检索结果-南通市图书馆

2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周

作者：黄婷婷来琳琳王轶张景海宋永波沈阳药科大学生命科学与生物制药学院

目的构建东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）抗神经兴奋肽Ⅲ（anti-neuroexcitation peptide,ANEPⅢ）植物表达载体,并转化获得根癌农杆菌工程菌。方法以植物表达载体pBin438为母核,利用分子克隆技术构建含有启动子CaMV DE35S、Ω’... 详细信息

目的构建东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）抗神经兴奋肽Ⅲ（anti-neuroexcitation peptide,ANEPⅢ）植物表达载体,并转化获得根癌农杆菌工程菌。方法以植物表达载体pBin438为母核,利用分子克隆技术构建含有启动子CaMV DE35S、Ω’翻译增强子、3’端含有内质网滞留肽SEKDEL编码区的ANEPⅢ目的基因和NOS终止子表达盒,得重组质粒pBI121-DE35S-ANEPⅢ。应用液氮冻融法、三亲杂交法、电击法转化根癌农杆菌EHA105,考察关键因素对转化效率的影响。结果成功构建ANEPⅢ植物双元表达载体pBin-ANEPⅢ和pBI121-DE35S-ANEPⅢ,并获得用于遗传转化的工程菌pBI121-DE35S-ANEPⅢ/EHA105。结论本实验在植物表达载体中加入几种调控元件,为实现提高转基因植物表达外源蛋白量增加可能性。

关键词： BmK ANEPⅢ 载体构建植物表达载体根癌农杆菌转化

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冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

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中国农学通报 2009年第10期25卷 68-71页

作者：张彬贾栋张玉萍高志强马建军山西农业大学园艺学院山西太谷030801 山西农业大学农学院山西太谷030801 平鲁职业中学山西朔州036800

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究。以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D2mg/L+肌醇100mg/L+MES400mg/L+CH100mg/L+40g/L麦芽糖+8g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组... 详细信息

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究。以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D2mg/L+肌醇100mg/L+MES400mg/L+CH100mg/L+40g/L麦芽糖+8g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT1mg/L+IAA1mg/L+MES400mg/L+CH100mg/L+麦芽糖40g/L+gelrite2.6g/L,pH5.8)上培养2～3周,然后转接到再生培养基(1/10MS+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖30g/L+gelrite2.6g/L,pH5.8)中进行再生成苗。接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株。在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性。X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达。

关键词：冬小麦幼胚再生体系根癌农杆菌转化

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大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

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深圳大学学报（理工版） 2006年第3期23卷 230-236页

作者：蔡丹郑易之兰英深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体... 详细信息

将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体的对照菌生长迟滞期约为50 h,含Em基因的重组菌生长迟滞期为32 h,表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性.在此基础上,构建了含Em基因的真核表达载体pB I-Em.再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草.PCR及RT-PCR结果显示,大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中,并能正常转录.转化率为53%.转Em基因烟草植株在含有质量分数1.5%NaC l的培养基中生长状况好于对照植株,叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片.结果表明,大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性.

关键词：大豆 LEA1基因 Em蛋白大肠杆菌根癌农杆菌转化转基因烟草盐胁迫

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红曲霉AS3.4384 Ctn合成蛋白的亚细胞定位研究

红曲霉AS3.4384 Ctn合成蛋白的亚细胞定位研究

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作者：韩尧南昌大学

学位级别：硕士

红曲霉在我国具有悠久的应用历史,河南裴李岗遗址发现距今约8000年前的红曲霉酿酒。红曲霉应用广泛,其次级代谢产物红曲红是目前世界上仅有的一种利用微生物发酵生产的天然功能性食用色素。近年来随着分子生物学的发展,研究表明红曲霉... 详细信息

红曲霉在我国具有悠久的应用历史,河南裴李岗遗址发现距今约8000年前的红曲霉酿酒。红曲霉应用广泛,其次级代谢产物红曲红是目前世界上仅有的一种利用微生物发酵生产的天然功能性食用色素。近年来随着分子生物学的发展,研究表明红曲霉产生真菌毒素桔霉素,过量摄入含有桔霉素的食品会严重损害哺乳动物的肾脏器官。正是由于桔霉素的毒害性,严重制约了红曲制品的发展。但是目前为止对于红曲霉产桔霉素的机制尚不清楚,本研究通过荧光共定位为桔霉素在红曲霉内合成、转运途径提供了一定的理论依据。为详细了解桔霉素合成蛋白在红曲霉菌丝内定位,我们选取了桔霉素合成基因簇中的ctn E、ctn H、orf1和orf5基因进行研究,成功构建了桔霉素基因与m Cherry融合表达载体,并采用根癌农杆菌介导转化的方法将桔霉素合成基因转入橙色红曲霉AS3.4384::Rab6A。通过双荧光共定位系统观察表明,在橙色红曲霉菌丝内4种桔霉素合成蛋白和Rab6A介导的转运蛋白存在同样的囊泡状结构,且共定位效果明显,推测红曲霉内桔霉素合成运输与细胞内囊泡转运系统相关。摇瓶液态发酵产桔霉素分析表明,出发菌株橙色红曲霉AS3.4384::Rab6A过表达桔霉素合成基因均导致桔霉素产量的增加。过表达ctn E菌株的桔霉素产量相较于出发菌株提高了3.2倍;过表达ctn H和orf1菌株的桔霉素产量大致提高2.4倍;过表达orf5菌株的桔霉素产量提高了1.8倍。因此过表达桔霉素合成基因对红曲霉产桔霉素均具有促进作用。大米固态发酵产红曲色素分析表明,红曲霉过表达菌株色素产量均有不程度的降低。其中AS3.4384::Rab6A::ctn E和AS3.4384::Rab6A::ctn H菌株红曲色素产量分别减少64%和71%,由此可知,过表达ctn E和ctn H基因不利于红曲色素的产生;AS3.4384::Rab6A::orf1和AS3.4384::Rab6A::orf5菌株产红曲色素虽略有降低,但是经过统计学分析,红曲色素产量未有显著性差异,因此orf1和orf5基因不影响红曲色素的产生。荧光定量PCR分析表明,红曲霉过表达桔霉素合成基因导致红曲色素相关合成基因mpp A、mpp C和mpp E随培养时间的延长表达量增加;过表达ctn E和orf5基因导致红曲霉有性繁殖相关基因表达量增加。过表达orf1基因导致红曲霉无性繁殖相关基因表达量增加。过表达ctn H基因红曲霉生长相关基因无显著变化;出发菌株和过表达菌株内桔霉素合成相关基因pks CT和ctn A均随培养时间的延长表达量降低。因此,桔霉素合成基因不仅仅参与红曲霉内桔霉素合成,对红曲霉的生长发育及其它次级代谢产物存在重要的调控作用。本试验通过对桔霉素合成基因中的ctn E、ctn H、orf1和orf5基因亚细胞定位研究,为进一步了解桔霉素在红曲霉内的合成及转运提供帮助。

关键词：红曲霉 Ctn合成蛋白亚细胞定位双荧光共定位系统根癌农杆菌转化

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根癌农杆菌介导的VHb异源表达及其对里氏木霉的影响

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工业微生物 2014年第5期44卷 58-64页

作者：张倩李志敏叶勤华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

里氏木霉是生产纤维素酶的重要菌株，在其浸没式发酵过程中，氧传递是重要影响因素。为了减轻溶氧的限制，本研究借助根癌农杆菌将透明颤菌血红蛋白基因vgb引入里氏木霉。qPCR结果表明，pki及gpd启动子均可以有效启动vgb在里氏木霉中的... 详细信息

里氏木霉是生产纤维素酶的重要菌株，在其浸没式发酵过程中，氧传递是重要影响因素。为了减轻溶氧的限制，本研究借助根癌农杆菌将透明颤菌血红蛋白基因vgb引入里氏木霉。qPCR结果表明，pki及gpd启动子均可以有效启动vgb在里氏木霉中的表达。进一步实验结果表明，在摇瓶培养中，供氧充足情况下野生菌和转化株的生长无明显差异，但是在静止培养条件下，氧气供应受限，转化菌株的干重是野生菌的17．8—25．5倍。

关键词：里氏木霉纤维素酶根癌农杆菌转化透明颤菌血红蛋白滤纸酶活

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