛋白分子量约为 1 4kD。

关键词：植酸酶细菌纯化筛选土壤

低钙磷饲粮添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标的影响

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动物营养学报 2019年第1期31卷 304-313页

作者：范秋丽蒋守群苟钟勇李龙林厦菁王一冰广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室农业部华南动物营养与饲料重点实验室广东省动物育种与营养公共实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

本试验旨在研究低钙磷饲粮中添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标和钙磷代谢关键基因表达量的影响。试验选用1 080只1日龄岭南黄羽肉公雏,根据体重一致原则,分为6个组(每组6个重复,每个重复30只肉鸡)... 详细信息

本试验旨在研究低钙磷饲粮中添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标和钙磷代谢关键基因表达量的影响。试验选用1 080只1日龄岭南黄羽肉公雏,根据体重一致原则,分为6个组(每组6个重复,每个重复30只肉鸡):对照(PC)组(正常的磷酸氢钙添加水平,非植酸磷水平达到标准要求)、中非植酸磷(MP)组(PC组降低50%磷酸氢钙添加水平,非植酸磷水平减少1/3)、MP+2 000组(MP组+2 000 FTU/kg植酸酶)、MP+4 000组(M P组+4 000 FTU/kg植酸酶)、低非植酸磷(LP)+2 000组[PC组不添加磷酸氢钙,非植酸磷水平减少2/3+2 000 FTU/kg植酸酶)、LP+4 000组(PC组不添加磷酸氢钙,非植酸磷水平减少2/3+4 000 FTU/kg植酸酶),各组饲粮钙磷比保持在1.4∶1.0左右。试验期21 d。结果表明:1)与PC组相比,MP+4 000、LP+4 000组肉鸡终末体重、平均日增重显著提高(P植酸酶添加组肉鸡平均日采食量显著提高(P植酸酶添加组肉鸡终末体重、平均日增重、平均日采食量均显著提高(P植酸酶添加组胫骨折断力显著提高(P植酸酶的添加有升高胫骨钙含量的趋势(P=0.055)。3)与PC组相比,MP组血清磷含量显著降低(P植酸酶添加组血清钙含量有升高的趋势(P=0.054),血清碱性磷酸酶活性有降低的趋势(P=0.089)。4)与PC组相比,MP组肾脏克洛索蛋白、成纤维生长因子受体1(Fgfr1)基因表达量显著下调(P植酸酶对肾脏1α-羟化酶基因表达量影响不显著(P>0.05)。综上,低钙磷饲粮添加高剂量植酸酶可提高1～21日龄黄羽肉鸡生长性能,促进矿物元素在胫骨的沉积,改善胫骨性能,调节血液和肾脏钙磷代谢,维持机体钙磷平衡。

关键词：钙磷植酸酶生长性能胫骨性能黄羽肉鸡

表面展示表达植酸酶的重组酿酒酵母构建及酒精发酵

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生物工程学报 2015年第12期31卷 1700-1710页

作者：肖艳陈献忠沈微杨海泉樊游工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心江苏无锡214122

以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列... 详细信息

以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列连接并置于α-因子分泌信号肽下游,构建植酸酶表面展示表达重组载体pMGK-AG-phy并转化工业酿酒酵母,成功获得了在细胞表面锚定表达植酸酶的重组菌PHY。重组酵母的植酸酶表达水平达到6.4 U/g(菌体湿重),其最适温度为55℃,最适pH 4.0,在pH 3.5–4.5范围内具有较高的活性。以玉米粉为原料的同步糖化发酵实验表明,重组酵母PHY的生长速度高于出发菌株,同时酒精产量相较于出发菌株提高了3.7%。更为重要的是发酵后酒糟中植酸磷含量与对照相比降低了91%。构建的表面展示表达植酸酶的重组工业酿酒酵母能够有效降低植酸含量,提高了酒糟的利用价值,减少磷排放,对燃料酒精的环境友好生产具有重要的借鉴意义。

关键词：酿酒酵母表面展示植酸酶燃料酒精 α-凝集素

毕赤酵母中植酸酶和内切葡聚糖酶共表达菌株的构建及其高效表达(英文)

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生物工程学报 2010年第5期26卷 616-622页

作者：吴振芳唐自钟陈惠韩学易赖欣吴琦四川农业大学生命科学与理学院雅安625014

植酸酶和内切葡萄糖苷酶广泛应用于动物饲料添加剂中,能更有效地帮助饲料的利用,同时为动物的生命活动提供必需的重要物质。首先构建重组质粒pPICZα-EG,经过线性化后,电转化到含有植酸酶phyA基因的毕赤酵母感受态细胞中,构成含有植酸... 详细信息

植酸酶和内切葡萄糖苷酶广泛应用于动物饲料添加剂中,能更有效地帮助饲料的利用,同时为动物的生命活动提供必需的重要物质。首先构建重组质粒pPICZα-EG,经过线性化后,电转化到含有植酸酶phyA基因的毕赤酵母感受态细胞中,构成含有植酸酶基因和内切葡萄糖苷酶基因的重组体菌株GS115-phyA-EG。经甲醇诱导后其活性分别达到出发菌株GS115-phyA和GS115-EG的39.4%和56.2%。酶学性质的分析显示,最适反应温度和最适反应的pH值分别为55℃和5.5,植酸酶和内切葡萄糖苷酶在温度为45℃-55℃,pH值为4.5~5.5时,酶活相对稳定,均能达到最高酶活的80%以上。结果表明这种在同一个系统种同时表达2种酶的方法能更好地节约时间和成本,使其在饲料工业的应用上有更广阔的前景。

关键词：植酸酶内切葡聚糖酶毕赤酵母混合表达

植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 22-26页

作者：许钦坤王红宁李洪淼四川农业大学动物科技学院

根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9kphyAm4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明,植酸酶... 详细信息

根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9kphyAm4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明,植酸酶基因已整合到酵母基因组中;表达产物的SDSPAGE分析表明,酶蛋白分子大小为70.15kDa。Southernblotting结果表明,phyA基因整合到酵母染色体DNA中;转化子酶活测定结果表明,经密码子优化的重组酵母PPNPm42酶活可达136900U/ml,比Arg没有优化的PPNPm8(47600U/ml)酶活高约2.8倍。

关键词：植酸酶多点突变毕赤酵母高效表达

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植酸酶

国外畜牧学（猪与禽） 2011年第6期31卷 10-11页

作者：徐淑玲 Jay Y.Jacela Joel M.De Rouchey Mike D.Tokach

植酸酶是一种能够提高猪日粮中磷的利用率的酶。它可以降低日粮中所需磷的添加量。由于提高了日粮磷的利用率,因此减少了粪便磷的排放量。植酸酶在较长的贮存期间容易失活。

关键词：植酸酶日粮磷利用率猪日粮添加量排放量贮存期粪便

植酸酶在肉仔鸡消化道内环境下活性变化的体外研究

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畜牧兽医学报 2008年第9期39卷 1212-1216页

作者：张铁鹰刘志伟孙杰黄玉亭陈志伟中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 河北农业大学动物科技学院保定071001 山东理工大学生命科学学院淄博255049

本研究在体外条件下对肉仔鸡消化道内pH环境以及蛋白质水解酶对黑曲霉植酸酶活性的影响进行了研究。结果表明,该植酸酶为酸性植酸酶,最适pH为5.5。该植酸酶对pH环境和蛋白质水解酶较为敏感。当环境pH远离其最适pH时其活性迅速下降,且大... 详细信息

本研究在体外条件下对肉仔鸡消化道内pH环境以及蛋白质水解酶对黑曲霉植酸酶活性的影响进行了研究。结果表明,该植酸酶为酸性植酸酶,最适pH为5.5。该植酸酶对pH环境和蛋白质水解酶较为敏感。当环境pH远离其最适pH时其活性迅速下降,且大部分酶活损失发生在30 min内,然后趋于稳定。在pH3.0和pH6.0条件下,加入胃蛋白酶和胰酶后,植酸酶活性亦进一步迅速降低,然后趋于稳定,但与胃蛋白酶相比,胰酶对植酸酶活性的影响更大。从植酸酶在14、28和42日龄肉仔鸡胃和小肠稳定性的研究可以看出,植酸酶在胃存留率分别为42%、40%和49%,在小肠内的存留率仅19%。植酸酶在胃内的稳定性好于小肠,小肠内环境不利于植酸酶存活。植酸酶活性受肉仔鸡消化道pH和蛋白酶的影响较大,这可能是影响植酸酶作用效果的主要因素之一。

关键词：植酸酶肉仔鸡 pH 胃蛋白酶胰酶

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植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定

华北农学报 2012年第5期27卷 44-48页

作者：胡骁飞魏凤仙李青梅职爱民王方雨孙亚宁柴书军付晓鹤河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450002 郑州市兽药饲料监察所河南郑州450052

通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng... 详细信息

通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 015.86,3 593.19,3 610.40ng/mL,交叉反应率分别为2.38%,2.49%,2.78%,2.77%。说明成功筛选了杂交瘤细胞株,该细胞株能分泌抗植酸酶mAb,该植酸酶mAb对植酸酶亲和力高、特异性强、灵敏度好,为植酸酶ELISA检测试剂盒及试纸条研制奠定了基础。

关键词：植酸酶杂交瘤单克隆抗体 ELISA

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植酸酶及其植物基因工程

微生物学通报 2005年第6期32卷 128-132页

作者：邹立扣王红宁四川农业大学动物预防医学生物工程实验室

综述了植酸酶的来源、其酶学性质及植酸酶的植物基因工程,并对其存在的问题、应用前景作了展望。

关键词：植酸酶植物基因工程