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核糖体失活蛋白(α-MC)亚细胞定位及对TMV的抑制作用

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中国农业科学 2017年第5期50卷 840-848页

作者：魏周玲彭浩然潘琪张永至蒲运丹吴根土青玲孙现超西南大学植物保护学院

【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和... 详细信息

【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP;用Wolf PSORT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和Ds Red2的N端,构建融合蛋白表达载体,采用GFP和Ds Red2标记进行亚细胞定位,验证预测结果;通过农杆菌介导在本氏烟中瞬时表达α-MC,再接种烟草花叶病毒,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别检测病毒在接种叶片的蛋白积累量和RNA表达量,分析瞬时表达α-MC的抗病毒效果。利用q RT-PCR分析植物防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,探究其抗病毒机理。【结果】克隆得到基因α-MC和PAP全长,分别为861和939 bp。Wolf PSORT预测显示α-MC和PAP主要定位于细胞质膜上。共聚焦荧光显微镜下观察发现,分别用GFP和Ds Red2标记的α-MC和PAP均定位在本氏烟叶片表皮细胞质膜上,与Wolf PSORT预测的α-MC和PAP定位结果相一致。异源表达的PAP对植物细胞毒性作用强,导致表达部位细胞坏死,异源表达α-MC的植物细胞无明显毒性,表达部位细胞完整。在本氏烟中异源表达α-MC后,再接种TMV-GFP,在紫外灯下观察发现α-MC处理后的本氏烟在接种TMV-GFP 48 h后没有出现绿色荧光,而对照组出现荧光。72 h后处理组出现零星荧光,但对照组的绿色荧光开始扩散,连续观察,处理组几乎没有变化,接种TMV-GFP 6 d后,发现处理组的绿色荧光几乎没有扩大的趋势,而对照组的绿色荧光已扩散至心叶;ELISA检测表明,在接种TMV-GFP 6 d后的叶片中,对照组与健康植物的OD492比值几乎已达到处理组的10倍以上;q RT-PCR检测TMV RNA的含量,结果显示对照组TMV RNA表达量是处理组的149倍左右,表明α-MC对TMV复制和移动均有明显抑制;q RT-PCR结果分析显示,NPR1在只注射TMV、单独表达α-MC以及表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均被诱导表达,但后者的表达量是前两个处理的约2.5倍左右,在只接种α-MC和表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均检测到PR1、PR2,但后者的表达量显著高出前者5—7倍,表明异源表达α-MC可诱导植物中防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,从而引起更强的防御反应。【结论】异源表达α-MC显著抑制TMV,能够激活植物防卫反应,且对植物细胞无明显毒性。研究结果为利用异源表达α-MC方法开发控制植物病毒新产品提供了参考依据。

关键词：核糖体失活蛋白 α-MC 烟草花叶病毒异源表达亚细胞定位防卫相关基因

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核糖体失活蛋白研究进展

植物学通报 2005年第4期22卷 456-462页

作者：李洪艳王关林李建国李红陈陆琴辽宁师范大学生命科学学院大连116029 大连高新技术产业园区大连116021

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白,主要存在于植物当中,在真菌和细菌中也有发现。其共同特点是具有N-糖苷酶活性,能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤,使核糖体失活,从而抑制了蛋白质合成。本文对核糖体失活蛋白的主要性... 详细信息

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白,主要存在于植物当中,在真菌和细菌中也有发现。其共同特点是具有N-糖苷酶活性,能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤,使核糖体失活,从而抑制了蛋白质合成。本文对核糖体失活蛋白的主要性质、应用以及国内外有关这类蛋白的研究进展加以概述。

关键词：核糖体失活蛋白 N-糖苷酶蛋白合成研究进展蛋白质合成 rRNA 毒蛋白腺嘌呤定位点环结构

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核糖体失活蛋白抗HIV-1作用的研究进展

Zoological Research 2006年第5期27卷 541-548页

作者：王建华欧阳东云王媛媛郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-... 详细信息

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-1感染细胞的凋亡及相应的信号转导、诱发活性氧的产生,以及对HIV-1整合酶的抑制作用等几个方面做了较详尽的阐述,并对RIPs的结构修饰和抗HIV-1构效关系进行了综述。对RIPs类化合物在抗病毒领域进行深入而系统地研究,能拓宽其在抗HIV/AIDS临床上的进一步应用。

关键词：核糖体失活蛋白天花粉蛋白 RNA—N糖苷酶抗病毒机制 HIV-1

核糖体失活蛋白及其在植物抗立枯丝核菌基因工程中的应用

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河南农业科学 2015年第6期44卷 7-12,28页

作者：郝文胜孙亚卿张少英内蒙古农业大学农学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区马铃薯繁育中心内蒙古呼和浩特010031

核糖体失活蛋白(RIPs)是一类主要出现在植物中并具有r RNA N-糖苷酶活性的蛋白质,大体上分为Ⅰ型和Ⅱ型2类。介绍了RIPs在抗真菌活性、毒性和免疫原性方面的研究进展,并对其在抗立枯丝核菌植物基因工程方面的应用进行了综述。

关键词：核糖体失活蛋白植物抗真菌活性基因工程立枯丝核菌

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核糖体失活蛋白生物信息学分析

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2016年第1期37卷 113-118页

作者：朱峰冯建国钱坤袁树忠杨益众扬州大学园艺与植物保护学院江苏扬州225009

核糖体失活蛋白(RIPs)是一类破坏真核细胞核糖体结构、质生物合成的毒蛋白,广泛存在于植物界,具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌以及抗虫等多种生物活性。为探究RIPs的功能,利用生物信息学方法对6种Ⅰ型RIPs的序列一致性、氨基酸组成、理化性质... 详细信息

核糖体失活蛋白(RIPs)是一类破坏真核细胞核糖体结构、质生物合成的毒蛋白,广泛存在于植物界,具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌以及抗虫等多种生物活性。为探究RIPs的功能,利用生物信息学方法对6种Ⅰ型RIPs的序列一致性、氨基酸组成、理化性质、等电点、磷酸化位点、信号肽、蛋白三维结构等进行预测和分析。结果表明:6种Ⅰ型RIPs存在大量高度保守的结构区域,同时蛋白中含有多个丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)磷酸化位点。6种蛋白均为稳定性蛋白,且等电点均偏碱性,大部分蛋白中亮氨酸(L)含量较高。6种蛋白中均存在信号肽剪切位点,二级结构以α螺旋和β折叠为主。6种蛋白的三维结构较为相似,提示功能上存在相似性。这一研究结果为进一步挖掘RIPs的生物学功能和改良植物抗生物逆境特性提供理论依据。

关键词：核糖体失活蛋白蛋白三维结构生物信息学分析

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核糖体失活蛋白体内外抗病毒的实验研究

微生物学通报 2005年第5期32卷 107-113页

作者：于海王雪鹏常维山山东农业大学动物科技学院泰安271018

核糖体失活蛋白是一类广泛存在于高等植物细胞内的能抑制核糖体功能的植物蛋白。建立了从苦瓜籽中提纯核糖体失活蛋白的方法,蛋白质电泳结果显示提取液中含有一定量的核糖体失活蛋白。在鸡胚成纤维细胞和鸡胚上进行核糖体灭活蛋白体内... 详细信息

核糖体失活蛋白是一类广泛存在于高等植物细胞内的能抑制核糖体功能的植物蛋白。建立了从苦瓜籽中提纯核糖体失活蛋白的方法,蛋白质电泳结果显示提取液中含有一定量的核糖体失活蛋白。在鸡胚成纤维细胞和鸡胚上进行核糖体灭活蛋白体内外抗马立克病病毒、新城疫病毒和鸡痘病毒试验,结果均表明核糖体灭活蛋白对3种病毒有一定的抑制作用。

关键词：核糖体失活蛋白细胞病变 MTT 血凝

新丰毒蛋白——一种新的具有活性小A链的核糖体失活蛋白(英文)

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 531-532页

作者：侯法健刘仁水刘望夷中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

辛纳毒蛋白是从香樟种子中分离的一种Ⅱ核糖体失活蛋白 .最近 ,从香樟种子中还分离到另一种微型双链核糖体失活蛋白 ,命名为新丰毒蛋白 .还原的新丰毒蛋白表现出与还原的辛纳毒蛋白同样的RNAN 糖苷酶和体外对抑制蛋白质翻译的活力 .新... 详细信息

辛纳毒蛋白是从香樟种子中分离的一种Ⅱ核糖体失活蛋白 .最近 ,从香樟种子中还分离到另一种微型双链核糖体失活蛋白 ,命名为新丰毒蛋白 .还原的新丰毒蛋白表现出与还原的辛纳毒蛋白同样的RNAN 糖苷酶和体外对抑制蛋白质翻译的活力 .新丰毒蛋白的B链与辛纳毒蛋白的B链具有同样的分子质量和相同的N端 10个氨基酸序列 .它的A链N端 10个氨基酸序列也与辛纳毒蛋白的A链完全一致 ,并且C端与辛纳毒蛋白的A链一样具有半胱氨酸 ,但是它的分子质量却只有辛纳毒蛋白A链的一半 .RT PCR和RNA印迹结果表明体内不存在新丰毒蛋白的mRNA .推测新丰毒蛋白是从辛纳毒蛋白通过蛋白质剪接而产生的。

关键词：新丰毒蛋白活性小A链核糖体失活蛋白蛋白质剪接

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单链核糖体失活蛋白的核糖核酸酶活性

生物化学与生物物理进展 1996年第5期23卷 453-456页

作者：陈红华陵王悦颜茂恭董贻诚余明琨姚启智中国科学院生物物理研究所中国科学技术大学研究生院

以芹菜４．５ＳＲＮＡ为底物，在ｐＨ５．０的条件下，５种纯核糖体失活蛋白：天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性，放射自显影图显示出它们对ＲＮＡ分子中的各种碱基具有不同的... 详细信息

以芹菜４．５ＳＲＮＡ为底物，在ｐＨ５．０的条件下，５种纯核糖体失活蛋白：天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性，放射自显影图显示出它们对ＲＮＡ分子中的各种碱基具有不同的敏感性．

关键词：核糖体失活蛋白核糖核酸酶活性

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纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白

分析化学 2010年第5期38卷 627-631页

作者：全灿刘军中国计量科学研究院化学分析所

建立了纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白的方法。以聚苯乙烯纳米颗粒为载体并进行表面修饰,在其表面固定特异性蓖麻毒单抗并作为探针,用于蓖麻毒蛋白的检测。采用场流分离技术对纳米颗粒探针进行准确表征,并利用扫描电镜比较聚苯乙烯纳... 详细信息

建立了纳米颗粒探针检测核糖体失活蛋白的方法。以聚苯乙烯纳米颗粒为载体并进行表面修饰,在其表面固定特异性蓖麻毒单抗并作为探针,用于蓖麻毒蛋白的检测。采用场流分离技术对纳米颗粒探针进行准确表征,并利用扫描电镜比较聚苯乙烯纳米颗粒的形貌变化。结果表明:通过扫描电镜图片能够观察到聚苯乙烯纳米颗粒表面结合的蛋白,此纳米颗粒探针能够与蓖麻毒蛋白等核糖体失活蛋白的特异性结合,应用于目标蛋白的检测。

关键词：纳米颗粒探针蓖麻毒素核糖体失活蛋白场流分离扫描电镜聚苯乙烯