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小鼠桑椹胚OPS管内解冻和直接移植

中国农业大学学报 2006年第6期11卷 23-26页

作者：刘满清杨其恩索伦刘霖牛晔朱士恩中国农业大学动物科学技术学院北京100094

本实验对昆明白系小鼠的桑椹胚实施OPS法玻璃化冷冻，研究不同管内解冻程序对胚胎体内外发育的影响，旨在为小家畜胚胎冷冻、解冻和移植提供技术参数。采用OPS冷冻两步法（10％（体积分数）EG＋10％（体积分数）DM9：）溶液中平衡30S，... 详细信息

本实验对昆明白系小鼠的桑椹胚实施OPS法玻璃化冷冻，研究不同管内解冻程序对胚胎体内外发育的影响，旨在为小家畜胚胎冷冻、解冻和移植提供技术参数。采用OPS冷冻两步法（10％（体积分数）EG＋10％（体积分数）DM9：）溶液中平衡30S，移入EDFS30平衡25s）保存小鼠桑椹胚。一步法解冻是将OPS直接插到盛有0．5mol／L蔗糖的离心管中分别平衡1、2、3、4、5和6min，解冻后经体外培养结果丧明，平衡2-4min组耍胚发育率（93．58％～97．2296）与对照组（100％）无显著差异（P〉0.05）；实施两步法解冻时将OPS先后插入0．5和0．25mol／L蔗糖中，体外培养结果显示，先后平衡3和2min组囊胚发育率（100％）最佳，同对照组无显著差异（P〉0．05）。将以上方法管内解冻最佳组的胚胎用OPS管作移植导管，直接移植到受体子宫角中，其船娠产仔率（38．57％）和管外解冻组（42．8696）及新鲜对照组（51．19％）均无显著性差异（P〉0．05）。证明OPS玻璃化冷冻的小鼠桑椹胚可以进行管内解冻和直接移植，为小家畜胚胎移植提供了模型。

关键词：玻璃化冷冻管内解冻昆明白小鼠桑椹胚 OPS(open pulled straws) 直接移植

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小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨

中国畜牧杂志 1997年第3期33卷 14-17页

作者：朱士恩张忠诚李玉欣曾申明中国农业大学动物科技学院

本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．... 详细信息

本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．２５ｍｌ塑料细管中１分钟平衡后直接投入液氮中冷冻，解冻后获得的发育率最高（９４％）。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为５６％（９／１６）及４２％（４９／１１６）。与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）

关键词：小鼠桑椹胚玻璃化冷冻移植乙二醇

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不同冷冻和解冻方法对小鼠桑椹胚发育的影响

中国畜牧杂志 2006年第1期42卷 5-7页

作者：杨中强朱士恩周光斌侯云鹏闫长亮中国农业大学动物科技学院动物胚胎生物技术实验室北京100094

本试验以2种程序化冷冻液和2种玻璃化冷冻液对昆明白系小鼠的桑椹胚进行细管法冷冻保存,比较程序化冷冻-管外解冻和玻璃化冷冻-管内解冻对胚胎体内、外发育的影响。胚胎体外培养结果表明:玻璃化冷冻组及程序化冷冻组胚胎发育率(95.3%￣9... 详细信息

本试验以2种程序化冷冻液和2种玻璃化冷冻液对昆明白系小鼠的桑椹胚进行细管法冷冻保存,比较程序化冷冻-管外解冻和玻璃化冷冻-管内解冻对胚胎体内、外发育的影响。胚胎体外培养结果表明:玻璃化冷冻组及程序化冷冻组胚胎发育率(95.3%￣95.8%,98.9%)无显著(P>0.05)差异。将程序化冷冻、EFS30玻璃化冷冻以及新鲜的胚胎各168枚移植给假孕受体鼠,妊娠受体产活仔率各组间相比(50.8%,58.3%,54.9%)无显著性(P>0.05)差异。结果证明,玻璃化冷冻保存的胚胎管内解冻效果好,为生产中家畜的胚胎移植提供了理论和技术参考。

关键词：畜牧学程序化玻璃化管内解冻桑椹胚小鼠

超低温冷冻对小鼠桑椹胚多能性因子Oct-4表达的影响

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中国畜牧杂志 2013年第9期49卷 19-22页

作者：周光斌郭将曾艳程柯仁傅祥伟朱士恩四川农业大学动物科技学院动物遗传育种研究所四川成都611130 中国农业大学动物科技学院北京100193

本实验旨在探讨昆明白小鼠桑椹胚超低温冷冻后Oct-4表达的变化与胚胎发育潜力的关系。胚胎采用OPS法冷冻,即胚胎于10%EG+10%DMSO溶液中预处理30 s,然后再移入玻璃化溶液(EDFS30)中处理25 s,以OPS为承载器投入液氮中。毒性组胚胎未投入液... 详细信息

本实验旨在探讨昆明白小鼠桑椹胚超低温冷冻后Oct-4表达的变化与胚胎发育潜力的关系。胚胎采用OPS法冷冻,即胚胎于10%EG+10%DMSO溶液中预处理30 s,然后再移入玻璃化溶液(EDFS30)中处理25 s,以OPS为承载器投入液氮中。毒性组胚胎未投入液氮,其他过程与冷冻组相同,新鲜胚胎为对照组。胚胎解冻后,检测Oct-4 mRNA与蛋白的表达,通过观察其形态正常率、囊胚发育率和囊胚细胞数来综合判断其体外发育能力。结果表明:冷冻组和毒性组较桑椹胚中Oct-4 mRNA的表达量对照组相比显著降低(P桑椹胚处理后的形态正常率以及桑椹胚培养48 h后的囊胚发育率(96.67%～100%)和囊胚细胞数(89.67～92.33)3组间无显著差异。结果显示,玻璃化冷冻保存小鼠桑椹胚后多能性基因Oct-4 mRNA表达的变化并未影响其体外发育潜力。

关键词： Oct-4 超低温冷冻桑椹胚昆明白小鼠

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机械分割的小鼠桑椹胚和囊胚的发育能力

东北农学院学报 1992年第3期23卷 293-299页

作者：王周吉 Alan Trounson 东北农学院哈尔滨150030 澳大利亚莫那什大学

利用机械方法二等份分割小鼠的桑椹胚、早期囊胚和晚期囊胚,并在体外培养分割的半胚到晚期囊胚。将这些囊胚移植到假孕受体鼠子宫内以评价他们附植后发育的能力。在体外培养中发现,囊胚期分割的胚胎比桑椹胚期分割的胚胎有较高的成活率... 详细信息

利用机械方法二等份分割小鼠的桑椹胚、早期囊胚和晚期囊胚,并在体外培养分割的半胚到晚期囊胚。将这些囊胚移植到假孕受体鼠子宫内以评价他们附植后发育的能力。在体外培养中发现,囊胚期分割的胚胎比桑椹胚期分割的胚胎有较高的成活率。通过附植前胚胎细胞数量分析得知,囊胚期半胚的细胞数量大约是对照组的一半,但内细胞团细胞与整个胚胎细胞的数量比不变。虽然从半胚发育到囊胚期的胚胎附植率仅略低于对照组,但半胚形成胎儿的能力却显著低于全胚。组织学分析表明,附植后的这种低成活率现象是由于缺乏卵柱发育造成的,而此卵柱则与半胚中的内细胞团的细胞数量减少有关。移植到第3天假孕受体鼠中的半胚,附植后的发育情况明显地比移植到第4天受体中的好。

关键词：小鼠桑椹胚囊胚机械分割发育

生物频谱对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育影响的研究

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农业生物技术学报 1998年第3期6卷 45-50页

作者：朱士恩王海彦曾申明张忠诚李玉欣陈锟周林北京周林频谱总公司中国农业大学动物科技学院

研究了生物频谱辐射对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育的影响，并采用荧光染色法对经生物频谱辐射前后的胚胎进行囊胚细胞计数，以评估生物频谱对冷冻损伤的恢复程度。结果表明：在ＥＦＳ４０玻璃化溶液中处理１ｍｉｎ一步法冷冻保存... 详细信息

研究了生物频谱辐射对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育的影响，并采用荧光染色法对经生物频谱辐射前后的胚胎进行囊胚细胞计数，以评估生物频谱对冷冻损伤的恢复程度。结果表明：在ＥＦＳ４０玻璃化溶液中处理１ｍｉｎ一步法冷冻保存的胚胎，解冻后经生物频谱辐射，其发育率由对照组的５４％提高到９８％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。冷冻胚胎辐射后移植于同期化处理的受体子宫中，妊娠率和产仔率与对照组相比差异均不显著（４０％∶５６％；５０％∶４２％）（Ｐ＞０．０５）。将新鲜胚、经辐射的新鲜胚、冷冻胚、冷冻后经生物频谱照射共四组胚胎，用Ｈ３３３４２染色，证实冷冻后胚胎的囊胚细胞数与对照组（新鲜胚）相比显著减少（２４±３．４∶５２±５．４）（Ｐ＜０．０１）。解冻后的胚胎经生物频谱辐射后，其囊胚细胞数显著高于不加辐射组（３５±５．６：２４±３．４）（Ｐ＜０．０１）。另外，新鲜胚胎用生物频谱辐射后，其囊胚细胞数（４９±３．１）与对照组相比无显著差异（Ｐ＞０．０５）。

关键词：生物频谱玻璃化冷冻小鼠桑椹胚囊胚细胞数

SPF动物的舍内微生物气溶胶检测及其桑椹胚冷冻保存的研究

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SPF动物的舍内微生物气溶胶检测及其桑椹胚冷冻保存的研究

作者：柴世庆山东农业大学

学位级别：硕士

SPF动物的发展和应用作为生命科学、生物医药等发展的基础和重要支撑条件,是衡量一个国家和地区在该领域科研水平高低的重要标志之一。在生命科学领域内许多科研项目的确立,成果水平的高低,取决于SPF动物的质量。为了保证实验动物生产... 详细信息

SPF动物的发展和应用作为生命科学、生物医药等发展的基础和重要支撑条件,是衡量一个国家和地区在该领域科研水平高低的重要标志之一。在生命科学领域内许多科研项目的确立,成果水平的高低,取决于SPF动物的质量。为了保证实验动物生产的质量和提高实验动物的级别,本文研究了在动态环境下SPF动物房的微生物气溶胶的变化和微生物组成,以及SPF桑椹胚的冷冻复苏。本实验分为四个部分:1 SPF动物舍内微生物气溶胶的动态监控本实验通过检测SPF动物舍内微生物气溶胶粒子浓度的动态变化,探讨建立SPF动物舍内动态标准的可行性。分别检测不同动物舍内0.3μm和0.5μm微生物气溶胶粒子在一周和一天中变化。在一周的监测中,粒子浓度变化比较有规律性。不同畜舍间0.3μm粒子浓度差异显著(P<0.05),其中兔舍与小鼠舍差异极显著(P<0.01);0.5μm粒子浓度除了兔舍与大鼠舍差异不显著外,不同畜舍间的差异极显著。一天中大鼠和兔舍内两种粒子的浓度变化不同,鼠舍内粒子浓度有一个峰值,兔舍内有两个峰值,这是因为这两种动物的饲养方式不同。粒子浓度变化与饲养人员的活动密切相关。SPF动物舍内微生物气溶胶粒子浓度变化具有规律性,一天中粒子浓度控制在十万级,建立相应的动态标准是可行的。2 SPF动物舍内微生物气溶胶与其它环境因素之间的关系为了更好的控制SPF动物的生产环境,对动物舍内氨气浓度、粒子浓度、及温湿度之间的关系进行了检测和分析。使用各种监测仪器,在C57小鼠繁殖房间内选择上午跟下午两个时间段,监测动物舍内的温度、湿度、氨气浓度和微生物气溶胶粒子浓度的变化,并对监测的结果进行统计分析。SPF动物舍内的温度和氨气浓度显著相关,湿度、粒子浓度与氨气浓度相关性不大;SPF动物舍内动态下各项参数标准的制定具有可行性。3 SPF动物舍内微生物气溶胶的检测为了解动态情况下SPF兔饲养房间的微生物气溶胶的情况,对其中的微生物气溶胶的落下菌数量及浮游菌种类进行了检测和分析。采用血琼脂平板对落下菌和浮游菌采样。对落下菌进行计数,分离纯化,并进行比较。

关键词： SPF动物微生物气溶胶 PCR 16SrRNA序列检测冷冻复苏桑椹胚

双重套式PCR对小鼠桑椹胚OPS法冷冻后性别鉴定

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双重套式PCR对小鼠桑椹胚OPS法冷冻后性别鉴定

作者：赵学明中国农业大学

学位级别：硕士

本实验通过对“双重套式PCR对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试”及“OPS法冷冻胚胎双重套式PCR性别鉴定”的研究,进一步完善了哺乳动物胚胎性别鉴定技术体系,尤其是冷冻胚胎的性别鉴定技术。为哺乳动物胚胎、尤其是冷冻胚胎的性别鉴定... 详细信息

本实验通过对“双重套式PCR对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试”及“OPS法冷冻胚胎双重套式PCR性别鉴定”的研究,进一步完善了哺乳动物胚胎性别鉴定技术体系,尤其是冷冻胚胎的性别鉴定技术。为哺乳动物胚胎、尤其是冷冻胚胎的性别鉴定在生产实践中获得更高的效率提供了有价值的实验参数。在测定双重套式PCR微量扩增体系的灵敏度实验中,从Gene Bank中检索出不同品种小鼠的SRY、ZFX基因各自共有序列片段,运用DNAMAN6.0、Primer3.0及Oligo6.0进行引物设计与分析,建立了昆明白小鼠特异的SRY/ZFX双重套式PCR性别鉴定体系并进行优化。以桑椹胚卵裂球为模板通过扩增来测定双重套式PCR扩增体系的灵敏度,按卵裂球数量的不同分为5组,对应的卵裂球个数分别为1、2、3、4、5个及以上。根据有效扩增结果得出双重套式PCR的灵敏度.结果表明:第1组(卵裂球个数为1),有效检出率为85%(34/40),污染率为7.5%(3/40),漏检率为7.5%(3/40)。随着卵裂球个数的增多,有效检出率逐渐升高,而污染率和漏检率则呈逐渐下降趋势。第2组,有效检出率达到91.7%(33/36),污染率为2.8%(1/36),漏检率为5.6%(2/36)。第5组(卵裂球个数达到5个及以上),有效检出率达到100%,漏检率为0。对于第2、3、4、5组而言,有效检出率及漏检率各组间并无显著性差异(p>0.05);而第一组与其它各组间,有效检出率及漏检率存在显著差异(p胚胎双重套式PCR性别鉴定实验中,利用上述扩增体系对小鼠OPS法冷冻桑椹胚及新鲜桑椹胚进行性别鉴定。其中胚胎取样采用徒手取样法;OPS冷冻采用二步法(胚胎在10%E+10%D平衡液中预处理30s后,移入玻璃化溶液(EDFS30)中,平衡25s吸入OPS,直接投进液氮);解冻采用一步法(将OPS直接浸入37℃ 0.5mol/L蔗糖中,胚胎吹出后于新鲜蔗糖滴中,平衡5min,再将胚胎移入mCZB,置于37℃、5%CO、100%湿度培养箱中培养)。其中,共鉴定冷冻胚胎324枚,移植301枚胚胎于22只受体,其中11只妊娠,4只产仔,共产后代28只,都与鉴定性别一致;共鉴定新鲜胚胎256枚,移植232枚胚胎于16只受体,7只妊娠,3只产仔,共产后代21只,与性别鉴定结果相吻合。

关键词：双重套式PCR 胚胎性别鉴定小鼠桑椹胚 OPS冷冻

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两种玻璃化液冻存小鼠桑椹胚的研究

生殖与避孕 2005年第8期25卷 456-459,473页

作者：郑伏甫陈在贤戴宇平邓春华郑克立胡凯中山大学附属第一医院广州510080 重庆医科大学附属第一医院重庆410016

目的:研究EDS-40和EFS-40两种玻璃化溶液对小鼠桑椹胚冻存的影响。方法:随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,先对两种玻璃化溶液EDS-40(40%乙二醇+18%葡聚糖+0.5mol蔗糖)和EFS-40(40%乙二醇+18%聚蔗糖+0.5mol蔗糖)行毒性测试:再在20℃±5℃室温... 详细信息

目的:研究EDS-40和EFS-40两种玻璃化溶液对小鼠桑椹胚冻存的影响。方法:随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,先对两种玻璃化溶液EDS-40(40%乙二醇+18%葡聚糖+0.5mol蔗糖)和EFS-40(40%乙二醇+18%聚蔗糖+0.5mol蔗糖)行毒性测试:再在20℃±5℃室温下,将小鼠桑椹胚分别加入到两种玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,冻存2-3个月。各组均在25℃的水浴中复温,胚胎用解冻液(S-PBS)和培养液反复洗涤后移入含Ham'sF12培养液培养48h,观察胚胎形态及发育。部分胚胎体外培养12-14h后行胚胎移植,观察妊娠及产仔情况。结果:两种玻璃化溶液的毒性有显著性差异,EDS-40较EFS-40毒性低(X2=6.415,P0.05)。胚胎优良率(X2=7.51,P0.05)及产仔率(X2=0.245,P>0.05)无显著性差异。结论:EDS-40较EFS-40玻璃化溶液毒性低,冻存胚胎效果更好。

关键词：玻璃化技术胚胎冻存桑椹胚