检索结果-南通市图书馆

作者：刘奕彤江苏大学

学位级别：硕士

阿魏酸和半纤维素、木质素共价交联形成木质素—阿魏酸—阿拉伯木聚糖复合物,是禾本科植物细胞壁形成坚固抗降解屏障的重要分子基础。在植物中异源表达阿魏酸酯酶(Ferulic acid esterase,FAE),可水解细胞壁中的阿魏酸酯键,促进细胞壁解... 详细信息

阿魏酸和半纤维素、木质素共价交联形成木质素—阿魏酸—阿拉伯木聚糖复合物,是禾本科植物细胞壁形成坚固抗降解屏障的重要分子基础。在植物中异源表达阿魏酸酯酶(Ferulic acid esterase,FAE),可水解细胞壁中的阿魏酸酯键,促进细胞壁解聚,有效降低木质纤维素降解转化的成本,但目前仍面临转基因的常温FAE酶活性干扰宿主植物生长发育、降低抗逆性等技术挑战,而采用嗜热FAE酶基因进行遗传转化是一种重要的替代策略。本文对一种来源于热纤梭菌(Clostridium thermocellum)的嗜热FAE酶的酶学特性开展了系统的研究,并构建了该嗜热FAE酶编码基因的植物高效表达载体,为培育木质纤维素易降解的新型能源植物奠定了基础,其主要研究结果如下:1)分别克隆了热纤梭菌*** XynZ的阿魏酸酯酶催化域(FAE)及该阿魏酸酯酶催化域和碳水化合物结合域(FAE-CBM6)编码基因,与pET22b连接分别构建了原核表达重组质粒pET22b-FAE和pET22b-FAE-CBM6,并在大肠杆菌BL21(DE-3)中实现异源表达,分别获得分子量约为29.0 kDa和45.0 kDa的重组蛋白产物。2)分析比较了温度、pH、底物、金属离子等因子对FAE和FAE-CBM6这两种重组嗜热阿魏酸酯酶活性的影响。结果表明,它们的最适温度分别为60℃和70℃,最适pH值分别为6.0和7.0。FAE酶在pH 5.0-pH 9.0范围内比较稳定,而FAE-CBM6酶在pH 4.0-pH 9.0范围内比较稳定;FAE酶在70℃或75℃下孵育2 h后其相对酶活仍能维持在60%以上,而FAE-CBM6酶在70℃孵育2 h后仍能维持80%以上的酶活。Mn2+和Zn2+对于FAE酶的酶活有促进作用,但Mg2+、Cu2+、Ni2+有抑制作用;而Cu2+和Zn2+对FAE-CBM6酶活有明显抑制作用。在同一反应条件下,FAE-CBM6的酶活一般比FAE的高,说明CBM6结合域的存在对该嗜热阿魏酸酯酶活性有促进作用。3)根据禾本科植物玉米(Zea mays)密码子偏好性对嗜热阿魏酸酯酶的编码基因序列进行了优化,并人工合成了优化后的基因序列,在此基础之上,通过与单子叶植物Ubiquitin强启动子、增强子Ω序列以及不同亚细胞定位信号肽(质外体或内质网定位信号肽)编码序列进行组合,构建了该嗜热阿魏酸酯酶基因的多种植物高效表达载体。

关键词：热纤梭菌嗜热阿魏酸酯酶碳水化合物结合域酶学特性植物高效表达载体

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金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨

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科技资讯 2016年第12期14卷 118-119页

作者：刘晨甘肃烟草工业有限责任公司甘肃兰州730050

金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成,其中α的结构域构成包括Cd^(2+)和Hg^(2+),小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建,并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果,可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的... 详细信息

金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成,其中α的结构域构成包括Cd^(2+)和Hg^(2+),小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建,并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果,可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的碱基组合AACAATG,这种组合有利于将突变体基因插入具有35S强启动子的植物双元表达载体p GPTVd35S-BAR中,并获得αα突变体的植物双元表达载体。在该次研究中,将采用PCR-Southern和蛋白Dot-blotting检测方法,证明αα突变体可以在烟草中良好地表达。同时,在抗重金属的实验中证明转基因烟草能够在Cd400中良好的生长。

关键词：金属硫蛋白突变体植物高效表达载体烟草转基因

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口蹄疫病毒VP1高效植物表达载体构建及鉴定

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广西植物 2007年第1期27卷 132-136页

作者：郝岗平边高鹏孙凌云张媛英泰山医学院生物化学教研室山东泰安271000 山西长治学院生化系山西长治046011

采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得... 详细信息

采用高保真PCR方法从pGEM-VP1-T质粒扩出VP1基因,定向克隆到含DHA的融合中间载体pUC18-DHA,得到pUC18-VP1-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到转化范围广,转化效率高,且含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得含VP1融合DHA基因的植物双元表达载体pGreen0029-VP1-DHA,采用电击法将含VP1的植物表达载体转入根癌农杆菌G3101中,获得了含VP1基因的双元植物表达载体,为下一步的广范围转基因植物表达研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒VP1基因植物高效表达载体

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短芒大麦DREB2转录因子基因的克隆及遗传转化

短芒大麦DREB2转录因子基因的克隆及遗传转化

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作者：张明哲吉林大学

学位级别：硕士

短芒大麦[Hordeum brevisubulatum(Trin.)Link]是禾本科大麦属中的一种多年生草本植物,俗称野大麦。广泛分布于我国的东北、华北、内蒙、青海及新疆等地,其优点是草质柔软、适口性好,各种家畜喜食,营养价值较高,同时又具有较高的产量,... 详细信息

短芒大麦[Hordeum brevisubulatum(Trin.)Link]是禾本科大麦属中的一种多年生草本植物,俗称野大麦。广泛分布于我国的东北、华北、内蒙、青海及新疆等地,其优点是草质柔软、适口性好,各种家畜喜食,营养价值较高,同时又具有较高的产量,除放牧、调制干草、加工草粉外,又可在低湿地上种植,建立人工草地,具有良好的生产性能及较高的经济价值。因此培育短芒大麦耐盐碱新品种和研究耐盐的分子机理对在我国西部大开发中改良盐碱地,实现“退耕还草”具有重要的意义。近几年来,我们以短芒大麦为材料,已对其生理、生化特性和耐盐突变体进行了大量研究。本文拟在此基础上,研究短芒大麦盐胁迫相关基因DREB2。DREB (dehydration responsive element binding protein)转录因子(含AP2/EREBP结构域)是与DRE(dehydration responsive element)顺式作用元件相结合,调控对干旱、高盐、低温等逆境应答相关基因表达的蛋白质,对短芒大麦耐盐分子机理进行初步的探索,并构建了植物高效表达载体,以期为进一步利用基因工程手段培育短芒大麦耐盐新品种,开发和利用盐碱地做出努力。

关键词：短芒大麦 DREB2 转录因子植物高效表达载体

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禽流感抗原基因NA，HA的克隆及其表达载体的构建

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现代生物医学进展 2008年第3期8卷 449-452页

作者：李进阮颖龚剑范亚丽姚远頲杜培粉魏然刘春林湖南农业大学生物科学技术学院长沙410128 中国科学院病毒生物所武汉430070 湖南农业大学作物基因工程湖南省重点实验室长沙410128

HA和NA是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T载体。经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pBl121上,获得含有HA/NA基因... 详细信息

HA和NA是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T载体。经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pBl121上,获得含有HA/NA基因的植物双元表达载体pBI121-HA和pBI121-NA,采用冻融法将含HA/NA基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌LBA4404,菌液浸染生菜子叶,共培48小时后进行GUS基因表达检测,x-glue染色显蓝色,说明带有HA/NA的植物双元表达载体构建成功,为下一步的生菜转HA/NA基因研究奠定基础。

关键词：禽流感抗原基因NA HA 植物高效表达载体禽流感

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