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抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白基因表达对缝隙连接蛋白43结构和功能的影响

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中国病理生理杂志 2013年第6期29卷 982-987页

作者：张黔桓邓春玉饶芳刘晓颖麦丽萍朱杰宁谭虹虹吴书林广东省人民医院心内科广东省心血管病研究所广东广州510080

目的:采用基因沉默技术抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白(DSP)基因表达以明确DSP与缝隙连接蛋白43(Cx43)的结构和功能关系。方法:用基因沉默技术抑制DSP基因的表达,Western blotting和流式细胞术检测HL-1细胞DSP和Cx43蛋白的表达,用双免... 详细信息

目的:采用基因沉默技术抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白(DSP)基因表达以明确DSP与缝隙连接蛋白43(Cx43)的结构和功能关系。方法:用基因沉默技术抑制DSP基因的表达,Western blotting和流式细胞术检测HL-1细胞DSP和Cx43蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测DSP与Cx43蛋白的表达与定位情况,并用划痕标记染料示踪技术检测细胞缝隙连接通讯状况。结果:与空白组和对照组相比,siRNA-DSP组的DSP和Cx43蛋白表达量降低(P蛋白存在共定位情况,而siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位遭到破坏,Cx43蛋白出现再分布,在细胞内检测到Cx43蛋白,并且划痕标记染料示踪技术检测发现siRNA-DSP组Lucifer yellow通过HL-1细胞缝隙连接的传输功能降低。结论:DSP表达抑制不仅使Cx43出现再分布,而且影响缝隙连接传导功能。

关键词：缝隙连接蛋白43 桥粒斑蛋白基因沉默 HL-1细胞

桥粒斑蛋白在肺动脉高压中对血管肺动脉平滑肌的功能研究

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国际呼吸杂志 2022年第23期42卷 1809-1817页

作者：吴雪芬江倩罗晓韵王健卢文菊张晨婷广州医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科、广州呼吸健康研究院、国家呼吸系统疾病临床医学研究中心、国家呼吸医学中心、呼吸疾病国家重点实验室广州510120

目的探究桥粒斑蛋白(DSP)在肺动脉高压(PH)大鼠模型与人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)的表达变化及其在PH发生、发展中的作用。方法24只SPF级别雄性SD大鼠运用随机数字表法随机分为正常对照(NC)组、野百合碱(MCT)组、低氧(HYP)组及低氧联合... 详细信息

目的探究桥粒斑蛋白(DSP)在肺动脉高压(PH)大鼠模型与人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)的表达变化及其在PH发生、发展中的作用。方法24只SPF级别雄性SD大鼠运用随机数字表法随机分为正常对照(NC)组、野百合碱(MCT)组、低氧(HYP)组及低氧联合Sugen5416(SuHx)组,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数(RVHI),观察各组大鼠血管增厚程度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠中肺组织中DSP的表达情况。体外培养hPASMCs,分别用转化生长因子β1(TGF-β1)或HYP处理细胞24、48、72 h,Western blot检测各组细胞中DSP表达情况。采用小分子siRNA DSP干扰序列及阴性对照序列分别转染hPASMCs,分为DSP干扰(siDSP)组及阴性对照(siNT)组。2组均进行TGF-β1、CoCl2或HYP处理48 h,Western blot检测增殖分化及凋亡相关蛋白[p-p38、增殖相关蛋白(PCNA)、抗凋亡蛋白(Bcl2)、促凋亡蛋白(Bax)]的表达情况,划痕实验检测细胞的迁移能力变化,EdU细胞增殖流式检测细胞增殖能力变化。结果MCT组、HYP组、SuHx组DSP表达量[(3.10±0.59)、(4.34±0.75)、(3.84±0.13)]较NC组(1.00±0.19)升高,差异均有统计学意义(P值均蛋白表达分别较TGF-β10 h组及HYP 0 h组升高[(4.42±0.35)比(1.00±0.07)、(2.62±0.32)比(1.00±0.21)],差异均有统计学意义(P值均<0.01)。siDSP+TGF-β1组、siDSP+CoCl2组、siDSP+HYP组中hPASMCs的p-p38表达量较siNT+TGF-β1组、siNT+CoCl2组、siNT+HYP组升高[(2.14±0.20)比(1.00±0.14)、(1.66±0.09)比(1.00±0.12)、(3.03±0.22)比(1.00±0.50)],差异均有统计学意义(P值均<0.05)。siDSP+HYP组中hPASMCs的PCNA表达量较siNT+HYP组下降[(0.55±0.04)比(1.00±0.04)],差异有统计学意义(P值<0.05)。siDSP+TGF-β1组、siDSP+CoCl2组、siDSP+HYP组中hPASMCs的Bcl2/Bax比值较siNT+TGF-β1组、siNT+CoCl2组、siNT+HYP组下降[(0.85±0.06)比(1.00±0.04)、(0.73±0.08)比(1.00±0.07)、(0.72±0.01)比(1.00±0.05)],差异均有统计学意义(P值均<0.05)。siDSP+TGF-β1组hPASMCs的细胞迁移率较siNT+TGF-β1组减少[(27.56±2.44)%比(58.05±2.25)%],差异有统计学意义(t=9.20,P<0.001);siDSP+CoCl2组hPASMCs的细胞迁移率较siNT CoCl2组减少[(25.78±2.55)%比(47.30±2.10)%],差异有统计学意义(t=6.53,P<0.001)。siDSP+TGF-β1组hPASMCs的细胞增殖率较siNT+TGF-β1组减少[(6.07±0.23)%比(10.62±0.50)%],差异有统计学意义(t=8.29,P=0.001);siDSP+HYP组hPASMCs的细胞增殖率较siNT+HYP组减少[(2.84±0.46)%比(5.56±0.46)%],差异有统计学意义(t=4.17,P=0.014)。结论DSP能够促进hPASMCs的增殖和迁移,促进肺血管的重构,在PH的发生、发展起重要作用。

关键词：肺动脉高压转化生长因子β1 桥粒斑蛋白肺动脉平滑肌细胞

重编程构建人桥粒斑蛋白（DSP）突变造成的致心率失常性右室心肌病（ARVC）疾病模型

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重编程构建人桥粒斑蛋白（DSP）突变造成的致心率失常性右室心肌...

作者：夏书涛湖北大学

学位级别：硕士

体细胞重编程是一种将多能性转录因子导入体细胞中,从而获得诱导性多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPSC）的技术。与胚胎干细胞相比,iPSC在保持自我更新及各向分化潜能的同时避免了“破坏囊胚”的伦理问题。有关iPSC的重... 详细信息

体细胞重编程是一种将多能性转录因子导入体细胞中,从而获得诱导性多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPSC）的技术。与胚胎干细胞相比,iPSC在保持自我更新及各向分化潜能的同时避免了“破坏囊胚”的伦理问题。有关iPSC的重编程方法也越来越丰富。由早期的病毒介导逐渐发展为蛋白质导入,再到小分子诱导。利用iPSC在体外进行诱导分化,可以得到心肌细胞。同时,心肌细胞纯化和成熟方案的进步,使得经iPSC分化得到大量人心肌细胞成为可能。体外分化得到的人源心肌细胞,可以作为原料用于再生医学的细胞治疗和遗传性心肌病的疾病模型构建。致心律失常性右室心肌病（Arrhythmia right ventricular cardiomyopathy,ARVC）是遗传性心肌病中的一种,其临床表现为心室纤维脂肪组织浸润,伴有室性心律失常,导致心源性猝死风险增加。受限于小鼠模型对ARVC模拟的局限性,可利用患者血细胞进行重编程来获得iPSC,继而在体外进行大量诱导和分化,获得特异性人源心肌细胞,并以此来进一步构建病人突变位点特异的ARVC模型,深入探究致病机理。本研究利用两例含有桥粒斑蛋白（Desmoplakin,DSP）双突变的同基因型临床诊断病例（同卵双胞胎）单核细胞进行体外重编程,获得DSP双突变的iPSC细胞系HUBU5及HUBU5-B（DSP,c.104G＞T,c.5617C＞T）。同时,通过对患者父母单核细胞进行重编程,得到HUBU5-M（DSP,c.104G＞T）,及HUBU5-F（DSP,c.5617C＞T）作为单点突变对照;并以正常iPSC（WTC）作为正常对照。对各实验组iPSC进行心肌细胞的诱导分化并进一步构建人心肌微组织,初步表型分析发现:1)DSP双突变不会影响所获得iPSC的多能性及向心肌细胞分化的能力;2)在iPSC向心肌细胞的分化过程中,和正常组相比,DSP双突变iPSC与脂肪形成的相关基因上调、心肌细胞凋亡水平上升、心肌细胞内DSP的蛋白定位改变。本研究从头建立并优化了基于人单核细胞的体细胞重编程体系及人iPSC向心肌细胞分化体系。在此基础上获得了ARVC患者特异的iPSC细胞系,并对其进一步诱导分化为成熟心肌细胞,初步建立ARVC疾病模型。本研究将有助于从心肌发育角度探索心脏出现纤维化与脂肪化的相关分子机制,为ARVC致病机理的研究提供了基础。

关键词：致心律失常性右室心肌病人诱导性多能干细胞桥粒斑蛋白疾病模型

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桥粒斑蛋白II在肿瘤组织中的表达

中华病理学杂志 1995年第3期24卷 170-172页

作者：杨举伦罗学林蔡琳邹红明洪解放军成都军区昆明总医院病理科解放军成都军区昆明总医院老年病科昆明医学附属第一医院中心实验室

桥粒斑蛋白ＩＩ（ＤＰＩＩ）是一种新的上皮和上皮性肿瘤标记物。我们应用针对石蜡切片的抗ＤＰＩＩ单抗和抗细胞角蛋白（ＣＫ）单抗对２ｌ７例肿瘤作了免疫组织化学ＡＢＣ法染色的研究，结果：在１６３例上皮性肿瘤和双向分化的肿瘤中... 详细信息

桥粒斑蛋白ＩＩ（ＤＰＩＩ）是一种新的上皮和上皮性肿瘤标记物。我们应用针对石蜡切片的抗ＤＰＩＩ单抗和抗细胞角蛋白（ＣＫ）单抗对２ｌ７例肿瘤作了免疫组织化学ＡＢＣ法染色的研究，结果：在１６３例上皮性肿瘤和双向分化的肿瘤中，１４７例表达ＤＰＩＩ，占９０．７％，９２例表达ＣＫ，占５６．４％。ＣＫ阳性染色全部位于细胞浆内，ＤＰＩＩ阳性染色则同时分布在细胞交界面上和细胞浆中。其他５４例不含桥粒的肿瘤均无ＤＰＩＩ和ＣＫ表达。结果表明，ＤＰＩＩ单抗是有用的含桥粒肿瘤的免疫组化探针。因ＤＰＩＩ不存在于一切含桥粒肿瘤，故在鉴别上皮性肿瘤时，ＤＰＩＩ单抗尚需与其他上皮标记物的抗体合并使用。

关键词：肿瘤诊断免疫组织化学桥粒斑蛋白单克隆抗体

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桥粒斑蛋白研究进展

西南国防医药 1993年第4期3卷 243-245页

作者：杨举伦罗学林杨光华成都军区昆明总医院 650032 华西医大

桥粒是上皮细胞的重要超微结构特征。它所含的蛋白成份十分复杂。八十年代以来,国外在该领域的研究非常活跃。其中研究最深入的是桥粒斑蛋白(desmoplakin,简 DP)Ⅰ和Ⅱ。本文就 DPⅠ和 DPⅡ的研究进展综述如下。一、DPⅠ和 DPⅡ的生化特... 详细信息

桥粒是上皮细胞的重要超微结构特征。它所含的蛋白成份十分复杂。八十年代以来,国外在该领域的研究非常活跃。其中研究最深入的是桥粒斑蛋白(desmoplakin,简 DP)Ⅰ和Ⅱ。本文就 DPⅠ和 DPⅡ的研究进展综述如下。一、DPⅠ和 DPⅡ的生化特性 DPⅠ和 DPⅡ是桥粒的主要蛋白,分子量分别为250kd 和215kd,定位在桥粒斑(desmosnal plaque)。其等电点均为 pH6.

关键词：桥粒斑蛋白等电点八十年代角蛋白 plaque 桥粒蛋白中间丝交叉抗原性卵巢颗粒细胞瘤母细胞瘤

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桥粒斑蛋白研究进展

国外医学（临床生物化学与检验学分册） 1993年第5期14卷 222-225页

作者：杨举伦罗学林杨光华孙芝琳成都军区昆明总医院华西医科大学

桥粒斑蛋白(DP)Ⅰ和Ⅱ是桥粒的主要蛋白质,也是上皮性肿瘤优秀的标记物。可利用其抗体进行肿瘤分类,研究细胞的分化程度。本文对国外近年来在DPⅠ和DPⅡ方面的研究进展,包括DP 的提取、DP 的生化特性、DP 在桥粒形成中的作用及抗DP 抗... 详细信息

桥粒斑蛋白(DP)Ⅰ和Ⅱ是桥粒的主要蛋白质,也是上皮性肿瘤优秀的标记物。可利用其抗体进行肿瘤分类,研究细胞的分化程度。本文对国外近年来在DPⅠ和DPⅡ方面的研究进展,包括DP 的提取、DP 的生化特性、DP 在桥粒形成中的作用及抗DP 抗体在肿瘤诊断中的应用,作了较系统的综述。

关键词：桥粒斑蛋白超微结构肿瘤分类

酶联免疫吸附测定法检测肽特异性人抗桥粒斑蛋白自身抗体

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世界核心医学期刊文摘（皮肤病学分册） 2005年第11期1卷 38-39页

作者： Hinterhuber G. Binder M. Marquardt Y. 刘艳 Division of General Dermatology Department of Dermatology University of Vienna School of Medicine Whringer Gürtel 18-20 A-1090 Vienna Austria

Background: Autoantibodies directed against desmoplakin (Dp) I and II have recently been characterized in a subset of patients with severe erythema multiforme (EM), a recurrent inflammatory skin disease with a broad spectrum of clinical manifestations. These autoantibodies recognize a peptide epitope localized within the extreme end of the carboxy terminal domain of Dp responsible for the assembly of keratin filaments to the desmosomal plaque. Using dot blot analysis with overlapping synthetic peptides, the binding epitope YSYSYS has been identified. Objectives: To establish an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of peptide-specific anti-Dp autoantibodies in sera of patients with EM. Methods: A synthetic peptide containing the respective amino acid sequence was used as matrix for ELISA plates. Serum samples from patients with known EM and peptide-specific anti-Dp autoantibodies verified by immunoblotting, immunoprecipitation and epitope mapping were used. Results: Establishing an index value of 42.0,25 of 25 serum samples from five patients with peptide-specific anti-Dp autoantibodies were positive in the ELISA. From control sera, none of 31 bullous disease sera and only one (1.2%) of 83 normal human sera were positive. Conclusions: These data show that the ELISA presented in this study represents a sensitive and highly specific tool for the detection of peptide-specific anti-Dp autoantibodies in patients with EM.

关键词：自身抗体特异性桥粒斑蛋白免疫印迹法对照血清角蛋白丝炎症性皮肤病多形性红斑血浆样品合成肽

致心律失常性右心室心肌病患者桥粒斑蛋白基因突变和单核苷酸多态性检测

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中华心律失常学杂志 2013年第5期17卷 356-360页

作者：王薇周秀娟杨兵陈红武顾凯李丹丹宋华连居维竹郦明芳张凤祥陈明龙曹克将南京医科大学第一附属医院心脏科 210029

目的调查致心律失常性右心室心肌病（ARVC）患者桥粒斑蛋白（DSP）基因突变和单核苷酸多态性（SNPs）发生率.方法对初步诊断为ARVC的50例患者采用2010年新诊断标准予以重新评估.应用聚合酶链式反应（PCR）扩增DSP基因全部外显子片段... 详细信息

目的调查致心律失常性右心室心肌病（ARVC）患者桥粒斑蛋白（DSP）基因突变和单核苷酸多态性（SNPs）发生率.方法对初步诊断为ARVC的50例患者采用2010年新诊断标准予以重新评估.应用聚合酶链式反应（PCR）扩增DSP基因全部外显子片段并测序,病例组测序结果与198例正常对照组进行比对分析.结果 37例符合ARVC确诊病例,9例为临界诊断病例,另有4例为疑似诊断病例.确诊病例中有5例（14％）携带5种DSP基因突变,既往均未见报道,包括4种错义突变和1种无义突变,临界诊断与疑似诊断病例均未检出DSP基因突变.同时检出4个非同义SNPs位点,其等位基因频率在对照组和病例组间差异无统计学意义.结论本组ARVC患者DSP基因突变检出率为14％,且均为新发现突变.DSP基因外显子区域的4个SNPs位点可能与ARVC的发病无相关性.

关键词：致心律失常性右心室心肌病基因突变桥粒斑蛋白单核苷酸多态性

结蛋白相关心肌病转基因小鼠桥粒相关蛋白表达和分布的变化(英文)

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中国临床康复 2003年第15期7卷 2152-2154,F003页

作者：黄为马文珠汪学军南京医科大学第二附属医院心脏科江苏省南京市210011 南京医科大学第一附属医院心脏科江苏省南京市210029 美国南达卡他州大学心血管研究所

目的通过观察结蛋白相关心肌病(desmin-relatedcardiomyopa-thy,DRC)转基因小鼠桥粒相关蛋白表达和分布的变化,以探讨其发病机制。方法应用Western印迹和免疫标记共聚焦显微镜观察桥粒斑蛋白(desmoplakin,DP)和plakoglobin(PG)在1个月... 详细信息

目的通过观察结蛋白相关心肌病(desmin-relatedcardiomyopa-thy,DRC)转基因小鼠桥粒相关蛋白表达和分布的变化,以探讨其发病机制。方法应用Western印迹和免疫标记共聚焦显微镜观察桥粒斑蛋白(desmoplakin,DP)和plakoglobin(PG)在1个月小鼠心室肌组织中的表达和分布。结果突变型结蛋白转基因小鼠(D7-des)较野生型结蛋白转基因小鼠(WT-des)和非转基因小鼠(NTG)DP总蛋白和细胞骨架蛋白部分(TIF)明显升高,免疫标记心肌组织DP分布在细胞的两端、侧面和胞质,且密度显著增加,而WT-des与NTG比较无明显变化;3组动物之间,PG没有变化;免疫标记显示D7-des结蛋白排列紊乱,失去正常的结构。结论该研究首次发现突变结蛋白破坏了结蛋白和桥粒结构的完整性,影响了心肌细胞机械耦联,可能与DRC舒缩功能异常和心力衰竭的发生有关。

关键词：结蛋白心肌病转基因小鼠桥粒斑蛋白发病机制