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基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术分析桂枝甘草汤的化学成分及入血成分

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中华中医药学刊 2024年

作者：尹然于新颖魏姗姗石崇臻赵爽王雪孙媛方韩飞辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室辽宁中医药大学药学院沈阳药科大学药学院

目的采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q-ExactiveOrbitrapMS）方法分析鉴定桂枝甘草汤的化学成分及大鼠口服后的入血成分。方法采用XSelectHSST3色谱柱（2.1mm×150mm，2.5μm），乙腈-1%醋酸水溶液为流动... 详细信息

目的采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q-ExactiveOrbitrapMS）方法分析鉴定桂枝甘草汤的化学成分及大鼠口服后的入血成分。方法采用XSelectHSST3色谱柱（2.1mm×150mm，2.5μm），乙腈-1%醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.3mL/min，柱温35℃，正、负离子模式下检测。根据化合物保留时间、精确分子质量、碎片离子、裂解规律并与对照品比对，分析桂枝甘草汤的化学成分；通过对比空白血浆、含药血浆和桂枝甘草汤样品的色谱及质谱信息，分析入血成分。结果在桂枝甘草汤中共鉴定了68个化学成分，包含30个黄酮类、16个三萜类、8个有机酸类、5个醛类、3个香豆素类及6个其他类成分。大鼠口服桂枝甘草汤后，在大鼠血浆中共鉴定出45个吸收入血的原型成分。结论建立的UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS方法可对桂枝甘草汤的整体化学成分及其在大鼠体内入血成分进行快速表征，为桂枝甘草汤进一步的药效物质基础与质量控制研究提供依据。

关键词：桂枝甘草汤 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS 化学成分入血成分鉴定

桂枝甘草汤通过多靶点、多通路治疗心力衰竭:基于网络药理学方法

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南方医科大学学报 2023年第5期43卷 772-782页

作者：赵宇曦赵旭朱清楠朱炳睿张震彬陈静大连医科大学第二临床学院辽宁大连116044 大连医科大学中西医结合研究院(学院) 辽宁大连116044

目的基于网络药理学方法预测桂枝甘草汤治疗心力衰竭潜在作用靶点与通路。方法通过TCMSP数据库、TCMID数据库、TCM@Taiwan数据库获得桂枝甘草汤化学成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测药物潜在靶点信息,通过用DisGeNET数据库、dr... 详细信息

目的基于网络药理学方法预测桂枝甘草汤治疗心力衰竭潜在作用靶点与通路。方法通过TCMSP数据库、TCMID数据库、TCM@Taiwan数据库获得桂枝甘草汤化学成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测药物潜在靶点信息,通过用DisGeNET数据库、drugbank数据库、TTD数据库获得心力衰竭靶点,采用Venny2.1.0对药物与疾病的靶点进行交集选取,采用Uniprot数据库转换信息,采用Cytoscape构建“有效成分-靶点-疾病”网络,进行蛋白-蛋白相互作用网络(PPI),并通过网络拓扑分析得到桂枝甘草汤治疗心力衰竭的核心靶点,并将核心靶点通过Metascape数据库进行GO分析及KEGG分析。通过Western blot验证网络药理学的预测结果,根据网络药理学结果中degree值及与心力衰竭过程相关程度筛选出3个因子(PKCα、ERK1/2和BCL2),在戊巴比妥钠溶于无血清高糖培养基处理的H9C2细胞中模拟心衰缺血缺氧环境,提取心肌细胞总蛋白,测定PKCα、ERK1/2和BCL2的蛋白含量。结果通过网络药理学的方法,得到桂枝甘草汤治疗心力衰竭的潜在靶点有190个,它们主要参与循环系统过程、氮化合物的细胞反应、阳离子稳态、MAPK级联的调节等生物过程;参与调控癌症相关通路,钙信号通路、cGMP-PKG信号通路、cAMP信号通路等38条通路。体外细胞模型的Western blot验证实验结果显示,心力衰竭组PKCα和ERK1/2蛋白相对表达量均高于正常组(P桂枝甘草汤组其相对含量降低(P桂枝甘草汤组其相对含量与心力衰竭组相比明显升高(P桂枝甘草汤可能通过作用于PRKCA、PRKCB、MAPK1、MAPK3、MAPK8等多个靶点,下调PKCα和ERK1/2因子的蛋白表达,上调BCL2因子的蛋白表达,调控癌症相关通路、钙信号通路等多个信号通路来治疗心力衰竭。

关键词：网络药理学桂枝甘草汤心力衰竭分子机制

桂枝甘草汤对豚鼠心室肌细胞IKs及HEK293细胞IKr的影响

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中医杂志 2023年第7期64卷 729-735页

作者：邢作英王永霞朱明军胡宇才陈召起高原宋欢欢邱伯雍河南中医药大学河南省郑州市450000 河南中医药大学第一附属医院河南省人民医院/郑州大学人民医院

目的探讨桂枝甘草汤治疗心律失常的可能作用机制及配伍意义。方法30只SD大鼠随机分为桂枝组(桂枝单煎液120 mg/ml)、甘草组(甘草单煎液60 mg/ml)、桂枝甘草单煎液混合组(桂枝单煎液+甘草单煎液混合180 mg/ml)、桂枝甘草汤同煎液组(桂枝... 详细信息

目的探讨桂枝甘草汤治疗心律失常的可能作用机制及配伍意义。方法30只SD大鼠随机分为桂枝组(桂枝单煎液120 mg/ml)、甘草组(甘草单煎液60 mg/ml)、桂枝甘草单煎液混合组(桂枝单煎液+甘草单煎液混合180 mg/ml)、桂枝甘草汤同煎液组(桂枝和甘草同煎液180 mg/ml)、对照组(生理盐水),每组6只。各组每天灌胃相应药物1 ml/100 g,3天后腔静脉取血制备含药血清。分离豚鼠心室肌细胞,设桂枝血清组、甘草血清组、桂枝甘草单煎液混合血清组、桂枝甘草汤同煎液血清组、对照血清组,每组5个复孔;各组以体积比分别加入10%和15%浓度含药血清,培养24 h后分别检测各组在0、20、30、40、50 mV条件下慢激活延迟整流钾电流(IKs)电流密度。HEK293细胞分组及干预方法同心室肌细胞,培养24 h后分别检测各组在0、20、30、40、50 mV条件下快激活延迟整流钾电流(IKr)尾电流密度及IKr尾电流动力学参数(包括激活半电压、斜率因子)。结果在10%浓度药物干预下,0、20、30、40、50 mV时各组IKs电流密度比较差异均无统计学意义(P>0.05),20、30、40、50 mV时各组IKr尾电流密度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在15%浓度药物干预下,与对照血清组比较,甘草血清组和桂枝甘草单煎液混合血清组各电压IKs电流密度均降低,桂枝血清组30、40、50 mV时IKs电流密度降低,桂枝甘草汤同煎液血清组50 mV时IKs电流密度降低(P桂枝甘草汤同煎液血清组各电压IKr尾电流密度均降低,桂枝甘草单煎液混合血清组50 mV时IKr尾电流密度降低,甘草血清组0 mV时IKr尾电流密度升高(P甘草血清组比较,桂枝甘草汤同煎液血清组30 mV时IKs电流密度升高,各电压IKr尾电流密度均降低(P桂枝血清组比较,桂枝甘草汤同煎液血清组30、40、50 mV时IKr尾电流密度降低(P甘草血清组、桂枝血清组斜率因子减小(P桂枝甘草汤可在一定程度上抑制心室肌细胞IKs及HEK293细胞IKr,这可能是其治疗心律失常的作用机制之一,且方中桂枝和甘草配伍具有协同增效的作用。

关键词：心律失常桂枝甘草汤心室肌细胞 HEK293细胞慢激活延迟整流钾电流快激活延迟整流钾电流

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桂枝甘草汤传统汤剂与配方颗粒成分比较

医药导报 2023年第7期42卷 1026-1033页

作者：施钧瀚姚静王艳丽张耀曹英杰桂新景王青晓岳佑凇路露张璐李学林刘瑞新河南中医药大学第一附属医院药学部郑州450000 河南中医药大学药学院制剂教研室郑州450008 河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心郑州450046 河南省中药临床药学中医药重点实验室郑州450000 河南省中药临床应用、评价与转化工程研究中心河南省中药安全评价与风险防控工程研究中心郑州450000 河南省药品医疗器械检验院郑州450000

目的比较桂枝甘草汤中药传统汤剂与配方颗粒化学成分的差异。方法分别在真实世界条件下,采集、制备上述两类汤剂,采用高效液相色谱(HPLC)法建立桂枝甘草汤特征图谱,以化学成分种类、指标性成分(甘草苷、甘草酸铵、肉桂酸、桂皮醛)含量... 详细信息

目的比较桂枝甘草汤中药传统汤剂与配方颗粒化学成分的差异。方法分别在真实世界条件下,采集、制备上述两类汤剂,采用高效液相色谱(HPLC)法建立桂枝甘草汤特征图谱,以化学成分种类、指标性成分(甘草苷、甘草酸铵、肉桂酸、桂皮醛)含量、共有峰峰面积、特征图谱相似度为评价指标进行评价。结果传统汤剂存在共有色谱峰25个,配方颗粒分别为23个(A厂)、22个(B厂)、20个(C厂)。指标成分含量比较,各厂家配方颗粒均不一样(P甘草苷含量:A厂配方颗粒>B厂配方颗粒(P汤剂(P>0.05)>C厂配方颗粒(P传统汤剂(P0.05)>C厂配方颗粒(P甘草酸铵含量:A厂配方颗粒>B厂配方颗粒(P汤剂(P>0.05)>C厂配方颗粒(P汤剂,以传统汤剂共有峰峰面积总和为1进行归一化,其他(A、B、C厂家)分别相当于0.64,0.47,0.14;配方颗粒之间相似度高(>0.8),与传统汤剂相比相似度较低(均汤剂和配方颗粒化学成分存在差异,尤其挥发性成分差异较大。不同厂家配方颗粒质量也存在差异,说明有必要制定统一的配方颗粒质量标准并坚定实施和监督落实。

关键词：桂枝甘草汤传统汤剂配方颗粒成分对比

桂枝甘草汤合真武汤加减治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床疗效观察

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桂枝甘草汤合真武汤加减治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床疗效观察

作者：杨朝宝长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过进行桂枝甘草汤合真武汤加减方治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床观察研究,发现桂枝甘草汤合真武汤加减方治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床作用,更进一步确定其治疗心肾阳虚型慢性心衰的意义,做出疗效评价,可以为中医治疗心肾阳虚型... 详细信息

目的:通过进行桂枝甘草汤合真武汤加减方治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床观察研究,发现桂枝甘草汤合真武汤加减方治疗心肾阳虚型慢性心衰的临床作用,更进一步确定其治疗心肾阳虚型慢性心衰的意义,做出疗效评价,可以为中医治疗心肾阳虚型慢型心衰提供思路和启发。方法:选取2021年1月～10月在长春市中医院心病门诊诊断为心肾阳虚型慢性心力衰竭的患者72例作为研究对象,运用随机化分组将其分为试验组(36例)和对照组(36例),对全部的患者都应用西医规范治疗。对照组应用西医规范治疗,试验组除提供西医规范化治疗外,还给予桂枝甘草汤合真武汤加减治疗,同时根据合并症给予相应的药物治疗。西医规范治疗包括利尿药、ACEI或ARB、β受体阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂,有需要时加用强心药物治疗,疗程为4周。4周以后对两组患者的NYHA、心功能分级积分、Lee氏心衰积分、LVEF、BNP、6MWD、中医证候积分及安全性指标进行比较,用统计学软件SPSS20.0做出统计分析,最终得出结论。结果:本课题所研究的两组患者治疗之前的生命体征、年龄、性别、BNP、LVEF、NYHA心功能分级积分、6MWD、中医证候积分、单项症状积分和冠心病、高心病、扩心病患者数量及安全性指标均无差异(P>0.05),具有可比性。1、BNP比较:试验组和对照组治疗后都可以降低BNP的数值,试验组相较于对照组疗效更佳,并具有明显差异(P0.05)。结论:桂枝甘草汤合真武汤加减方能改善心肾阳虚型慢性心衰患者的症状,提高心功能及运动耐量,且能提高射血分数,降低BNP,且安全可靠,无毒副作用,依从性较好,是治疗心肾阳虚型慢性心衰的理想方剂。

关键词：桂枝甘草汤临床观察慢性心衰心肾阳虚真武汤

桂枝甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤大鼠心律失常的作用机制

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中西医结合心脑血管病杂志 2023年第21期21卷 3901-3907页

作者：王艳高原朱明军唐进法李彬王贺曹英杰崔琳王小晓沈思河南中医药大学郑州450000 河南中医药大学第一附属医院郑州450000 河南省中药安全评价与风险防控工程研究中心郑州450000

目的:探讨桂枝甘草汤(GGD)干预心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠心律失常的作用机制。方法:建立心肌I/R损伤大鼠模型,随机分为对照组、I/R组、GGD低剂量组、GGD高剂量组、美托洛尔组。观察并记录心肌I/R心律失常发生率和持续时间,进行心律... 详细信息

目的:探讨桂枝甘草汤(GGD)干预心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠心律失常的作用机制。方法:建立心肌I/R损伤大鼠模型,随机分为对照组、I/R组、GGD低剂量组、GGD高剂量组、美托洛尔组。观察并记录心肌I/R心律失常发生率和持续时间,进行心律失常评分;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平,分光光度法测定Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织的病理学改变,免疫组化法检测心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化Cx43(p-Cx43)和Kir2.1蛋白表达。结果:与对照组比较,I/R组大鼠室性期前收缩(VPC)次数明显增多,室性心动过速(VT)及心室纤颤(VF)的持续时间明显延长,心律失常评分增加,CK-MB和cTnI明显增高,而Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性、p-Cx43和Kir2.1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与I/R组相比,GGD低剂量组、GGD高剂量组和美托洛尔组CK-MB和cTnI降低,Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性增高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与I/R组相比,GGD高剂量组和美托洛尔组VPC发生次数减少,VT及VF持续时间缩短,心律失常评分降低,p-Cx43和Kir2.1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:GGD可能通过改善Cx43的表达、提高Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性及上调Kir2.1蛋白表达,从而发挥改善心肌I/R损伤大鼠室性心律失常发生的作用。

关键词：心肌缺血再灌注心律失常桂枝甘草汤缝隙连接蛋白43 实验研究

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桂枝甘草汤治疗室性早搏的作用机制探讨

中医药临床杂志 2022年第1期34卷 71-76页

作者：陈志娟耿乃志黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150000 黑龙江中医药大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150000

目的:采用网络药理学方法筛选桂枝甘草汤药物的活性成分,预测其治疗室性早搏的潜在作用靶标和信号通路,进一步探究其机制如何产生。方法:通过充分利用中国中药管理系统的利用药理学信息数据库和利用药理学数据分析系统平台(tcmsp)软件... 详细信息

目的:采用网络药理学方法筛选桂枝甘草汤药物的活性成分,预测其治疗室性早搏的潜在作用靶标和信号通路,进一步探究其机制如何产生。方法:通过充分利用中国中药管理系统的利用药理学信息数据库和利用药理学数据分析系统平台(tcmsp)软件进行筛选分析,得到中药桂枝和甘草中相关药物的活性化学成分以及其他相关药物靶标,并利用GeneCards数据库和OMIM数据库筛选室性期前收缩的相关靶标,获得药物治疗室性早搏的活性成分及靶标,通过使用cytoscape3.8.2软件进行药物-成分-疾病相关靶点信息的网络构造,使用STRING11.0数据库对其进行分析构建PPI靶点网络并对其靶点进行了基因功能GO富集分析和KEGG分析,筛选桂枝甘草汤治疗室性早搏的核心靶点。结果:选择OB≥30%且DL≥0.18作为条件进行筛选,获得桂枝甘草汤与室性早搏相关的活性化合物94个,相关药物靶点202个,疾病靶点3101个,交集靶点145个,关键靶点包括AKT1、IL6、MAPK3、VEGFA、CASP3等。GO功能分析结果主要与DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶II特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性等相关。富集分析发现AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路以及TNF信号通路等多个信号通路相关。结论:应用理论方法证实桂枝甘草汤中药物多成分、多靶点、多通路的特点,预测其治疗室性期前收缩的可能机制,为基础研究和临床应用提供参考和理论依据。

关键词：桂枝甘草汤室性早搏网络药理学靶点

桂枝甘草汤联合曲美他嗪对慢性心力衰竭患者的临床治疗效果

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第1期 78-80页

作者：王荣故城县医院中医科河北衡水253800

探讨桂枝甘草汤、曲美他嗪联合治疗慢性心力衰竭的疗效。方法研究对象是以电脑随机法分为A(n=30,予曲美他嗪治疗)、B(n=30,予曲美他嗪+桂枝甘草汤治疗)两组的慢性心力衰竭患者,研究起止2021年7月-2022年7月。结果 B组较A组治疗总有效率... 详细信息

探讨桂枝甘草汤、曲美他嗪联合治疗慢性心力衰竭的疗效。方法研究对象是以电脑随机法分为A(n=30,予曲美他嗪治疗)、B(n=30,予曲美他嗪+桂枝甘草汤治疗)两组的慢性心力衰竭患者,研究起止2021年7月-2022年7月。结果 B组较A组治疗总有效率高,中医症状评分低,内皮功能及心功能指标水平改善效果更佳,P0.05。结论桂枝甘草汤联合曲美他嗪治疗慢性心力衰竭的效果更为显著,亦可以积极改善患者内皮功能及提升心功能指标水平,值得被进一步推广应用。

关键词：桂枝甘草汤曲美他嗪慢性心力衰竭心功能内皮功能

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桂枝甘草汤治疗心律失常的相关探究

中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第1期 237-239页

作者：柴亚芳黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

心律失常(cardia carrhythmia)作为一种常见的心血管系统疾病,其对人类的生命安全产生严重的危害。对于心律失常的治疗,中医中药具有独特的优势。在中医方剂中,桂枝甘草汤广泛应用于心系疾病的治疗中,取得明显效果。本文通过查阅该方应... 详细信息

心律失常(cardia carrhythmia)作为一种常见的心血管系统疾病,其对人类的生命安全产生严重的危害。对于心律失常的治疗,中医中药具有独特的优势。在中医方剂中,桂枝甘草汤广泛应用于心系疾病的治疗中,取得明显效果。本文通过查阅该方应用于心律失常方向的临床和实验研究文献,分析其治疗本病的优势及应用前景。

关键词：桂枝甘草汤心律失常临床应用实验研究