检索结果-南通市图书馆

森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第4期32卷 274-279页

作者：刘琪王伟琳孟庆峰徐展崔洁刘新欣王伟利吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林出入境检验检疫局长春130062

目的构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因。方法以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester）,未吸血雄蜱为对照组（driver）,分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并... 详细信息

目的构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因。方法以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester）,未吸血雄蜱为对照组（driver）,分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交。巢式PCR扩增杂交产物,经柱纯化后连接至PMD-18T中,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,进行蓝白斑筛选,并计算文库滴度和重组率。随机挑选阳性克隆,反向Northern杂交（Northern blotting）和RT-PCR法检测抑制消减杂交cDNA文库的消减效率。随机选取差异基因阳性克隆送测序,利用Blastn和Blastx对测序结果进行核酸种类同源性分析和蛋白种类同源性的比对和功能预测。结果电泳结果显示,森林革蜱半饱血雄蜱和未吸血雄蜱的ds cDNA均呈弥散拖影,大小在500bp以上,经RsaⅠ酶切后,大小在100～1000 bp;接头连接效率大于25%。巢式PCR结果显示,消减的ds cDNA呈聚集条带,大小在250～500 bp。构建的森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的滴度为700 000 pfu/ml,重组率为88.5%（239/270）。反向Northern blotting检测结果显示,当以森林革蜱半饱血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较强;以未吸血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较弱。RT-PCR结果显示,随机选取的8个阳性克隆中,有5个在半饱血状态下表达上扬,抑制消减杂交cDNA文库消减效果较好。115个阳性克隆测序得到87个差异表达序列标签（ESTs）,大小为200～800 bp。Blastn分析结果显示,87个序列中,与其他蜱基因有同源性的53个,同源性为70%～98%,与库蚊、甲虫和果蝇等其他昆虫基因有同源性的34个,同源性为32%～65%。Blastx预测结果显示,序列中片段表达的蛋白包括参与吸血和血液消化的不同酶类,主要功能为能量代谢、信号传导和转录调节等。结论建立了森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,差异基因的功能预测与蜱的吸血和血液消化等有关。

关键词：森林革蜱抑制消减杂交 cDNA文库差异基因

内蒙古自治区森林革蜱感染立克次体、无形体及埃立克体的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国媒介生物学及控制杂志 2023年第4期34卷 559-563页

作者：张晨曦武少卿刘洋刘芳王宇范蒙光李建云内蒙古医科大学公共卫生学院内蒙古呼和浩特010110 乌兰察布市疾病预防控制中心内蒙古乌兰察布012000 包头医学院内蒙古包头014000 内蒙古自治区综合疾病预防控制中心内蒙古呼和浩特010031 内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018

目的了解我国内蒙古自治区(内蒙古)森林革蜱感染立克次体、无形体及埃立克体等病原体情况,并研究其遗传多样性。方法在内蒙古乌兰察布市四子王旗、呼和浩特市土默特左旗家畜体表采集寄生蜱成蜱76只,经形态学和分子生物学鉴定后,用针对16... 详细信息

目的了解我国内蒙古自治区(内蒙古)森林革蜱感染立克次体、无形体及埃立克体等病原体情况,并研究其遗传多样性。方法在内蒙古乌兰察布市四子王旗、呼和浩特市土默特左旗家畜体表采集寄生蜱成蜱76只,经形态学和分子生物学鉴定后,用针对16S rRNA基因和柠檬酸合成酶基因(gltA)保守区域的引物同时检测立克次体,用针对16S rRNA基因的属特异性引物检测埃立克体、无形体。对检出的阳性样本,使用巢式PCR扩增获得gltA和热休克蛋白基因(groEL)。用PhyML 3.0软件进行最大似然法进化树构建。结果采获蜱经鉴定均为森林革蜱。从上述采集蜱中检出立克次体阳性8份,其中四子王旗6份(6/35,17.14%),土默特左旗2份(2/41,4.88%),测序结果显示均为劳氏立克次体。对3个基因序列的进化分析,上述菌株分成2个不同的分支,当地流行的劳氏立克次体有一定遗传多样性。未检出埃立克体和无形体。结论内蒙古的革蜱中存在劳氏立克次体的流行,且存在一定遗传多样性。劳氏立克次体为人类病原体,在内蒙古局部地区较高的阳性率提示可能存在感染人的风险。

关键词：内蒙古四子王旗土默特左旗森林革蜱劳氏立克次体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

森林革蜱雌蜱唾液腺的结构与变化(英文)

Insect Science 2001年第3期8卷 227-232页

作者：李健石振华刘敬泽河北师范大学生命科学学院石家庄050016 河北师范大学生命科学学院

森林革蜱 (DermacentorsilvarumOlenev)雌蜱唾液腺由唾液腺管和大量的腺泡组成。从假头基到唾液腺末端 ,唾液腺管分为三部分 ,即中央腺管、主分支腺管和小叶管。球状的腺泡分布在各级腺管上。气管和中央腺管并行。腺泡呈圆形或近圆形 ,... 详细信息

森林革蜱 (DermacentorsilvarumOlenev)雌蜱唾液腺由唾液腺管和大量的腺泡组成。从假头基到唾液腺末端 ,唾液腺管分为三部分 ,即中央腺管、主分支腺管和小叶管。球状的腺泡分布在各级腺管上。气管和中央腺管并行。腺泡呈圆形或近圆形 ,表面呈褶皱状 ,并有细小的气管分布。饥饿雌蜱唾液腺长度短 (5 4 7 3 3 μm) ;吸血后长度增加 ,吸血后 3天达到最大值 (1 1 0 9 40 μm)。从吸血后 3天到饱血后前 3 天 ,无明显变化 ,饱血后 4天明显缩短 (5 0 0 0 0 μm)。饥饿雌蜱的腺泡直径短 (45 2 4 μm) ,吸血期逐渐增大 ,吸血后 5天达到最大值 (74 1 0 μm)。饱血后腺泡逐渐萎缩并于饱血后 4天退化。

关键词：森林革蜱唾液腺结构与变化

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

森林革蜱吸血后的体重与产卵关系

昆虫学报 1981年第4期24卷 403-406页

作者：姚文炳陈国定内蒙古医学院寄生虫学教研组内蒙古医学院寄生虫学教研组南京医学院

森林革蜱Dermacentor silvarum Olenev吸血后的体重在15.3毫克至800毫克的个体皆可产卵。不同体重各组产卵前期所需的日数无显著区别,但在体重最轻者(15.3—35.5毫克)产卵前期延长。产卵日数、产卵量与体重有关,体重重者产卵期延长,产... 详细信息

森林革蜱Dermacentor silvarum Olenev吸血后的体重在15.3毫克至800毫克的个体皆可产卵。不同体重各组产卵前期所需的日数无显著区别,但在体重最轻者(15.3—35.5毫克)产卵前期延长。产卵日数、产卵量与体重有关,体重重者产卵期延长,产卵量多;反之,则产卵期短,产卵量少。饱食雌虫单位体重的产卵能力为8.5。

关键词：产卵期森林革蜱饱食森林矩头蜱产卵前期吸血

森林革蜱、草原革蜱感染和经期传播莱姆病螺旋体的实验研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

昆虫学报 2002年第5期45卷 578-582页

作者：孙毅许荣满郭天宇张泮河曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

以实验室培育的非感染森林革蜱Dermacentorsilvarum、草原革蜱D .nuttalli刺叮人工感染 2 1天后的阳性KM鼠 ,利用分离培养和PCR方法检测蜱对螺旋体的保持能力以及体内螺旋体对敏感动物的感染能力。结果如下 :非感染幼蜱均可以通过吸血... 详细信息

以实验室培育的非感染森林革蜱Dermacentorsilvarum、草原革蜱D .nuttalli刺叮人工感染 2 1天后的阳性KM鼠 ,利用分离培养和PCR方法检测蜱对螺旋体的保持能力以及体内螺旋体对敏感动物的感染能力。结果如下 :非感染幼蜱均可以通过吸血获得莱姆病螺旋体 ,饱血森林革蜱和草原革蜱幼蜱PCR阳性率均为 5 0 0 %而分离阳性率都为 2 0 0 %。饱血脱落后 ,这些幼蜱只能在饱血后 2天内分离到莱姆病螺旋体。PCR检测阳性也只能持续到 4天 ,均不能跨越蜕皮阶段。蜕化为若蜱后 ,若蜱以及分别受到这些若蜱刺叮的KM鼠均未发现阳性感染。非感染若蜱吸食感染的KM鼠后 ,饱血森林革蜱和草原革蜱获得了莱姆病螺旋体 ,PCR检测阳性率分别为 5 0 0 %和 2 0 0 %。分离阳性率分别达到 33 3%和 6 0 0 %。这些若蜱分别于饱血后 2天和 3天可以分离到莱姆病螺旋体 ,PCR扩增阳性也只能分别持续到饱血后 4天和 6天 ,均不能跨越蜕皮阶段 ;蜕化为成蜱后 ,成蜱以及受到它们攻击的KM鼠均未获阳性检测结果。同种蜱不同地理株在感染和保持莱姆病螺旋体的能力上也没有差异。森林革蜱、草原革蜱的幼蜱和若蜱虽可以吸血感染但均不具备经期传播莱姆病螺旋体BorreliagariniiCHNM4的能力。

关键词：森林革蜱草原革蜱感染经期传播莱姆病螺旋体实验研究

山西省宁武县森林革蜱无形体分子流行病学调查

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华流行病学杂志 2012年第6期33卷 642-643页

作者：李国华于强张秋香潘磊张玉农姚娜田丽娜吴海霞张丽娟山西省疾病预防控制中心太原030012 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所无形体室新疆石河子大学

人粒细胞无形体病是由嗜吞噬无形体引起的新发蜱传人兽共患病，在我国一些地区广泛存在。该病传播媒介主要为硬蜱。宁武县是山西省重点林业县，生态环境适宜蜱的生长和繁殖，农林作业及家畜养殖人员多数有蜱暴露史或叮咬史。为此，山西... 详细信息

人粒细胞无形体病是由嗜吞噬无形体引起的新发蜱传人兽共患病，在我国一些地区广泛存在。该病传播媒介主要为硬蜱。宁武县是山西省重点林业县，生态环境适宜蜱的生长和繁殖，农林作业及家畜养殖人员多数有蜱暴露史或叮咬史。为此，山西省疾病预防控制中心与中国疾病预防控制中心无形体研究室合作对该地区进行无形体病原体分子流行病学调查。

关键词：人粒细胞无形体森林革蜱分子流行病学

森林革蜱（Dermacentor silvarum)抗凝血酶基因的克隆、表达及功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

森林革蜱（Dermacentor silvarum)抗凝血酶基因的克隆、表达及功...

作者：万海龙河北师范大学

学位级别：硕士

蜱类体内的抗凝血酶对蜱在生长发育过程中的吸血和血餐消化发挥着重要的作用。本研究通过对森林革蜱(Dermacentor silvarum)cDNA文库的筛选,克隆得到了一条符合抗凝血酶特征的基因序列,命名为DS-AT。该序列全长616bp,开放阅读框为429bp... 详细信息

蜱类体内的抗凝血酶对蜱在生长发育过程中的吸血和血餐消化发挥着重要的作用。本研究通过对森林革蜱(Dermacentor silvarum)cDNA文库的筛选,克隆得到了一条符合抗凝血酶特征的基因序列,命名为DS-AT。该序列全长616bp,开放阅读框为429bp,编码142个氨基酸。经信号肽在线预测分析,信号肽有16个氨基酸,成熟肽有126个氨基酸。功能结构域分析显示DS-AT包含两个BPTI-like结构域,属于Kunitz家族。经NCBI Blast检索发现森林革蜱抗凝血酶基因编码蛋白与boophilin蛋白的同源性是89%,以boophilin抗凝血酶氨基酸序列为模板,构建了DS-AT蛋白的三级结构模型。各组织和发育各阶段荧光定量分析表明,DS-AT主要在雌蜱和雄蜱中肠和唾液腺中表达,在若蜱、雌蜱和雄蜱中均有表达。通过原核表达,获得了DS-AT重组蛋白,其分子量约为36 KDa,并对该重组蛋白进行了抗凝血活性以及抑菌活性的检测,结果表明DS-AT重组蛋白具有抑制凝血酶的活性和一定的抑菌活性。

关键词：森林革蜱抗凝血酶分子克隆原核表达功能

森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鉴别方法的建立及线粒体基因组序列分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鉴别方法的建立及线粒体基因组序列分...

作者：郭东辉黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

蜱是一类以吸食动物血液为生的体外寄生虫,虫体主要寄生于家畜和野生动物体表,也侵袭人类。蜱可以携带及传播多种病原体,包括细菌、病毒和寄生虫等,并且能通过直接叮咬造成蜱瘫、中毒和过敏,不仅给畜牧业造成巨大经济损失,还可严重影响... 详细信息

蜱是一类以吸食动物血液为生的体外寄生虫,虫体主要寄生于家畜和野生动物体表,也侵袭人类。蜱可以携带及传播多种病原体,包括细菌、病毒和寄生虫等,并且能通过直接叮咬造成蜱瘫、中毒和过敏,不仅给畜牧业造成巨大经济损失,还可严重影响人类健康,威胁公共卫生安全。森林革蜱(Dermacentor silvarum)和草原革蜱(Dermacentor nuttalli)是中国北方常见的两个蜱种,形态相似,通过形态学方法进行准确鉴定比较困难。因此,本研究第一部分内容是建立一种森林革蜱和草原革蜱的分子鉴定方法,即以核糖体内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列为基础建立森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法。通过提取森林革蜱和草原革蜱的基因组DNA,设计引物,PCR扩增和测序,最终获得准确的森林革蜱和草原革蜱的ITS2序列,并运用DNAStar软件对所得序列的限制性片段长度多态性进行分析。研究发现,森林革蜱和草原革蜱ITS2的PCR扩增产物经限制性内切酶Spe I酶切后所得片段明显不同,森林革蜱ITS2 PCR产物不能被切开而草原革蜱则被切成两段。可见,运用PCR-RFLP方法可成功鉴别森林革蜱和草原革蜱。目前关于革蜱的研究主要局限于形态学、流行病学、综合防治及蜱传疾病等方面,而关于线粒体基因组方面的研究很少。因此,本实验第二部分内容是扩增森林革蜱线粒体的全基因组序列并对其结构特点进行分析,探讨革蜱属的进化分类关系。结果显示,森林革蜱线粒体基因组全长为14945 bp,由13个蛋白质编码基因、2个非编码区、22个t RNA和2个核糖体RNA构成,各基因排列顺序与后沟类硬蜱相似。森林革蜱整个线粒体基因组核苷酸组成为A=38.89%,T=39.89%,G=8.94%,C=12.29%,A+T含量为78.78%。在森林革蜱的线粒体基因组t RNA-Glu和nad1之间存在一个插入基因,长度为127bp,含有3个重复序列“similar to nad1”。运用BI、ML和MP三种方法分别以森林革蜱线粒体基因组的13个蛋白质编码基因为标记构建系统进化树,结果发现三种建树方法所得结果一致或相似,即进化树分为两大分支,后沟类硬蜱和前沟类硬蜱各形成一个分支,森林革蜱位于后沟类硬蜱分支上。在后沟类这一分支中,革蜱属、扇头蜱属和凹沟蜱属均形成单一分支,而花蜱属和血蜱属形成复分支。革蜱属与扇头蜱属亲缘关系较其它蜱属近。本研究首次建立了鉴别森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法,为两种革蜱的鉴别提供了参考;首次对森林革蜱线粒体的全基因组进行测序,并对其基因特征进行比较分析,丰富了蜱的线粒体基因组数据,为进一步研究蜱分类及其进化关系奠定了基础。

关键词：森林革蜱草原革蜱 PCR-RFLP 线粒体基因组进化分析

森林革蜱（Dermacentor silvarum）保护性抗原4D8的基因克隆、原核表达及免疫原性分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

森林革蜱（Dermacentor silvarum）保护性抗原4D8的基因克隆、原...

作者：曾华河北师范大学

学位级别：硕士

森林革蜱(Dermacentor silvarum)是一种重要的体外寄生虫，广泛分布于中国北方、俄罗斯和蒙古国等地，种群数量大且传播森林脑炎和马巴贝虫等疾病，并能经卵传递森林脑炎病毒。 4D8最早是在肩突硬蜱(Ixodes scapularis)中发现的，是一... 详细信息

森林革蜱(Dermacentor silvarum)是一种重要的体外寄生虫，广泛分布于中国北方、俄罗斯和蒙古国等地，种群数量大且传播森林脑炎和马巴贝虫等疾病，并能经卵传递森林脑炎病毒。 4D8最早是在肩突硬蜱(Ixodes scapularis)中发现的，是一个蜱保护性抗原，之后从6个属的10种硬蜱中克隆得到，它们的核酸和氨基酸序列在这些蜱种中保守，分别有65–98和60–98%的一致性。4D8基因通过RNAi技术沉默后，通过重组蜱4D8的免疫实验证明它能通过降低蜱类的存活率和繁殖率来保护宿主免受蜱的侵扰。这些研究结果又在微小扇头蜱(Boophilus microplus)、美洲花蜱(Amblyomma americanum)、血红扇头蜱(Rhinpicephalus sanguineus)、变异革蜱(Dermacentor variabilis)等多个物种中得以证实。因此，4D8是一种理想的疫苗候选抗原，可用于防治多种蜱类并能作用于该基因的同源直系基因产物。本研究以森林革蜱为研究对象。首先通过液氮研磨法提取森林革蜱饥饿雌性成蜱总RNA，将其反转录成cDNA，根据GenBank中的蜱4D8基因序列设计两对引物，一对引物用于扩增获得4D8基因，另一对引物带有酶切位点，用于之后的蛋白表达体系的构建。将目的基因连入pMD19-T载体，构建重组克隆载体pMD19-T-4D8。经测序分析，表明森林革蜱4D8与边缘革蜱(Dermacentor marginatus)同源性高达100%，与变异革蜱同源性高达98%。之后构建重组克隆载体pMD19-T-4D8e，并对pMD19-T-4D8e质粒及表达载体pET-32(a+)质粒分别进行双酶切，双酶切片段经T4连接酶连接后，将质粒转化至克隆载体DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆，提质粒，转化至原核表达载体E.coli rosetta感受态细胞中，构建得到重组原核表达载体pET-32(a+)-4D8。经IPTG诱导，表达并纯化重组蛋白，通过免疫印迹表明，该重组蛋白是分子质量为40KD左右的融合蛋白，且表达产物能被森林革蜱雌性成蜱抗原免疫兔血清识别。此研究结果为制备抗蜱疫苗提供依据，对了解蜱类生理学具有重要的理论意义，对蜱类防治具有实际应用价值。

关键词：森林革蜱 4D8基因分子克隆原核表达疫苗免疫原性