检索结果-南通市图书馆

小麦棉子糖合成酶基因(TaRS)的克隆及特性分析

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2017年第8期25卷 1245-1254页

作者：乔梦田原杨瑞付金梅康妮闵东红张小红西北农林科技大学生命科学学院西北农林科技大学农学院

棉子糖(raffinose)作为一种重要的可溶性碳水化合物广泛存在于高等植物中,并且参与植物抵抗各种非生物逆境胁迫。棉子糖合成酶(raffinose synthase,RS,EC2.***.1.82)是催化肌醇半乳糖苷和蔗糖产生棉子糖的关键酶。本研究通过同源比对克隆... 详细信息

棉子糖(raffinose)作为一种重要的可溶性碳水化合物广泛存在于高等植物中,并且参与植物抵抗各种非生物逆境胁迫。棉子糖合成酶(raffinose synthase,RS,EC2.***.1.82)是催化肌醇半乳糖苷和蔗糖产生棉子糖的关键酶。本研究通过同源比对克隆到了一个小麦(Triticum aestivum)的棉子糖合成酶基因(triticum aestivum raffinose synthse,TaRS),该基因定位于小麦3B染色体上。序列分析显示,TaRS基因具有一个完整的开放阅读框(2 349 bp),包含两个保守模体,即Kx D和Rxxx D,属于糖苷水解酶超家族GHD(glycoside hydrolases,clan D)。在进化关系上,小麦TaRS蛋白与山羊草(Aegilops tauschii)的棉子糖合成酶XM020298559.1亲缘关系最近(相似度为98.47%)。Southern杂交结果表明,TaRS基因在中国春小麦基因组中存在至少4个拷贝。亚细胞定位结果显示,TaRS蛋白定位在小麦叶肉细胞的细胞膜上。对该基因进行组织表达特异性分析发现,TaRS在小麦的根、茎、叶和种子中都有表达,但在叶片中的表达量最高。将TaRS在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行异源表达,通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测发现,TaRS能够以蔗糖和肌醇半乳糖苷为底物在体外合成棉子糖,并且反应的最适pH在8.0左右。此外,TaRS的表达受到脱水、42℃高温、高盐和4℃低温4种胁迫的诱导,分别于胁迫12、1、1和48 h时表达量达到最大。本研究为进一步利用TaRS基因进行小麦抗逆育种提供了理论依据。

关键词：中国春小麦基因克隆棉子糖合成酶酶活非生物逆境胁迫

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

大豆棉子糖合成酶基因生物信息学及表达分析

基因组学与应用生物学 2020年第11期39卷 5150-5156页

作者：马婷婷代诗佳丁岩乔孙礼心玉邱爽何佳琦翟莹齐齐哈尔大学生命科学与农林学院抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室齐齐哈尔161006

棉子糖是一种广泛存在于植物中并参与植物抵抗各种非生物逆境胁迫的重要碳水化合物。棉子糖合成酶(RS)是催化肌醇半乳糖苷和蔗糖产生棉子糖的关键酶。本研究对大豆中3个编码RS的基因序列进行生物信息学分析。结果显示,3个RS基因所编码... 详细信息

棉子糖是一种广泛存在于植物中并参与植物抵抗各种非生物逆境胁迫的重要碳水化合物。棉子糖合成酶(RS)是催化肌醇半乳糖苷和蔗糖产生棉子糖的关键酶。本研究对大豆中3个编码RS的基因序列进行生物信息学分析。结果显示,3个RS基因所编码的蛋白序列长度从758到782个氨基酸残基,等电点分别为6.07、6.39和6.07。RS蛋白主要定位于叶绿体或/和细胞核中,且均含有不同数量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)磷酸化位点。蛋白系统进化分析表明,GmRS1、GmRS2与豌豆Ps RS的亲缘关系最近,GmRS3与拟南芥AtRS5和黄瓜CsRS的亲缘关系最近。启动子序列分析表明,3个RS基因启动子序列中含有多种逆境相关顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果显示,GmRS1和GmRS3在高盐、干旱、低温和高温处理下表达量上升,而GmRS2仅在高温处理下表达量上升。表明大豆3个RS基因均可不同程度响应非生物胁迫。

关键词：大豆棉子糖合成酶非生物胁迫生物信息学表达分析

梅花肌醇半乳糖苷和棉子糖合成酶基因的克隆与功能初探

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

梅花肌醇半乳糖苷和棉子糖合成酶基因的克隆与功能初探

作者：左静华中农业大学

学位级别：硕士

梅(Prunus mume *** Zucc.)原产我国南方地区,冬季低温限制了其在北方地区的分布。棉子糖家族寡糖(Raffinose family oligosaccharides,RFOs)在植物体内的积累能够提高植物抵抗、适应逆境的能力,是植物细胞内重要的渗透调节物质,由蔗糖... 详细信息

梅(Prunus mume *** Zucc.)原产我国南方地区,冬季低温限制了其在北方地区的分布。棉子糖家族寡糖(Raffinose family oligosaccharides,RFOs)在植物体内的积累能够提高植物抵抗、适应逆境的能力,是植物细胞内重要的渗透调节物质,由蔗糖逐步叠加半乳糖基团合成。肌醇半乳糖苷合成酶(Galaetinol synthase,GolS)和棉子糖合成酶(Raffinose synthase,RS)是合成过程中的重要酶。为探索PmGolS和PmRS基因在响应非生物逆境胁迫中的功能,本研究从‘雪梅’中克隆得到了5个PmGolS基因(Pm003196、Pm006697、Pm008430、Pm012900、Pm020004)和2个PmRS基因(Pm027594、Pm025896),并构建了相应的超量表达载体;利用qRT-PCR检测了它们在昼夜和非生物逆境胁迫下的表达模式;异源转化拟南芥,鉴定转化植株在非生物逆境胁迫下的抗性;同时,转化梅花,获得了正常生根的转基因植株。主要结果如下:***和PmRS基因的克隆与序列分析根据‘雪梅’幼叶4℃低温处理下的基因表达谱和梅花基因组数据,克隆了5个PmGolS基因和2个PmRS基因。进化树分析发现:不同物种间GolS同源蛋白的近缘性高于同一物种内的不同GolS亚型,说明,物种进化可能发生在种内GolS基因序列复制事件之后;RS同源蛋白进化树的分析结果与GolS一致。氨基酸序列分析发现:PmGol S编码的蛋白质氨基酸序列高度保守,在第130个氨基酸左右都有锰结合元件DXD,在第270个氨基酸左右都有丝氨酸磷酸化位点,且羧基末端都有一个特征性的疏水性五肽(APSAA);而PmRS编码的蛋白质氨基酸序列保守性较低,但都具有KXD和RXXXD两个保守催化域。***和PmRS基因在昼夜及非生物逆境胁迫下的表达模式以‘雪梅’幼叶为材料,利用qRT-PCR技术,检测了5个PmGolS基因和2个PmRS基因昼夜及低温、干旱、高盐和ABA胁迫下的表达丰度变化,结果表明:PmGolS基因中Pm003196存在明显的昼夜表达规律,另外6个基因并无明显的昼夜表达规律;所有目的基因都不响应ABA胁迫,但对另外三个非生物逆境胁迫各有不同程度的响应,Pm003196、Pm006697、Pm025896响应低温胁迫,Pm008430、Pm027594、Pm025896响应NaCl胁迫,Pm003196、Pm008430、Pm025896、Pm027594响应甘露醇胁迫,Pm027594不响应低温胁迫,Pm012900、Pm020004在所有胁迫下表达量都很低。***蛋白亚细胞定位构建了PmGolS家族中的三个基因Pm003196、Pm008430、Pm006697相应的YFP融合蛋白表达载体,对其进行亚细胞定位分析。结果显示,三种蛋白均分布在细胞核、细胞质和细胞膜中。***和PmRS基因异源转化拟南芥及转化植株的抗寒性分析构建了5个PmGolS基因和2个PmRS基因的超量表达载体,并转化拟南芥。T1代拟南芥阳性苗RT-PCR分析结果显示,除Pm020004外,其它基因均获得高表达转化株系。对拟南芥T2代和野生型株系进行低温处理和电导率测定,结果显示:转PmGolS基因拟南芥株系的存活率和相对电导率与野生型株系没有明显差别;而转PmRS基因拟南芥株系的存活率比野生型株系高,且相对电导率比野生型株系低;此外,转Pm003196基因拟南芥高株系的种子在400mM甘露醇胁迫下的萌发率比野生型高。***转化梅花PmGolS基因超量表达载体转化梅花成熟胚子叶,共侵染262个外植体,得到了转Pm008430基因的抗性芽24个,转入伸长培养基后有15个抗性芽伸长至2㎝左右,PCR检测显示有8个呈阳性,继代130d后有一棵转化苗生根。

关键词：梅花肌醇半乳糖苷合成酶棉子糖合成酶超量表达非生物逆境胁迫

拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2019年第1期29卷 69-76页

作者：郑小芬李晓霞黄金兰余方回刘妙玲范芳黄迎娣张玲周英彪广东省岭南特色果蔬加工及应用工程技术研究中心广东普通高校食品科学创新团队广东石油化工学院生物与食品工程学院广东茂名525000

[目的]基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础。[方法]RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)... 详细信息

[目的]基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础。[方法]RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物。[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28mmol/(mg·min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21mmol/(mg·min)。[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍。

关键词：棉子糖肌醇半乳糖苷合成酶棉子糖合成酶拟南芥基因克隆体外催化活性

黄瓜棉子糖合成酶基因克隆,功能验证及其低温响应研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黄瓜棉子糖合成酶基因克隆,功能验证及其低温响应研究

植物中棉子糖系列寡糖代谢及其调控关键酶研究进展

中国园艺学会2011年学术年会

作者：眭晓蕾孟凡珍王虹云韦玉霞李瑞富王振雨胡丽萍王绍辉任华中张振贤中国农业大学农学与生物技术学院北京农学院植物科学技术学院

棉子糖家族寡糖(raffinose family oligosaccharides,RFOs)是黄瓜(Cucumis sativus L.)韧皮部同化物质运输的主要形式,且在抵御低温、干旱等非生物逆境胁迫中也具有重要作用。棉子糖合成酶(Raffinose synthase,RS,EC2.***.1.82)是调控蔗糖进入RFOs生物合成途径的关键酶。对黄瓜RS编码基因(CsRS)克隆,时空表达,功能验证和亚细胞定位,以及CsRS对低温与外源脱落酸(ABA)的响应进行研究,有助于揭示黄瓜棉子糖合成代谢的分子机理,并为黄瓜糖代谢的调控及其产量和品质形成提供一定理论依据。

关键词：黄瓜棉子糖合成酶基因表达棉子糖低温脱落酸(ABA)

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

西北植物学报 2008年第4期28卷 852-859页

作者：李芳汪晓峰北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

棉子糖系列寡糖代谢与植物生长发育、逆境胁迫、种子耐贮性及脱水耐性等关系密切.棉子糖系列寡糖的合成从棉子糖的合成开始,由半乳糖苷肌醇上的半乳糖基的转移依次生成棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖等.寡糖代谢是一个复杂的调控体系,其中肌... 详细信息

棉子糖系列寡糖代谢与植物生长发育、逆境胁迫、种子耐贮性及脱水耐性等关系密切.棉子糖系列寡糖的合成从棉子糖的合成开始,由半乳糖苷肌醇上的半乳糖基的转移依次生成棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖等.寡糖代谢是一个复杂的调控体系,其中肌醇-1-磷酸合成酶、肌醇半乳糖苷合成酶、蔗糖合成酶、棉子糖合成酶、水苏糖合成酶和毛蕊花糖合成酶等参与了棉子糖系列寡糖的生物合成过程.本文对植物中棉子糖系列寡糖的代谢及其重要调控酶的特性、功能及分子生物学研究进展进行综述.

关键词：肌醇半乳糖苷合成酶肌醇-1-磷酸合成酶棉子糖半系列寡糖棉子糖合成酶水苏糖合成酶

在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径的基础研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代食品科技 2017年第5期33卷 121-128,96页

作者：周英彪田朝玉朱玥明张娟琨孙媛霞教育部发酵工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院天津300457 工业酶国家工程实验室中国科学院天津工业生物技术研究所天津300308

研究了在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径,为后续高效生物合成棉子糖细胞工厂的构建奠定基础。敲除酿酒酵母中能降解棉子糖的蔗糖酶与α-半乳糖苷酶的基因构建出E1(Δsuc2::Δmel1);在此基础上,构建单基因表达拟南芥肌醇半乳糖合成酶... 详细信息

研究了在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径,为后续高效生物合成棉子糖细胞工厂的构建奠定基础。敲除酿酒酵母中能降解棉子糖的蔗糖酶与α-半乳糖苷酶的基因构建出E1(Δsuc2::Δmel1);在此基础上,构建单基因表达拟南芥肌醇半乳糖合成酶基因gols1与gols3及棉子糖合成酶基因sip1与sip5的工程菌株,及构建双基因组合表达(gols1::sip1、gols1::sip5、gols3::sip1与gols3::sip5)工程菌株;比较工程菌株代谢产物如肌醇、UDP-半乳糖、肌醇半乳糖、蔗糖及棉子糖等生成情况,验证在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径的可行性。研究表明,通过共表达外源肌醇半乳糖合成酶及棉子糖合成酶基因,并敲除能降解棉子糖的蔗糖酶与α-半乳糖苷酶的基因,在酿酒酵母中实现了棉子糖生物合成途径的重构;肌醇半乳糖合成酶与棉子糖合成酶基因的不同共表达组合,棉子糖生成量有差异;重构的棉子糖生物合成途经改变了酿酒酵母原始菌株的代谢流量。

关键词：生物合成棉子糖酿酒酵母肌醇半乳糖合成酶棉子糖合成酶

基于RNA-Seq解析小桐子棉子糖代谢途径在干旱适应中的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2018年第9期37卷 3978-3987页

作者：王君珂王莎莎张博崔明昆龚明云南师范大学生命科学学院生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南省生物质能与环境生物技术重点实验室

作为新兴的能源植物,小桐子所具备的耐贫瘠、种子含油量高、油质优良等特性使其受到广泛关注。本研究对小桐子幼苗进行10%PEG模拟干旱锻炼与空气干旱胁迫处理,以叶片样品进行RNA-Seq文库构建并基于Illumina Hiseq2000平台进行高通量测序... 详细信息

作为新兴的能源植物,小桐子所具备的耐贫瘠、种子含油量高、油质优良等特性使其受到广泛关注。本研究对小桐子幼苗进行10%PEG模拟干旱锻炼与空气干旱胁迫处理,以叶片样品进行RNA-Seq文库构建并基于Illumina Hiseq2000平台进行高通量测序,对差异表达基因进行鉴定和通路富集分析,发现糖代谢通路得到了显著富集。其中,肌醇半乳糖苷合成酶（inositol galactoside synthase,GS）和棉子糖合成酶（raffinose synthase,RS）作为棉子糖系列寡糖合成途径的2类关键酶,其家族成员的不同编码序列在干旱胁迫下呈现不同的表达模式。实时荧光定量（RT-q PCR）验证了两个酶基因家族关键成员对干旱处理的诱导响应,暗示了棉子糖合成途径参与了干旱锻炼和胁迫耐受性的形成,为进一步揭示小桐子抗旱性形成的分子机制及其基因工程改良奠定了坚实的理论基础。

关键词：小桐子干旱胁迫 RNA-Seq 肌醇半乳糖苷合成酶棉子糖合成酶

巴西橡胶树GolS和RS家族基因理化特性与表达特征分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分子植物育种 2020年第20期18卷 6665-6670页

作者：卢基来王志勇龙翔宇方永军周明旭阳江华秦云霞海南大学热带作物学院海口570228 中国热带农业科学院橡胶研究所海口571101 云南农业大学热带作物学院普洱665000

肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase, GolS)和棉子糖合成酶(raffinose synthase, RS)是棉子糖系列寡糖(raffinose family oligosaccharides, RFOs)代谢的重要酶,广泛参与植物的生长发育以及逆境胁迫抗性等。本研究基于橡胶树基因... 详细信息

肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase, GolS)和棉子糖合成酶(raffinose synthase, RS)是棉子糖系列寡糖(raffinose family oligosaccharides, RFOs)代谢的重要酶,广泛参与植物的生长发育以及逆境胁迫抗性等。本研究基于橡胶树基因组数据库平台,分离鉴定Gol S和RS家族成员,重点分析其表达模式,以了解其在橡胶树叶片发育及割胶过程中的作用。结果表明:HbGolS1和HbRS1分别是乳管中两家族的关键成员,HbGolS1在叶片和胶乳中高表达,随叶片发育其丰度逐渐升高,在成熟叶片中达到峰值。此外,该基因受割胶显著诱导上调表达,乙烯利明显抑制其表达;与之不同,HbRS1在胶乳中特异表达,不受割胶和乙烯利处理的影响。本研究结果阐明了HbGolS和HbRS随叶片发育及割胶的表达特性,为进一步解析橡胶树中RFOs代谢及其功能依据。

关键词：逆境胁迫半乳糖醇合成酶棉子糖合成酶