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动物医学进展 2022年第1期43卷 51-57页

作者：果馨儒马晓晓兰卓吴婷婷邱阳元金振华李烨高忠燕张显光王春仁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院黑龙江齐齐哈尔161005 黑龙江扎龙自然保护区管理局黑龙江齐齐哈尔161005

楔形前殖吸虫(Prosthogonimus cuneatus)是禽类和鸟类输卵管、法氏囊和直肠常见的寄生虫之一,对禽和鸟类危害较大。利用PCR对楔形前殖吸虫核糖体全序列进行了扩增,并探讨了其与其他吸虫的进化关系。结果发现,楔形前殖吸虫核糖体全序列长... 详细信息

楔形前殖吸虫(Prosthogonimus cuneatus)是禽类和鸟类输卵管、法氏囊和直肠常见的寄生虫之一,对禽和鸟类危害较大。利用PCR对楔形前殖吸虫核糖体全序列进行了扩增,并探讨了其与其他吸虫的进化关系。结果发现,楔形前殖吸虫核糖体全序列长10713 bp,其中18S、ITS1、5.8S、ITS2、28S、IGS的长度分别为1970、1271、161、224、4155、2932 bp;核糖体全序列有15对正向重复序列和34对反向重复序列,正向重复序列全部位于ITS1和IGS区域;基于18S基因的进化分析显示,楔形前殖吸虫与同属的卵圆前殖吸虫及同科的稀有裂睾吸虫聚在同一分支上,与同目的Brachycladiidae和Auridistomidae两科吸虫亲缘关系较其他科近。首次解析了楔形前殖吸虫的核糖体全序列特征,并探讨了其与其他吸虫的进化关系,研究结果为前殖科吸虫的分类学、群体遗传学和系统学研究提供了新资料。

关键词：楔形前殖吸虫核糖体全序列序列分析进化分析

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黑龙江蜻蜓前殖吸虫囊蚴感染调查及成虫线粒体核糖体全序列分析

黑龙江蜻蜓前殖吸虫囊蚴感染调查及成虫线粒体核糖体全序列分析

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作者：果馨儒黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

前殖吸虫(Prosthogonimus spp.)是家禽和野生鸟类常见的寄生虫,严重地影响着它们的健康。目前对于家禽前殖吸虫的研究主要集中在病例分析、疾病防治等方面,对前殖吸虫在中间宿主内的感染情况以及线粒体核糖体全序列等分子水平的研究还... 详细信息

前殖吸虫(Prosthogonimus spp.)是家禽和野生鸟类常见的寄生虫,严重地影响着它们的健康。目前对于家禽前殖吸虫的研究主要集中在病例分析、疾病防治等方面,对前殖吸虫在中间宿主内的感染情况以及线粒体核糖体全序列等分子水平的研究还相对较少。因此本研究拟对黑龙江省蜻蜓体内前殖吸虫囊蚴感染情况进行调查,通过动物感染实验获得成虫,并对成虫线粒体全基因组和核糖体全序列进行扩增和分析,探讨前殖吸虫与其他吸虫的亲缘关系。2019年6月至2020年9月在黑龙江省12个地市的不同地点采集蜻蜓样本,共采集到蜻蜓12种,6809只。采取腹部肌肉压片法检查不同地点、不同种类蜻蜓体内前殖吸虫囊蚴的感染情况,计算感染率。对采集到的囊蚴采用形态学、动物感染实验及分子生物学的方法进行鉴定。动物感染实验获得成虫再进行形态学和分子生物学鉴定以确定囊蚴鉴定的准确性。利用PCR分别扩增成虫的线粒体全基因组和核糖体全序列,采用最大简约法(MP)、最大似然法(ML)及贝叶斯法(BI)分别以线粒体12个串联的蛋白编码基因和核糖体18S为标记基因构建进化树,探究其与其他吸虫的亲缘关系。结果,黑龙江省蜻蜓体内共发现楔形前殖吸虫(Prosthogonimus cuneatus)、透明前殖吸虫(Prosthogonimus pellucidus)和前殖吸虫未确定种(Prosthogonimus sp.)三种前殖吸虫囊蚴;蜻蜓囊蚴总感染率为22.0%(1498/6809),黑河最高,为46.6%(48/103);采集到的12种蜻蜓中有6种检出吸虫囊蚴,囊蚴感染率最高的三种蜻蜓分别为扁腹赤蜻(Sympetrum depressiusculum)30.6%(190/621)、黄蜻(Pantala flavescens)22.8%(541/2371)、秋赤蜻(Sympetrum frequens)22.3%(376/1689)。三种前殖吸虫囊蚴中前殖吸虫未确定种和透明前殖吸虫的感染数量多分布较广,黄蜻为三种前殖吸虫囊蚴感染数量最多的蜻蜓品种。动物感染后获得了楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫两种成虫。楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫线粒体基因组全长分别为14 829 bp和15 013 bp,均包含12个蛋白编码基因、22个t RNAs、2个r RNA和1个非编码区,其AT含量分别为64.47%和65.34%。楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫12个蛋白编码基因使用频率最高的起始密码子和终止密码子分别为ATG和TAG。以12个蛋白编码基因串联构建的进化树显示,同亚目中前殖科与双腔科的亲缘关系较斜睾科和Brachycladiidae近。楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫核糖体全序列大小分别为10 713 bp和9501 bp,均包含18S、ITS1、5.8S、ITS2、28S和IGS,AT含量分别为49.87%和49.52%。楔形前殖吸虫核糖体全序列中共发现15对正向重复序列,34对反向重复序列,透明前殖吸虫核糖体全序列中共发现27对正向重复序列和37对反向重复序列。以18S为基因标记的进化分析显示,楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫聚集在一起与同属的卵圆前殖吸虫及同科稀有裂睾吸虫聚集在同一分支上,与同亚目的短肠科和Auridistomidae两科吸虫亲缘关系较其它科近。本研究查明了黑龙江省蜻蜓体内前殖吸虫囊蚴的感染情况,为前殖吸虫病的防控提供了可靠的依据;首次获得楔形前殖吸虫和透明前殖吸虫的线粒体全基因组和核糖体全序列,分析了其序列特征和进化关系,为前殖科吸虫的分子分类、群体遗传和进化的进一步研究奠定了基础。

关键词：前殖吸虫囊蚴线粒体全基因组核糖体全序列序列分析进化分析

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五种吸虫核糖体全序列的扩增与特征分析

五种吸虫核糖体全序列的扩增与特征分析

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作者：宿欣黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

吸虫是一种呈世界性分布的,主要寄生于宿主肝胆管及小肠等部位的寄生虫,造成畜牧业巨大经济损失的同时,人兽共患寄生虫还对人类的健康造成严重的威胁,甚至危及生命。核糖体在细胞中广泛存在,在生命活动中起着重要的作用,也是蛋白质合成... 详细信息

吸虫是一种呈世界性分布的,主要寄生于宿主肝胆管及小肠等部位的寄生虫,造成畜牧业巨大经济损失的同时,人兽共患寄生虫还对人类的健康造成严重的威胁,甚至危及生命。核糖体在细胞中广泛存在,在生命活动中起着重要的作用,也是蛋白质合成的重要场所,核糖体DNA为编码核糖体RNA的基因,由可转录的核糖体RNA和不可转录的间隔区组成,通过对核糖体序列的测定可以对物种进行鉴定,确定物种的分类地位,明确物种的多样性等。因此,本研究采用PCR等方法对人畜危害严重的土耳其斯坦裂体吸虫雌虫和雄虫、东方次睾吸虫、华支睾吸虫、曲领棘缘吸虫和圆圃棘口吸虫的核糖体全序列进行扩增,对5种吸虫核糖体全序列的结构特征及同源性进行分析,并以不同的标记基因构建吸虫的系统发生树。结果表明,5种吸虫核糖体全序列长度为8209～8917 bp,每种吸虫核糖体全序列的6段基因在长度上几乎无变化,仅有土耳其斯坦裂体吸虫雌虫、雄虫的IGS长度有轻微变化。通过比较发现5种虫体间5.8S同源性高达92.4～100%,进化速率较慢的18S和28S的同源性也分别高达89.7～99.8%和80.3～96.8%,而ITS1、ITS2和IGS同源性分别为56.4～94.8%、49.5～96.2%和34.2～94.1%。由此可见,在各段核糖体序列中,种内差异小,种间差异大。同时,我们还能得到6段核糖体序列的保守性排序为:5.8S>18S>28S>ITS1>ITS2>IGS。以不同标记基因构建的进化树,每个进化树并非完全与传统分类学相符,基于18S、28S构建的进化树,在科、目之间的进化关系与传统分类学不符;基于ITS1、IGS构建的进化树,在属之间的进化关系与传统分类学不符;基于ITS2构建的进化树,与传统分类学相符。可见18S、ITS1、ITS2、28S、IGS分别适合用于目及以上、科间、属间、目及以上、科之间的进化关系。同时,根据现有较少的IGS序列,我们能够推断IGS能够作为基因标记,对吸虫的进化关系进行探讨。本研究首次获得了5种吸虫30条虫体的核糖体全序列,并对其结构特征、同源性进行了分析,丰富了复殖吸虫的核糖体全序列的数据,确定了各段基因的保守性排序,采取不同核糖体基因构建吸虫的系统进化树结果表明,不同标记基因适合于不同的分类阶元。

关键词：核糖体全序列吸虫序列分析标记基因

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胰阔盘吸虫核糖体全序列分析及进化关系分析

胰阔盘吸虫核糖体全序列分析及进化关系分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：宿欣郑旭高远高俊峰常巧呈王春仁黑龙江八一农垦大学动物科技学院

胰阔盘吸虫可寄生于牛、羊等反刍动物还可以寄生于人,引起胰脏、胰管的损伤或阻塞胰管,引起动物的阔盘吸虫病,是一种人兽共患病原。核糖体在生命活动中起着重要的作用,是蛋白质合成的加工厂。核糖体包括18S,ITS1,5.8S,ITS2,28S和IGS。... 详细信息

胰阔盘吸虫可寄生于牛、羊等反刍动物还可以寄生于人,引起胰脏、胰管的损伤或阻塞胰管,引起动物的阔盘吸虫病,是一种人兽共患病原。核糖体在生命活动中起着重要的作用,是蛋白质合成的加工厂。核糖体包括18S,ITS1,5.8S,ITS2,28S和IGS。本研究利用分子生物学方法,选取5条胰阔盘吸虫,对其核糖体全序列进行扩增,对5个核糖体全序列各部分序列的大小、碱基组成等进行分析,并基于18S核糖体序列构建系统发生树,分析胰阔盘吸虫与其他吸虫间的进化关系。扩增获得的5个核糖体全序列长度为8493497 bp,5条虫体18S、ITS-1、5.8S、ITS-2、28S的长度均无变化,分别为1 992 bp、1 293 bp、160 bp、231 bp和3 669 bp,5条虫体的IGS长度只有四个碱基的变化,长度为1 147 bp 151 bp,AT含量分别为49.009.10%、52.132.28%、46.25%、46.75%、47.237.32%和48.749.83%。比较发现6段核糖体序列的种内差异分别为0.2%、0.5%、0%、0%、0.2%和2.90.2%。采用MP、ML和BI三种方法,以18S、28S为基因标记构建系统发生树的结果相似,胰阔盘吸虫位于斜睾目的进化分支上,与传统形态学分类一致。本研究为进一步研究胰阔盘吸虫的起源以及在吸虫中的系统发生地位提供科学依据。

关键词：胰阔盘吸虫核糖体全序列进化关系

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胰阔盘吸虫分子种系发生的研究

胰阔盘吸虫分子种系发生的研究

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作者：郑旭黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

胰阔盘吸虫（Eurytrema pancreaticum）主要寄生于牛、羊等反刍动物的胰脏、胰管内，破坏动物的胰腺或阻塞胰管，引起胰阔盘吸虫病。动物感染后会出现消瘦、贫血、水肿及消化功能障碍，导致生产性能下降，严重感染者会引起死亡。胰阔盘... 详细信息

胰阔盘吸虫（Eurytrema pancreaticum）主要寄生于牛、羊等反刍动物的胰脏、胰管内，破坏动物的胰腺或阻塞胰管，引起胰阔盘吸虫病。动物感染后会出现消瘦、贫血、水肿及消化功能障碍，导致生产性能下降，严重感染者会引起死亡。胰阔盘吸虫病呈全球分布，对反刍动物危害严重，给畜牧业生产造成较大的经济损失。另外，胰阔盘吸虫还可寄生于人，是一种重要的人兽共患病病原。目前对胰阔盘吸虫的研究主要集中在虫体形态结构、发育过程及胰阔盘吸虫病的流行病学、诊断和综合防治等传统寄生虫学方面;在分子水平上仅对核糖体18S和小RNA进行了研究，对核糖体全序列和线粒体全基因组的研究还未见报道。因此，本研究针对这一空白展开研究。首先，利用分子生物学方法，获得5条胰阔盘吸虫的核糖体全序列，对5个核糖体全序列的大小、基因组成、碱基组成等进行分析，并基于18S核糖体序列构建系统发生树，分析胰阔盘吸虫与其他吸虫间的进化关系。其次，扩增胰阔盘吸虫的线粒体全基因组，对全基因组进行序列分析，构建系统发生树，探讨胰阔盘吸虫在吸虫中的系统发生位置。结果表明：扩增获得的5个核糖体全序列长度为8306～8310bp，包括18S，ITS1，5.8S，ITS2，28S和IGS。5条虫体18S、ITS1、5.8S、ITS2、28S的长度均无变化，分别为1996bp、1103bp、160bp、231bp和3669bp，IGS长度只有四个碱基的变化，为1147～1151bp。比较发现6段核糖体序列的种内差异分别为0.1～0.4%、0～0.5%、0%、0%、0～0.2%和2.9～20.2%。以18S核糖体序列为标记基因，采用MP、ML和BI三种方法构建系统发生树的结果相似，胰阔盘吸虫位于斜睾目的进化分支上，与传统形态学分类一致，说明18S核糖体序列是研究寄生虫分子种系发生的良好基因标记。所获得的线粒体全基因组由12个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和2个非编码区组成，线粒体全基因组大小为15169bp，编码蛋白质基因、rRNA基因和非编码区序列长分别为10121bp，1746bp和1281bp。整个线粒体基因组核苷酸组成为：A=17.96%，C=11.13%，G=26.21%，T=44.52%，A+T占62.48%，基因组碱基组成明显偏好碱基A和T。胰阔盘吸虫的基因排列（含tRNA）属GO1型。以串联的线粒体12个蛋白质编码基因为基因标记，采NJ、MP和ML法构建系统发生树的结果相似，进化树分为二个大的分支，枭形目为一分支，后睾目、棘口目和斜睾目为另一分支。胰阔盘吸虫位于斜睾目独立的进化分支上。此结果与以18S核糖体序列为标记基因构建的进化树结果相似，说明线粒体全基因序列是研究寄生虫分子种系发生的良好基因标记。通过本研究，首次获得了胰阔盘吸虫核糖体全序列和线粒体全基因组，并对它们的特征进行了分析，丰富了吸虫核糖体全序列和线粒体全基因组资料，基于核糖体和线粒体基因构建的系统发生树从分子水平上探讨了胰阔盘吸虫及其他吸虫的进化关系。

关键词：胰阔盘吸虫核糖体全序列线粒体全基因组种系发生

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