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抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响

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南方医科大学学报 2019年第1期39卷 106-112页

作者：黄颖熊华翠陈柯朱晓斌尹小萍梁韵罗薇雷期音南方医科大学顺德医院(佛山市顺德区第一人民医院)口腔医学中心广东佛山528308 南方医科大学口腔医院广东广州510000 广州市妇女儿童医疗中心广东广州510623 桂林医学院附属医院广西壮族自治区桂林541000

目的探讨抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响。方法 5、10 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分别处理根尖乳头干细胞(SCAPs),对照组不做处理,检测自噬相关蛋白LC3-II表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测细胞内GFP-LC3数目,吖啶橙染色... 详细信息

目的探讨抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响。方法 5、10 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分别处理根尖乳头干细胞(SCAPs),对照组不做处理,检测自噬相关蛋白LC3-II表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测细胞内GFP-LC3数目,吖啶橙染色检测酸性囊泡情况。TNF-α,TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,检测LC3-II的表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测GFP-LC3数目,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡。TNF-α、TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,对照组不做处理,诱导成骨向分化,qRT-PCR检测分化第3、7、14天时成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的表达。结果 TNF-α可诱导SCAPs自噬活化:TNF-α组LC3-II/β-actin水平较对照组升高且具有浓度依赖性(P细胞内GFP-LC3数目较TNF-α组显著降低(P细胞活力(P细胞凋亡水平(P细胞保护作用,对抗细胞凋亡;自噬的抑制将下调TNF-α作用下SCAPs的成骨向分化水平,提示自噬在TNF-α作用下SCAPs的成骨分化过程中具有重要作用。

关键词：根尖乳头干细胞肿瘤坏死因子-α 自噬分化

不同光照能量LED红光照射牙周膜干细胞与根尖乳头干细胞的增殖

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中国组织工程研究 2019年第21期23卷 3289-3293页

作者：吴艳杨瑶瑶王瑶西南医科大学附属口腔医院口腔预防保健科四川省泸州市646000

背景:光生物调节是一种新型治疗方案,LED红光能否影响牙源干细胞增殖,是探索颌面部再生治疗新方案的关键。目的:比较不同光照能量LED红光对人牙周膜干细胞与人根尖乳头干细胞增殖的影响。方法:分离培养、流式鉴定获取人牙周膜干细胞和... 详细信息

背景:光生物调节是一种新型治疗方案,LED红光能否影响牙源干细胞增殖,是探索颌面部再生治疗新方案的关键。目的:比较不同光照能量LED红光对人牙周膜干细胞与人根尖乳头干细胞增殖的影响。方法:分离培养、流式鉴定获取人牙周膜干细胞和人根尖乳头干细胞。MTT法检测不同光照能量0,1,3,5 J/cm^2对两种牙源性干细胞增殖的影响。结果与结论:①非光照下根尖乳头干细胞增殖速度较牙周膜干细胞更快,1,3,5 J/cm^2 LED红光均能促进两种牙源性干细胞增殖;②LED红光能促进牙周膜干细胞缓慢增殖期和对数生长期(1-7d)增殖,其中5J/cm^2对早期影响最明显,后期1 J/cm^2增殖作用最强;③LED红光对根尖乳头干细胞对数生长后期(5-7 d)影响较明显,3 J/cm^2LED红光的增殖作用于第7天达到峰值;④根据人牙周膜干细胞和人根尖乳头干细胞对LED红光的时效依赖及量效依赖性,选定特定的光照能量及时间,可快速有效地促进细胞增殖。

关键词：根尖乳头干细胞牙周膜干细胞牙源性干细胞 LED红光细胞增殖光照能量光生物调节

瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响

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口腔疾病防治 2019年第1期27卷 23-29页

作者：尹小萍熊华翠陈柯黄颖徐帅妹桂林医学院口腔科广西壮族自治区桂林541000 南方医科大学口腔医院广东广州510280 南方医科大学顺德医院口腔医学中心广东佛山528000

目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免... 详细信息

目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达。实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达。结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因。与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P <0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P <0.05)。3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P <0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),于14 d达到峰值。结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达。

关键词：牙源性根尖乳头干细胞瘦素成骨/成牙本质相关基因分化牙本质基质蛋白.1 牙本质涎磷蛋白骨钙素

miR-222-5p在人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质向分化中的作用

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山东大学学报（医学版） 2020年第3期58卷 87-93,112页

作者：宋孟晓王燕刘进忠郑州大学第一附属医院口腔科河南郑州450052 山东大学口腔医学院·口腔医院特诊科山东济南250012 山东省口腔组织再生重点实验室山东济南250012 山东省口腔生物材料与组织再生工程实验室山东济南250012

目的探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miR-NAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检... 详细信息

目的探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miR-NAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检测DSPP、Runx2的表达,挑选表达量高的miR-222-5p组,Western blotting检测DSPP、Runx2蛋白水平的表达.生物信息学靶基因预测miR-222-5p的潜在靶基因,构建靶基因野生型/突变型双荧光素酶报告基因载体,与miR-222-5p共转染HEK 293T,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,证明miR-222-5p和预测的靶基因之间的关系.Western blotting验证miR-222-5p转染SCAP后靶基因的表达.进一步研究抑制内源性miR-222-5p和干扰靶基因对SCAP成骨/成牙本质向分化的影响.结果 19个miRNAs表达与芯片结果一致,其中miR-222-5p表达量高;转染miR-222-5p组DSPP、Runx2的mRNA及蛋白表达明显上调;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验确认人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)是miR-222-5p的直接靶基因,而且过表达miR-222-5p抑制SFRP4表达;干扰SFRP4可以有效地逆转miR-222-5p inhibitor对DSPP表达的抑制作用.结论 miR-222-5p通过靶向调节SFRP4促进SCAP成骨/成牙本质向分化.

关键词： miR-222-5p 根尖乳头干细胞成骨/成牙本质向分化 SFRP4 Wnt信号通路

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富血小板血浆对根尖乳头干细胞增殖的影响

牙体牙髓牙周病学杂志 2013年第8期23卷 489-491,540页

作者：刘彩霞王立唐山市口腔医院儿童口腔科河北唐山063000

目的:观察不同浓度富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对人根尖乳头干细胞(humanapical papilla stem cells,HAPSCs)增殖的影响。方法:两步离心法制备PRP,并用ELISA法测定其中血小板数以及血小板源性生长因子(PDGF-AB)、转化生长因... 详细信息

目的:观察不同浓度富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对人根尖乳头干细胞(humanapical papilla stem cells,HAPSCs)增殖的影响。方法:两步离心法制备PRP,并用ELISA法测定其中血小板数以及血小板源性生长因子(PDGF-AB)、转化生长因子(TGF-β1)的浓度;组织块法分离、培养HAPSCs,分别用含5%、10%、20%PRP的DMEM中进行培养(以不含PRP的DMEM作对照),在培养1、2、3、4、5 d各时间点以CCK-8法检测各组HAPSCs的增殖活性。结果:所制备的PRP中血小板数和各生长因子浓度均大于全血;与对照组相比,不同浓度PRP对HAPSCs的增殖均有明显促作用(P0.05)。结论:5%、10%、20%的PRP对HAPSCs的增殖均有明显促进作用,其中以10%组最为显著。

关键词：根尖乳头干细胞富血小板血浆生长因子细胞增殖

TNF-α对鼠根尖乳头干细胞增殖及多向分化能力的影响

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重庆医学 2017年第14期46卷 1874-1877页

作者：曹蓉蓉马俊玥李淑慧马玉吴佩玲新疆医科大学第二附属医院口腔科乌鲁木齐830063

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对鼠根尖乳头干细胞(SCAP)增殖及多向分化能力的影响。方法采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,将细胞分为实验组(TNF-α浓度为5、10、20、50ng/mL)和对照组(TNF-α浓度为0ng/mL),使用四甲基偶氮唑蓝(MTT... 详细信息

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对鼠根尖乳头干细胞(SCAP)增殖及多向分化能力的影响。方法采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,将细胞分为实验组(TNF-α浓度为5、10、20、50ng/mL)和对照组(TNF-α浓度为0ng/mL),使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SCAP的增殖能力;采用茜素红染色及实时定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α对SCAP成骨/成牙本质能力的影响;油红O染色检测TNF-α对SCAP成脂能力的影响;qRT-PCR检测TNF-α对SCAP血管相关基因表达的影响。结果体外培养SCAP符合间充质干细胞来源的特征且具有多向分化能力。MTT结果显示:与对照组相比,各浓度组均能促进SCAP增殖(P细胞黏附分子-1表达量明显降低(P<0.05)。结论炎性因子TNF-α对SCAP的增殖有明显促进作用但同时不同程度抑制SCAP多向分化能力。

关键词：干细胞分生组织肿瘤坏死因子α 根尖乳头干细胞多向分化大鼠,Wistar

TNF-α对根尖乳头干细胞体外增殖及成牙成骨向分化能力的影响

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口腔医学研究 2016年第4期32卷 343-346页

作者：于莉李淑慧袁萍赵璐周春梅吴佩玲新疆医科大学第二附属医院口腔科新疆乌鲁木齐830063

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对根尖乳头干细胞(SCAP)外增殖及成牙成骨向分化能力的影响。方法:采用酶消化法结合组织块法获得根尖乳头干细胞,免疫荧光免疫组化法鉴定细胞来源,通过不同浓度的TNF-α进行干预后检测对SCAP增殖,矿化... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对根尖乳头干细胞(SCAP)外增殖及成牙成骨向分化能力的影响。方法:采用酶消化法结合组织块法获得根尖乳头干细胞,免疫荧光免疫组化法鉴定细胞来源,通过不同浓度的TNF-α进行干预后检测对SCAP增殖,矿化成牙成骨能力的影响。结果:MTT检测显示各浓度组TNF-α均能刺激SCAP的体外增殖,10、50mg/L的TNF-α实验组可明显促进SCAP增殖(P细胞胞浆染色且染色较浅,呈褐色为阳性表达,对照组(0 mg/L TNF-α)细胞胞浆完全着色呈深褐色,为强阳性表达。结论:不同浓度TNF-α对SCAP的生长增殖均有促进作用,TNF-α在不同程度上对SCAP矿化及成牙成骨向分化有抑制作用。

关键词：根尖乳头干细胞肿瘤坏死因子-α 增殖矿化

根尖乳头干细胞在含KH2PO4矿化诱导液中的增殖变化

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中国医疗前沿 2012年第9期7卷 20-21页

作者：王玲菲廖红兵广西医科大学附属口腔医院

目的探讨根尖乳头干细胞在含/不含KH2PO4矿化诱导液中的增殖变化。方法从未发育完全的根尖孔分离乳头组织,消化提纯出根尖乳头干细胞,分别用含/不含KH2PO4矿化诱导液处理,对照组为DMEM培养液;通过流式细胞术检测细胞周期,分析对根尖乳... 详细信息

目的探讨根尖乳头干细胞在含/不含KH2PO4矿化诱导液中的增殖变化。方法从未发育完全的根尖孔分离乳头组织,消化提纯出根尖乳头干细胞,分别用含/不含KH2PO4矿化诱导液处理,对照组为DMEM培养液;通过流式细胞术检测细胞周期,分析对根尖乳头干细胞的增殖变化。结果在含KH2PO4矿化诱导液组根尖乳头干细胞的增殖指数最高,与其他两组相比有统计学差异(P根尖乳头干细胞的增殖能力。

关键词：根尖乳头干细胞增殖矿化液

根尖乳头干细胞向牙髓牙本质复合体分化能力的实验研究

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临床口腔医学杂志 2016年第1期32卷 26-30页

作者：于莉李淑慧周春梅袁萍曹蓉蓉吴佩玲新疆医科大学第二附属医院口腔科新疆乌鲁木齐830063

目的:应用组织工程方法,探讨根尖乳头干细胞(SCAP)分别在炎性环境(肿瘤坏死因子-α)及正常环境下向牙髓牙本质复合分化的可能性。方法:分离大鼠根尖乳头组织,采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,鉴定细胞来源,进行MTT生长曲线的测定,分... 详细信息

目的:应用组织工程方法,探讨根尖乳头干细胞(SCAP)分别在炎性环境(肿瘤坏死因子-α)及正常环境下向牙髓牙本质复合分化的可能性。方法:分离大鼠根尖乳头组织,采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,鉴定细胞来源,进行MTT生长曲线的测定,分正常组、炎症组(10 ng/m L TNF-α)及空白对照组行体外成骨能力茜素红及免疫组化实验,并将3个组分别移植到大鼠背部皮下观察8/12周后新生组织的形成情况。结果:MTT结果显示10 ng/m L TNF-α组显著高于正常SCAP组,差异有统计学意义(P<0.5);茜素红染色显示均有矿化结节生成,与炎性组(10 ng/m L TNF-α)相比,正常组SCAP染色显著,矿化结节形成的范围大且呈深橘色;免疫组化染色显示SCAP胞浆中DSP/BSP均有表达;正常、炎症组移植物可见牙髓牙本质样结构形成,且DSP/BSP均阳性表达,空白对照组未见矿化组织形成。结论:SCAP具有高增殖及成骨向分化能力,可进行牙髓牙本质复合体的再生,炎性因子TNF-α对SCAP的生长增殖有促进作用同时不同程度上对SCAP矿化及成牙成骨向分化有抑制作用。

关键词：根尖乳头干细胞牙髓牙本质复合体肿瘤坏死因子-α