检索结果-南通市图书馆

基因组学与应用生物学 2014年第1期33卷 57-62页

作者：张粲高乐赫荣琳王国坤于俊杰武改红张东远天津科技大学生物工程学院天津300457 天津工业生物技术研究所天津市工业生物系统与过程工程重点实验室天津300308

本文对桧状青霉H16的原生质体制备和再生的相关影响因子进行了初步的研究。结果表明:于30℃,转速为200 r/min的SDYS培养基中培养了16 h的菌丝,经S1溶液洗涤后,在1 mol/L的NaCl为等渗溶液,采用浓度为10 mg/mL的酶液,酶解温度为35℃,转速... 详细信息

本文对桧状青霉H16的原生质体制备和再生的相关影响因子进行了初步的研究。结果表明:于30℃,转速为200 r/min的SDYS培养基中培养了16 h的菌丝,经S1溶液洗涤后,在1 mol/L的NaCl为等渗溶液,采用浓度为10 mg/mL的酶液,酶解温度为35℃,转速为100 r/min的条件下处理1.5 h时原生质体量达到最佳,本实验范围内最高达到6×106个/mL;同时,选取含有25 mmol/L Ca2+的改良的察氏培养基培养经S2洗涤的原生质体时,原生质体可以达到较佳的再生率,本实验范围内最高达到24.3%。该研究为桧状青霉后期的菌株改造和遗传转化体系的建立奠定了基础。

关键词：桧状青霉原生质体制备原生质体再生

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

桧状青霉β-葡萄糖苷酶关键基因的研究

桧状青霉β-葡萄糖苷酶关键基因的研究

引用

作者：张梦娣天津科技大学

学位级别：硕士

纤维素酶系可分为外切-β-1,4-葡聚糖酶,内切-β-1,4-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶,其中β-葡萄糖苷酶活性普遍偏低是导致纤维素酶系水解效率较低的主要原因,而且β-葡萄糖苷酶水解纤维素产生的纤维寡糖和纤维二糖又会反馈抑制外切酶和内切... 详细信息

纤维素酶系可分为外切-β-1,4-葡聚糖酶,内切-β-1,4-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶,其中β-葡萄糖苷酶活性普遍偏低是导致纤维素酶系水解效率较低的主要原因,而且β-葡萄糖苷酶水解纤维素产生的纤维寡糖和纤维二糖又会反馈抑制外切酶和内切酶的水解活性,进一步抑制了纤维素酶系水解纤维素的能力。我们设想通过提高β-葡萄糖苷酶的活性,从而提高整个水解酶系的水解效率。为了提高β-葡萄糖苷酶的活性,我们必须明确β-葡萄糖苷酶关键基因的作用,从而为进一步提高纤维素酶系水解效率奠定基础。桧状青霉是一种木质纤维素降解菌,可快速利用纤维素的水解物进行代谢。常采用基因工程手段对桧状青霉进行改造,从而提高它的木质纤维素降解能力,增加它的纤维素酶产量。对15个关键调控因子进行过表达,然后对过表达菌株进行分析,再对关键因子进行基因敲除,观察敲除后酶活变化,从而初步预测桧状青霉中β-葡萄糖苷酶关键基因的功能。具体结果发现过表达Peng 1582的β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活分别为对照菌株的50.57%和38.43%;Peng 3441的β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活分别占对照菌株的85.06%和70.86%;Peng 1797的β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活分别只占对照菌株的50.59%和19.12%;Peng 2535突变菌株的酶活显著高于对照菌株,其β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活分别是对照菌株的1.17倍和3.05倍。获得两株桧状青霉的敲除突变株ΔPeng 1797和ΔPeng 3441,研究结果表明突变菌株ΔPeng 1797的β-葡萄糖苷酶酶活比对照菌株9-3高出59.85%,外切酶活高出62.76%,滤纸酶活高出24.17%。初步猜测该基因是β-葡萄糖苷酶负调控转录因子。

关键词：桧状青霉基因敲除纤维素酶 ATMT转化

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

桧状青霉GH61基因对植物木质纤维素降解的功能研究

桧状青霉GH61基因对植物木质纤维素降解的功能研究

引用

作者：白雪西北师范大学

学位级别：硕士

木质纤维素在自然界中的储量十分丰富,是植物生物质最主要的组成成分,其资源化利用可获得生物乙醇等液体燃料和化工产品。发展生物质能源不仅有助于保护环境、减缓石油消耗,对我国能源问题的解决及农业产业链的延伸都起到了重要的支撑... 详细信息

木质纤维素在自然界中的储量十分丰富,是植物生物质最主要的组成成分,其资源化利用可获得生物乙醇等液体燃料和化工产品。发展生物质能源不仅有助于保护环境、减缓石油消耗,对我国能源问题的解决及农业产业链的延伸都起到了重要的支撑作用。目前木质纤维素酶的生产应用主要依靠丝状真菌胞外分泌的酶系,然而由于化学成分及结构复杂等多种因素,其降解酶系的生产成本高且水解活性低,制约了木质纤维素的有效利用和开发,因此高效的木质纤维素水解酶系的生产依然是木质纤维素资源利用的瓶颈,协同传统纤维素酶系进行纤维素水解的有关蛋白也逐渐成为该领域的研究热点。糖苷水解酶61家族是一类在纤维水解真菌中广泛存在、能够显著提高纤维素酶系对底物水解作用的蛋白酶,并且是唯一的Cu2+依赖的氧化酶家族,它对于纤维素底物的作用本质为氧化过程,目前GH61家族蛋白酶的研究已经成为纤维素酶领域的研究热点之一。桧状青霉是本实验室前期工作中筛选到的1株产纤维素酶的青霉属菌,通过基因组测序及比较基因组学分析,发现桧状青霉的基因组大小为27.25Mbp,共预测到8591个编码基因;KOG与GO的功能注释结果表明桧状青霉的次级代谢产物代谢及分泌的功能较为发达;通过水解酶的注释发现桧状青霉的纤维素水解酶系较为均衡,有较多的半纤维素酶编码基因,并发现了一个GH61基因,是很好的产纤维素酶研究菌种。为了更好的研究桧状青霉纤维素酶基因的调控及表达机制,建立了根癌农杆菌介导的桧状青霉遗传转化体系,优化后的桧状青霉ATMT法实验条件为:桧状青霉孢子悬液浓度106 cfu/m L,农杆菌菌液OD600值0.6左右,以等体积混合,于含有200μmol/L诱导剂乙酰丁香酮的AIM平板上共培养,共培养温度22℃,共培养时间48h。实验证明在该条件下得到的转化子数量最多,且具有较好的遗传稳定性。通过构建桧状青霉GH61基因敲除盒,采用优化后的农杆菌介导遗传转化法成功敲除了桧状青霉基因组的GH61基因,并研究了该基因的生物学功能。对桧状青霉野生株与GH61基因敲除株的表型分析及生长速率的比较发现,GH61基因的敲除对桧状青霉的菌株生长仅有较小的负面影响,胞外蛋白浓度和纤维素酶活力也是略有降低。在添加有等量FPA胞外酶液的20m L水解体系中,GH61基因敲除株对1%气爆玉米秸秆底物的水解能力也要低于桧状青霉野生株,水解72h后的水解率与野生株相比降低了17.5%。对桧状青霉的GH61基因进行扩增,构建了GH61基因表达盒并在黑曲霉中成功进行了异源表达,得到了2株重组株。通过对黑曲霉野生株与GH61重组株的酶活测定,比较结果发现重组株的滤纸酶活及β-葡萄糖苷酶酶活与黑曲霉野生株相比均有相应提高;添加等量FPA胞外酶液的20m L水解实验结果也表明,水解72h后GH61重组株的水解率与野生株相比分别提高了9.8%和12.1%。

关键词：桧状青霉糖苷水解酶家族61 农杆菌介导的遗传转化基因敲除异源表达

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

纤维素酶高产菌株桧状青霉9-3的诱变选育及产酶条件研究

引用

基因组学与应用生物学 2014年第3期33卷 564-569页

作者：张粲武改红赫荣琳于俊杰马丽娟李晨贾文娣杨洪江张东远天津科技大学生物工程学院天津300457 中国科学院天津工业生物技术研究所天津市工业生物系统与过程工程重点实验室天津300308

本文以桧状青霉9-3为出发菌株,采用硫酸二乙酯(DES)诱变,通过筛选得到一株酶活力高且遗传稳定性良好的菌株H16,其滤纸酶活力、β-葡萄糖苷酶酶活力与蛋白产量均较出发菌株相比均提高了4倍左右。并通过对发酵培养基以及发酵条件的优化,... 详细信息

本文以桧状青霉9-3为出发菌株,采用硫酸二乙酯(DES)诱变,通过筛选得到一株酶活力高且遗传稳定性良好的菌株H16,其滤纸酶活力、β-葡萄糖苷酶酶活力与蛋白产量均较出发菌株相比均提高了4倍左右。并通过对发酵培养基以及发酵条件的优化,确定了最佳的产酶条件为:微晶纤维素浓度为2%,玉米浆干粉浓度为1.5%,发酵温度为30℃,初始pH为5.5,装液量为30 mL/250 mL,发酵周期为5 d。在优化的条件下,该菌株的纤维素酶和蛋白产量均进一步提高25%左右。

关键词：桧状青霉纤维素酶诱变筛选酶活

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

纤维素酶高产菌筛选及产酶条件与酶学性质初探

纤维素酶高产菌筛选及产酶条件与酶学性质初探

引用

作者：张粲天津科技大学

学位级别：硕士

木质纤维素是地球上丰富的生物质资源。利用微生物产生的纤维素酶将秸秆类木质纤维素转化为可用于发酵生产液体燃料的秸秆糖,对缓解人类社会面临的环境和能源危机具有重大的意义。目前,纤维素酶已被广泛的应用于食品、纺织、化工、造纸... 详细信息

木质纤维素是地球上丰富的生物质资源。利用微生物产生的纤维素酶将秸秆类木质纤维素转化为可用于发酵生产液体燃料的秸秆糖,对缓解人类社会面临的环境和能源危机具有重大的意义。目前,纤维素酶已被广泛的应用于食品、纺织、化工、造纸、中药提取、饲料等领域。但是,由于现有纤维素酶酶活力低,酶解效率有限,生产成本过高等因素,成为制约木质纤维素大规模利用的瓶颈问题。因此,通过筛选高产菌株而改善纤维素酶的工业化生产具有重大意义。桧状青霉(Penicillium piceum)9-3是本实验室从秸秆中分离得到的一株纤维素酶产生菌,它具有酶系平衡和酶产量较高的优势。本研究以桧状青霉9-3为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)诱变,并对诱变菌株进行发酵培养,通过测定粗酶液的纤维素酶酶活力筛选得到一株纤维素酶高产菌株H16,其纤维素酶活力与发酵液中总蛋白产量均较出发菌株提高了4倍左右。并且,该菌株在传代6次后性能仍然保持良好。本研究还通过单因素实验对发酵培养基以及发酵条件的进行了初步优化,确定最佳的产酶条件为：微晶纤维素浓度为2%,玉米浆干粉浓度为1.5%,发酵温度为30℃,初始pH为5.5,装液量为30mL/250mL三角瓶,发酵周期为5d。在优化的条件下,该菌株的滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶酶活分别达到了7.41IU/mL和52.96IU/mL。本研究还进一步针对桧状青霉H16所产纤维素酶的酶学性质进行了分析。结果表明该菌株所产纤维素酶在pH4.0-6.5之间稳定性良好,最适反应pH值为5.0-5.5;最适反应温度为50-55℃,但温度耐受性较差,在50℃保温24h后,酶活力仅有初始酶活力的50%。将该酶系与模式菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)RUT C30所产的纤维素酶酶系进行复配后,能够明显的提高RUT C30的纤维素酶酶系对滤纸(滤纸酶活力)和汽爆玉米秸秆的水解效率。

关键词：桧状青霉纤维素酶诱变筛选酶活

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：