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植物反应器在动物疫苗研究中的应用

湖北农业科学 2012年第16期51卷 3425-3426,3439页

作者：王淼王建民葛云侠杨艺史振声沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866 沈阳农业大学农学院沈阳110866

用植物生产像疫苗这样高价值的药用产品,这一概念已经提出了20年。直到现在为止这项技术仍不是十分成熟。最初人们都看好瞬时表达;证实了这种疫苗对人和动物是有效的;有些植物疫苗已经进入了人的Ⅰ期临床试验,还有一些正准备进行;监管... 详细信息

用植物生产像疫苗这样高价值的药用产品,这一概念已经提出了20年。直到现在为止这项技术仍不是十分成熟。最初人们都看好瞬时表达;证实了这种疫苗对人和动物是有效的;有些植物疫苗已经进入了人的Ⅰ期临床试验,还有一些正准备进行;监管的要求比以往更加严格。生产注射用产品可能会比生产可食用疫苗容易。该技术已被证明更廉价,更易于寻找生产材料。由于植物疫苗对于生产抵御引起大流行的病毒快速应答疫苗有无法替代的优势,在未来将会为人类的发展做出巨大的贡献。

关键词：动物疫苗植物反应器转基因植物转基因表达

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抗体药物的植物反应器生产

广西民族学院学报（自然科学版） 2004年第4期10卷 88-90,94页

作者：杨立芳广西民族学院化学与生态工程学院广西南宁530006

大量的重组抗体被用于疾病的预防、诊断和治疗.目前,这些重组抗体绝大多数是利用鼠源细胞生产的,它的缺点是有潜在的隐患和价格昂贵.然而,植物作为反应器生产抗体药物既具有安全性又可大规模廉价生产的特点,具有广阔的前景.

关键词：植物反应器转基因抗体

利用植物反应器生产碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的研究

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农业开发与装备 2014年第5期 78-78页

作者：祝涛王法微王南董园园李海燕吉林农业大学生命科学学院吉林长春130000 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林长春130118

综述了植物反应器发展的现状以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转化亚麻芥的研究目的意义,一方面可利用植物系统生产外源蛋白,另一方面为我国农业生产路线提供了一条新的思路。

关键词：植物反应器碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 亚麻芥

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基于种子生产植物源重组药物蛋白研究进展

核农学报 2014年第9期28卷 1597-1605页

作者：蒋滢杨静齐广勋邢国杰马莲菊杨向东沈阳师范大学化学与生命科学学院辽宁沈阳110034 吉林省农业科学院农业生物技术研究所吉林长春130033

种子作为植物重要储藏器官之一,为高效表达外源重组药物蛋白提供了理想的载体。与其他植物生产系统相比,植物种子反应器具有多方面的优势,如表达水平较高,重组蛋白活性稳定,易于储藏和运输以及便于加工、分离和纯化等。在过去的20年中,... 详细信息

种子作为植物重要储藏器官之一,为高效表达外源重组药物蛋白提供了理想的载体。与其他植物生产系统相比,植物种子反应器具有多方面的优势,如表达水平较高,重组蛋白活性稳定,易于储藏和运输以及便于加工、分离和纯化等。在过去的20年中,利用植物种子作为反应器表达了一系列重组药物蛋白,部分药物蛋白已进入商业化生产阶段。本文对种子生物反应器的特点及利用,就近年来基于种子生产植物源重组药物蛋白的研究进展进行了综述,并对植物种子生物反应器研究中的几个问题及未来的发展方向进行了探讨。

关键词：植物源重组药物蛋白种子植物反应器研究进展

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利用植物系统表达重组蛋白的研究进展

中国生物工程杂志 2010年第2期30卷 109-114页

作者：江莺刘秀明杜美丽朱海林李巍李海燕李校堃吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心长春130118 吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林农业大学生命科学学院长春130118

植物是可以生产不同生物药剂品的成本低廉的生物反应器,综述了稳定转化系统、瞬时表达系统以及叶绿体基因组转化方法,这三种不同的植物表达系统的特点和研究现状,并对其存在的问题及未来的前景进行了分析。

关键词：植物反应器稳定转化系统瞬时表达系统叶绿体转化重组蛋白

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密码子植物化的小鼠ZP3蛋白基因人工合成

种子 2009年第5期28卷 21-23页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫研究所广州510632

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3... 详细信息

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3基因的编码区。DNA序列测定人工合成的基因为植物化的ZP 3基因。

关键词：小鼠ZP3蛋白基因重叠PCR 合成植物反应器

利用拟南芥和红花油体系统表达透明质酸酶hPH20的研究

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利用拟南芥和红花油体系统表达透明质酸酶hPH20的研究

作者：李洪锐吉林农业大学

学位级别：硕士

近年来利用植物油体表达系统这一新型植物反应器生产目的蛋白，是生物反应器研究的热点。它具有生产成本低、来源广、易于大规模生产、不含危害人类健康的病原生物（与微生物和动物反应系统相比）等优点，并且重组蛋白可以在种子内长期... 详细信息

近年来利用植物油体表达系统这一新型植物反应器生产目的蛋白，是生物反应器研究的热点。它具有生产成本低、来源广、易于大规模生产、不含危害人类健康的病原生物（与微生物和动物反应系统相比）等优点，并且重组蛋白可以在种子内长期、稳定地贮存而不被降解。透明质酸酶（Hyaluronidases，简称HAase）是一类广泛存在于动物组织和微生物中的酶，又被称之为“扩散因子”。能特异性水解透明质酸（Hyaluronan，简称HA）及少量的硫酸软骨素A和C。HAase广泛应用于眼科手术、肿瘤及心肌梗塞的治疗等其他辅助治疗上。目前市售的HAase多数是从动物（牛、羊）睾丸组织中提取的，其纯度低，免疫原性强，对治疗有较大的危险性。近年来也有用动物细胞表达系统表达人类透明质酸酶PH20（hPH20），但其本身容易与内源性蛋白发生反应，还易被动物本身含有的病原体所污染，且成本高，价格昂贵。而用植物表达系统表达hPH20则不存在这样的问题，因为植物本身不含有HAase，也不会与植物蛋白发生相互反应或相互作用，且植物价格低廉，来源广，易于大规模生产，可大大降低生产成本。因此本实验探索利用拟南芥和红花的种子来特异性表达hPH20。主要研究结果如下：1、植物表达载体pOTBar-hPH20的构建：将hPH20基因进行植物偏好性优化合成后插入到油体融合蛋白植物高效表达载体上，形成pOTBar-hPH20重组质粒。利用冻融法将重组质粒转化至农杆菌EHA105中。2、农杆菌介导的拟南芥转化：采用Flora-Dip法侵染拟南芥，后经过Basta筛选后获得转基因株系，对转基因拟南芥种子进行蛋白水平上的检测（：1）SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白oleosin-hPH20已成功在转基因拟南芥种子中得到表达。（2）酶活实验结果表明：利用转基因拟南芥种子表达的oleosin-hPH20具有透明质酸酶活性，比活性范围为2～6U/mL。3、农杆菌介导的红花转化：以新疆裕民无刺红花为植物材料，利用农杆菌介导法，对红花进行遗传转化。用含1%Basta的培养基进行转基因植株抗性筛选，获得抗性苗。进行PCR检测，结果显示：重组蛋白hPH20已成功整合到转基因红花基因组中。本实验成功的利用转基因拟南芥和红花种子特异性表达了人类透明质酸酶（hPH20），并证明了利用转基因拟南芥种子特异性表达的重组蛋白oleosin-hPH20具有生物学活性。实验结果为利用植物油体表达系统生产药用蛋白奠定了基础，同时提供了一个可能使用的大规模生产hPH20的方法。

关键词：植物反应器透明质酸酶hPH20 拟南芥红花油体表达系统

利用植物油体系统表达碱性成纤维细胞生长因子的研究

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利用植物油体系统表达碱性成纤维细胞生长因子的研究

作者：任素平吉林农业大学

学位级别：硕士

随着分子生物学的快速发展和基因工程的深入研究,植物转基因技术在生物学中的地位越来越重要,利用转基因植物生产具有重要功效的外源重组蛋白也已成为人们研究的热点。首先利用植物系统可以大规模的生产外源蛋白,成本低廉;其次植物生产... 详细信息

随着分子生物学的快速发展和基因工程的深入研究,植物转基因技术在生物学中的地位越来越重要,利用转基因植物生产具有重要功效的外源重组蛋白也已成为人们研究的热点。首先利用植物系统可以大规模的生产外源蛋白,成本低廉;其次植物生产的外源蛋白不含致病微生物和动物病毒,相对比较安全;最后贮藏在植物果实、种子中的外源蛋白方便储藏、利于运输;以上这些优点为植物生产药用蛋白提供了广阔的应用前景。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是人体内一种特殊的活性物质,它能够促进神经纤维细胞、表皮细胞和软骨细胞的生长,在临床上具有重要意义和广泛的应用价值。为了降低生产成本及满足市场对bFGF的大量需求,本实验对利用转基因拟南芥和转基因红花生产重组蛋白bFGF进行了探索,得到一下结论： 1.以菜豆为材料,利用植物油体系统表达bFGF。以菜豆总DNA为模板,PCR扩增得到菜豆油体蛋白启动子序列。同时,利用融合PCR技术扩增得到oleosin-bFGF的融合基因。再此基础上,构建植物表达载体p1301-P-oleosin-bFGF。将重组质粒转入农杆菌EHA105,利用Flori-Dip法转化拟南芥。经basta筛选之后,获得4株转基因拟南芥株系。最后,在分子和蛋白水平对转基因拟南芥进行检测,结果如下： 1) SDS-PAGE和Western结果证明融合蛋白在拟南芥种子中有表达。 2) NIH3T3细胞的促生长实验证明利用拟南芥种子生产的bFGF具有生物活性。2.以新疆无刺红花为植物材料进行研究,初步建立了红花的再生培养体系。利用农杆菌介导,将植物表达载体的T-DNA区整合到红花的基因组中,利用含basta的培养基筛选得到转基因植株。在分子水平对转基因红花进行检测：PCR扩增结果显示融合基因成功整合到红花基因组中。本研究成功地利用转基因拟南芥和红花表达了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),并证明利用转基因拟南芥生产的重组蛋白具有生物活性,但其药理药效实验和临床前研究还有待进一步展开。本实验为利用植物油体系统生产药用蛋白奠定了基础,也为利用红花生产其他具有重要功能的外源蛋白提供了依据。

关键词：植物反应器碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 拟南芥红花油体表达系统

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抗Ⅰ型糖尿病基因转化烟草、番茄的研究

抗Ⅰ型糖尿病基因转化烟草、番茄的研究

作者：郑卿扬州大学

学位级别：硕士

Ⅰ型糖尿病是一种T细胞介导的针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病,是基因和环境因素综合作用的结果。热休克蛋白HSP65以及串联了6个多肽P277的融合片段HSP65-6×P277均对Ⅰ型糖尿病起到明显的治疗作用。本研究通过将具有抗Ⅰ型糖尿病作用... 详细信息

Ⅰ型糖尿病是一种T细胞介导的针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病,是基因和环境因素综合作用的结果。热休克蛋白HSP65以及串联了6个多肽P277的融合片段HSP65-6×P277均对Ⅰ型糖尿病起到明显的治疗作用。本研究通过将具有抗Ⅰ型糖尿病作用的基因片段HSP65和融合片段HSP65-6×P277通过农杆菌介导,转化烟草叶片和番茄子叶,利用卡那霉素作为植物筛选标记,以期获得具有生物学活性抗Ⅰ型糖尿病的转基因烟草、番茄植株。研究取得了如下进展：1)构建了植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,其中含有CaMV35s启动子,具有卡那霉素抗性筛选标记。经过检测、鉴定,我们确信构建的载体完全符合预期的设计。2)通过电激法将pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277质粒载体转化农杆菌EHA105,结果表明含有目的基因的质粒载体成功导入到了农杆菌中。3)用含pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的根癌农杆菌侵染烟草,在筛选培养基上培养,共得到43株抗性植株,PCR鉴定34株为阳性。4)将抗性苗移栽至温室培养,提取烟草总RNA,进行RT-PCR检测,结果表明目的基因已在烟草中成功转录为RNA。5)用含有pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的根癌农杆菌分别侵染番茄子叶,经抗性筛选得分别到8株、9株抗性苗,PCR鉴定分别有6株、9株为阳性。6)提取番茄的总RNA,RT-PCR结果显示,含载体pCAMBIA2301-HSP65的有5株已在番茄中成功转录为RNA,含载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的有4株也在转录水平上表达。7)转基因的遗传特性和蛋白表达的检测以及蛋白含量的测定还需要进一步工作。本研究获得的转基因烟草和番茄的植株,为利用植物作为反应器生产抗Ⅰ型糖尿病疫苗的研究提供了材料,为实现植物可食用疫苗的商业化研究做了铺垫。

关键词： Ⅰ型糖尿病 HSP65 P277 转基因烟草转基因番茄植物反应器