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右美托咪定抑制NF-κB核易位减轻大鼠创伤性脑损伤神经炎症

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中华急诊医学杂志 2022年第5期31卷 644-649页

作者：揭娟杨莉沈俊王纯李坪吴海鹰钱传云昆明医科大学第一附属医院急诊医学科昆明650000 昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系昆明650500

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)调节创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后小胶质细胞(microglial,MG)极化及神经炎症的机制。方法42只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、TBI组、TBI+DEX组(又分为治疗... 详细信息

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)调节创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后小胶质细胞(microglial,MG)极化及神经炎症的机制。方法42只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、TBI组、TBI+DEX组(又分为治疗1 d、3 d和7 d组)、TBI+NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组和TBI+DEX+PDTC组,每组6只。采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,造模后1 h腹腔注射PDTC 100 mg/kg、2 h腹腔注射DEX 100μg/kg,直至取材。于取材前采用改良的神经功能缺损评分法(modified neurological severity score,mNSS)评价大鼠神经功能,ELISA检测血清炎症因子,取大鼠损伤皮质通过Western Blot检测MG M1和M2表型标记物及MyD88、NF-κB p65蛋白表达,免疫荧光染色观察损伤皮质处NF-κB p65在MG中的表达及入核情况。计量资料多组间比较采用单因素及双因素方差分析。结果与Sham组相比,TBI组mNSS评分显著升高,DEX组mNSS评分明显低于TBI组,差异有统计学意义(P核易位被抑制,该效应可被PDTC增强。结论DEX可通过抑制NF-κB核易位调节TBI大鼠MG活化,减轻神经炎症。

关键词：创伤性脑损伤右美托咪定小胶质细胞极化 NF-κB 核易位神经炎症

PRRSV体外感染Marc-145细胞对NF-κB p65/p50转录时相及核易位的影响

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 822-827页

作者：王潇娣朱玲周远成陈蕾李碧蔡雨函徐志文四川农业大学动物生物技术中心四川雅安625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对细胞核转录因子-κB(NF-κB,p65/p50)mRNA转录时相及核易位的影响,探讨PRRSV感染导致的免疫抑制与NF-κB的活化异常是否有一定的相关性,运用实时荧光定量PCR技术对PRRSV感染Marc-145细胞不同... 详细信息

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对细胞核转录因子-κB(NF-κB,p65/p50)mRNA转录时相及核易位的影响,探讨PRRSV感染导致的免疫抑制与NF-κB的活化异常是否有一定的相关性,运用实时荧光定量PCR技术对PRRSV感染Marc-145细胞不同时期NF-κB p50、p65mRNA的转录水平变化进行定量分析,并提取不同感染时期Marc-145细胞核蛋白,利用免疫印迹法检测细胞核内具有活性的p50、p65水平变化。荧光定量结果表明,Marc-145细胞感染PRRSV后第8～12小时,p50、p65转录水平急剧下调,第12～120小时p50、p65mRNA含量一直维持在较低水平,与接毒前及对照组同时期的转录水平相比,差异显著或极显著(P核内均未检测到p50的表达;感染后第12小时,细胞核内p65表达下调,第48～96小时未检测到p65的表达。可见,PRRSV体外感染Marc-145细胞能够抑制NF-κB p65/p50mRNA的转录及核易位。以上结果支持PRRSV感染早期无力的先天性免疫应答可能与NF-κB活化水平的低下有关的观点,为进一步研究PRRS的感染机制及NF-κB的功能提供新的思路和依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞核转录因子-κappaB 转录时相核易位

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α-突触核蛋白的核易位机制及其功能

中国生物化学与分子生物学报 2020年第10期36卷 1138-1144页

作者：李国祥杜廷福马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位... 详细信息

α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)是一种脑内含量丰富的可溶性蛋白质,既能参与正常突触功能的维持和囊泡运输,又与多种神经退行性疾病有关,然而其确切的功能目前仍未完全清楚。已有研究表明,在生理条件下,α-突触核蛋白主要定位在细胞质中,少部分能定位在细胞核中,具有多种生物学功能。在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者大脑及氧化应激的细胞中,均发现α-突触核蛋白趋向于向细胞核中聚集。α-突触核蛋白核易位受到多种因素的精密调控,除自身氨基酸序列外,还受到其129位丝氨酸磷酸化(S129)水平、点突变(A53T,A30P,G51D)、细胞内Ca2+水平的影响,以及核输入蛋α(importin-α)、三结构域蛋白28(tripartite motif-containing protein 28,TRIM28)等多种蛋白质的精密调控,其异常的核易位则与细胞毒性相关。核易位的α-突触核蛋白能和组蛋白去乙酰化酶及组蛋白甲基化酶相互作用,从而改变组蛋白乙酰化和甲基化水平,最终影响染色质的稳定性。此外,α-突触核蛋白能与DNA相互作用,从而改变DNA构象、参与DNA损伤修复及基因表达调控。本文综述了α-突触核蛋白的结构特征,生理及病理条件下的细胞核内定位现象,详细的核易位机制及其在胞核中的功能研究进展,将有助于了解α-突触核蛋白生理功能及其在疾病发生发展中的作用。

关键词： α-突触核蛋白核易位功能

实时定量检测NF-κB p65亚基核易位方法的建立

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生物技术通讯 2017年第5期28卷 676-680页

作者：贾俐莉王小利杨怡姝沈思嗣曾毅北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124

目的:建立可直观检测NF-κB p65亚基核易位的方法。方法:构建NF-κB p65的真核表达重组质粒p EGFP-p65,转染He La细胞,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)后采用活细胞成像技术观察绿色荧光蛋白在He La细胞内的变化。结果:TNF-α处理后0~2 h,EG... 详细信息

目的:建立可直观检测NF-κB p65亚基核易位的方法。方法:构建NF-κB p65的真核表达重组质粒p EGFP-p65,转染He La细胞,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)后采用活细胞成像技术观察绿色荧光蛋白在He La细胞内的变化。结果:TNF-α处理后0~2 h,EGFP-p65融合蛋白主要聚集在胞浆处;TNF-α处理后4~12 h,随处理时间的延长,细胞核处的绿色荧光蛋白逐渐增强,但细胞内总荧光值基本保持稳定。结论:TNF-α可以促进EGFP-p65入核。活细胞成像技术具有操作简单、实时动态、直观、定量等优点,可用于探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)潜伏感染再激活剂的作用机制。

关键词： NF-κB 肿瘤坏死因子α 活细胞成像核易位

原花青素通过转录因子EB诱导的自噬-溶酶体途径促进人牙周膜干细胞成骨分化的研究

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中华口腔医学杂志 2024年第5期59卷 453-462页

作者：刘卓李麒麟巫雅欣汪向垚毛靖龚士强华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心口腔正畸科、华中科技大学同济医学院口腔医学院、口腔颌面发育与再生湖北省重点实验室武汉430030

目的研究原花青素(PA)调节人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的具体机制,探讨PA对转录因子EB(TFEB)的表达和自噬-溶酶体途径的影响。方法将PDLSCs分为对照组和PA组,通过转录组测序(RNA Seq)分析差异表达基因,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR... 详细信息

目的研究原花青素(PA)调节人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的具体机制,探讨PA对转录因子EB(TFEB)的表达和自噬-溶酶体途径的影响。方法将PDLSCs分为对照组和PA组,通过转录组测序(RNA Seq)分析差异表达基因,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、碱性磷酸酶(ALP)染色和透射电子显微镜(TEM)观察细胞成骨能力和自噬水平。通过划痕实验和Trasnwell实验检测PDLSCs的迁移能力,溶酶体荧光探针(Lysotracker)染色和免疫荧光染色检测溶酶体的生物发生,蛋白质印迹法检测TFEB总蛋白及其在细胞质和细胞核中的表达,激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察TFEB的核易位。使用小干扰RNA(siRNA)技术敲低TFEB基因,进行PA处理或无处理。蛋白质印迹法检测细胞中自噬标志物苄氯素1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和成骨标志物Runt相关转录因子2(RUNX2)、ALP和骨钙素的表达。结果与对照组相比,PA组中PDLSCs的成骨和自噬相关基因出现差异性表达(P核/细胞质中的相对表达水平(1.52±0.12)均显著高于对照组(分别为1.00±0.11、1.00±0.13)(均P核/细胞质相对荧光强度(0.79±0.90)也显著高于对照组(0.11±0.08)(t=3.49,P核易位,激活自噬-溶酶体途径,促进PDLSCs的成骨分化。

关键词：原花青素类人牙周膜干细胞成骨分化转录因子EB 自噬-溶酶体途径核易位

注意新型非甾体抗雄激素药物阿帕他胺引起的皮肤不良事件

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中华临床免疫和变态反应杂志 2022年第5期16卷 558-559页

作者：陈玲玲苏州市立医院、南京医科大学附属苏州医院皮肤科江苏苏州215002

阿帕他胺(apalutamide)是一种新型口服非甾体抗雄激素药物,可直接与雄激素受体(androgen receptor,AR)的配体结合域结合抑制雄激素与AR的结合、AR核易位和AR介导的转录,进而诱导肿瘤细胞死亡[1]。

关键词：雄激素受体配体结合域非甾体抗雄激素不良事件肿瘤细胞死亡核易位胺

染料木黄酮通过影响雄激素受体途径抗前列腺良性增生研究

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染料木黄酮通过影响雄激素受体途径抗前列腺良性增生研究

白藜芦醇对帕金森病小鼠行为表现及对多巴胺能神经元NF-κB蛋白表达的影响

中国营养学会第十五届全国营养科学大会

作者：伏天雨朱彦锋周圆媛刘江石雯成都医学院

目的研究表明,染料木黄酮具有抗前列腺癌的作用,但其对前列腺良性增生的作用及机制尚未明确。本文探讨染料木黄酮对前列腺良性增生大鼠的影响及作用机理,以及染料木黄酮通过影响雄激素受体途径来对良性前列腺增生(Benign Prostate Hyper... 详细信息

目的研究表明,染料木黄酮具有抗前列腺癌的作用,但其对前列腺良性增生的作用及机制尚未明确。本文探讨染料木黄酮对前列腺良性增生大鼠的影响及作用机理,以及染料木黄酮通过影响雄激素受体途径来对良性前列腺增生(Benign Prostate Hyperplasia,BPH)的作用机制,为植物化学物防治去势抵抗前列腺癌(castrate-resistant prostate cancer, CRPC)提供理论依据。方法动物实验:建立睾酮诱导的前列腺增生大鼠模型,将SD大鼠均于皮下注射丙酸睾酮5 mg/(kg·d),造模4周后,随机分为对照组和实验组,实验组开始灌胃染料木黄酮,剂量为100mg/(kg·d),4周后同时处死对照组及实验组,观察测量其前列腺湿质量并计算脏器系数,通过光镜观察其形态细胞结构变化。免疫组化法检测前列腺增生组织间质及上皮细胞中细胞增殖抗原(PCNA)的表达。体外实验:以睾酮诱导的前列腺上皮细胞PWR-1E、RWPE-1、BPH-1为细胞模型,经染料木黄酮干预后,MTT法检测PWR-1E、RWPE-1、BPH-1细胞增殖能力。通过Western blotting检测和实时荧光PCR检测PWR-1E、RWPE-1、BPH-1细胞中雄激素受体(AR)、ARD1及HSP90的蛋白表达;AR在细胞核及细胞质的分布;AR下游相关基因蛋白TMPRSS2、KLK3、UGT2B15的蛋白表达;结果动物实验显示实验组大鼠的前列腺湿质量、脏器系数显著低于对照组(P核易位;下调AR信号下游基因;AR下游基因TMPRSS2、KLK3表达减少,UGT2B15表达增加。结论染料木黄酮具有抑制前列腺良性增生的作用,其机制与影响雄激素-AR途径,阻滞AR核易位,抑制AR信号通路的激活有关。

关键词：前列腺良性增生染料木黄酮雄激素受体途径核易位雄激素受体

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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山东医药 2015年第28期55卷 32-33页

作者：徐芳枣庄科技职业学院山东滕州277599

目的探讨白藜芦醇对帕金森病(PD)小鼠行为表现及对多巴胺(DA)能神经元核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 1体内实验:50只雌性褐鼠随机均分为五组,1组模仿卵巢切除术行假手术;2组行双侧卵巢切除术;3组手术同2组,术后1周腹腔注... 详细信息

目的探讨白藜芦醇对帕金森病(PD)小鼠行为表现及对多巴胺(DA)能神经元核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 1体内实验:50只雌性褐鼠随机均分为五组,1组模仿卵巢切除术行假手术;2组行双侧卵巢切除术;3组手术同2组,术后1周腹腔注射生理盐水连续4 d,腹腔注射MPTP连续7 d;4组手术同2组,术后1周腹腔注射白藜芦醇连续4 d,腹腔注射MPTP连续7 d;5组手术同2组,术后1周腹腔注射雌激素连续4 d,腹腔注射MPTP连续7 d;比较各组爬杆实验得分。2体外实验:当体外培养的MES23.5 DA能细胞密度达到60%时,A组换用无血清培养基;B组换用加有MPP+的无血清培养基;C组较前两组提前30 min换用加有白藜芦醇的无血清培养基进行预处理,30 min后换用同时含有白藜芦醇和MPP+的无血清培养基。培养24 h后,采用Western blotting法检测三组细胞中NF-κB蛋白。结果 1、2、3、4、5组爬杆实验得分分别为(8.39±1.21)、(5.62±0.90)、(3.79±1.17)、(8.01±1.03)、(8.27±1.39)分;2、3组得分低于其他三组,P均核NF-κB蛋白表达量较A组增加约76%(P核NF-κB蛋白表达量较B组减少62%(P核易位有关。

关键词：帕金森病白藜芦醇核转录因子-κB 核易位小鼠

猪NF-κB p65/p50的克隆表达及其对PRRSV在Marc145细胞中增殖的影响研究

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猪NF-κB p65/p50的克隆表达及其对PRRSV在Marc145细胞中增殖的影...

作者：王潇娣四川农业大学

学位级别：硕士

细胞核因子-κB(NF-κB, p65/p50)信号通路在病毒感染与疾病发展过程中发挥重要作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,NF-κB活化异常可能是PRRSV感染导致免疫抑制的重要原因。为获得猪NF-κB p65、p50两亚基基因序... 详细信息

细胞核因子-κB(NF-κB, p65/p50)信号通路在病毒感染与疾病发展过程中发挥重要作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,NF-κB活化异常可能是PRRSV感染导致免疫抑制的重要原因。为获得猪NF-κB p65、p50两亚基基因序列特征及探讨NF-λB表达异常是否与PRRSV感染导致的免疫抑制有一定的相关性。本试验通过NCBI GeneBank中猪核转录因子p50前体蛋白的基因序列(NM01048232)、p65(RelA)序列(NM001114281)设计特异性引物分别对NF-κB p65ORF区、成熟p50编码区及p50-RHD区进行克隆、序列鉴定、原核及真核表达、重组蛋白纯化和多克隆抗体制备;对PRRSV感染Marc145细胞NF-κB p65/p50mRNA转录时相、核易位(即活化程度)进行分析：并探讨NF-kB p65/p50原核及真核表达产物对PRRSV复制的影响,结果如下： 1.猪核转录因子NF-κB p65/p50两亚基基因的克隆及序列鉴定采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增到NF-κB p65ORF区和成熟p50编码区、p50-RHD区,克隆至pMD19T simple vector,对阳性克隆进行序列测定,并进行相关生物信息学分析。序列分析结果表明：所扩增猪NF-κB p65亚基ORF长1662bp,编码553aa,p50成熟蛋白编码区长1653bp,编码551aa;p50-RHD长777bp,编码259aa。猪p65、p50核苷酸序列与不同动物的p65、p50核苷酸序列相似性较高;p65大部分位于细胞核(56.5%)内,p50绝大部分存在于细胞质中(78.3%),均无信号肽及跨膜区。 2.猪核转录因子NF-κB p65/p50两亚基基因的原核表达及多克隆抗体的制备将扩增出P65ORF区、成熟p50编码区克隆至pET21a(+)中,p50-RHD克隆至pET32a(+)中,转化至Rostta感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-Blot对表达产物进行鉴定;将纯化复性蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并用琼脂扩散试验对多克隆抗体进行检测。结果表明成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70KD的p65／p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体及大量以包涵体形式表达Mr约为45KD的p50-RHD-pET32a(+)原核表达载体;Western-Blot显示p50、p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应;所制备的兔抗p65、兔抗p50-RHD、兔抗p50血清琼扩抗体滴度分别为1：8、1：16、1：32。 3. PRRSV感染Marc145细胞NF-κB p65/p50两亚基基因mRNA转录时相及核易位的影响分析运用实时荧光定量PCR技术对PRRSV感染Marc-145不同时期NF-κB p50、p65mRNA的转录水平变化进行定量分析,并提取不同感染时期Marc-145细胞核蛋白,利用免疫印迹法检测细胞核内具有活性的p50、p65水平变化。荧光定量结果表明：Marc-145感染PRRSV8-12h,p50、p65转录水平急剧下调,12-120h p50、p65mRNA含量一直维持在较低水平,与接毒前及对照组同时期的转录水平相比,差异极显著(P核内均未检测到p50的表达;感染12h,细胞核内p65表达下调,48-96h未检测到p65的表达。 4.猪NF-κB p65/p50亚基的原核表达产物对PRRSV增殖的影响将NF-κBp65/p50原核表达产物纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;利用p65/p50最佳浓度研究其对PRRSV体外感染的增殖活力,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P核表达载体转染Marc145对PRRSV增殖的影响构建猪NF-κB p50、p65亚基基因的真核表达载体,将两重组质粒单独及同时转染至Marc145中进行表达,测定其对PRRSV增殖的影响。转染p50+p65、p65真核表达质粒都会促进PRRSV感染Marc145CPE出现,加速CPE进程,最终导致PRRSV增殖受到抑制,极大降低病毒滴度水平。其中,p50+p65的抑制作用更强。转染p50真核质粒会推迟PRRSV感染Marc145CPE出现,减缓PRR

关键词：猪核转录因子-κappaB p65/p50异源二聚体克隆原核表达真核表达转录时相核易位猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制