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乙肝病毒preS抗原决定簇与核心抗原的融合表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第4期28卷 380-388页

作者：李迎春徐谐陈作义江垣李光地中国科学院上海生物化学研究所

将乙肝病毒表面抗原的ｐｒｅＳ抗原决定簇片段与核心抗原进行融合，分别构建了在核心抗原中间对应第７５～８３位氨基酸之间的融合及在核心抗原羧端对应第１５６位氨基酸处的融合，并在ｔａｃ启动子的控制下于大肠杆菌中表达。表达产物... 详细信息

将乙肝病毒表面抗原的ｐｒｅＳ抗原决定簇片段与核心抗原进行融合，分别构建了在核心抗原中间对应第７５～８３位氨基酸之间的融合及在核心抗原羧端对应第１５６位氨基酸处的融合，并在ｔａｃ启动子的控制下于大肠杆菌中表达。表达产物经ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分析，表明融合蛋白均被表达，其单体分子量大小与推算值一致．电镜观察和ＣｓＣｌ密度梯度超离心测定都表明融合蛋白能形成颗粒，其密度略小于天然的ＨＢｃ颗粒。初步纯化的融合蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠；能产生高滴度的抗－ｐｒｅＳ１抗体，表明ＰｒｅＳｌ（２１～４７）在核心抗原ｅｌｌｏｏｐ区的融合能大大提高其免疫原性．

关键词：乙肝病毒 preS抗原决定簇核心抗原融合蛋白

乙型肝炎病毒前S1抗原(1-42)与核心抗原(1-144)在大肠杆菌中融合表达

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中国医学科学院学报 2000年第3期22卷 227-231页

作者：赵阳青詹美云中国预防医学科学院病毒学研究所肝炎室北京100052

目的　希望通过融合表达乙型肝炎病毒前 S1抗原 (pre S1Ag) (1- 42 )及核心抗原 (HBc Ag) (1- 144 )提高预防性疫苗的细胞免疫活性 ,为开发 HBV治疗性疫苗探索一条有效途径。方法　采用 PCR法获得在 HBc Ag(1-144 )基因后连接有 pre S1A... 详细信息

目的　希望通过融合表达乙型肝炎病毒前 S1抗原 (pre S1Ag) (1- 42 )及核心抗原 (HBc Ag) (1- 144 )提高预防性疫苗的细胞免疫活性 ,为开发 HBV治疗性疫苗探索一条有效途径。方法　采用 PCR法获得在 HBc Ag(1-144 )基因后连接有 pre S1Ag(1- 42 )基因的融合基因 ,然后将其插入表达载体 p ET- 11d中 ,在大肠杆菌中进行表达。结果　获得了 HBc Ag(1- 144 )与 pre S1Ag(1- 42 )融合蛋白的表达产物 ,SDS- PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 2 0 0 0 0左右 ,约占细菌总蛋白的 2 0 %。经 Western- blot验证 ,表达产物能分别特异地与核心抗体及前 S1抗体结合。经 DNA序列测定 ,pre S1Ag(1- 42 )基因正确地融合在 HBc Ag(1- 144 )基因之后。诱导表达的菌体的裂解液经免疫电镜观察 ,可见到成堆聚集的典型 HBc Ag颗粒。结论　该融合蛋白的表达将为研究其诱导细胞免疫和体液免疫反应的能力 ,以及为今后治疗慢性乙型肝炎的 T细胞疫苗的研制提供有用的资料。

关键词：乙型肝炎病毒前S1抗原核心抗原大肠杆菌表达

乙型肝炎病毒核心抗原基因疫苗对小鼠的体液和细胞免疫原性观察

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中华医学杂志 1999年第6期79卷 456-459页

作者：黄祖瑚卢山刘宁王世霞李军唐保元南京医科大学第一附属医院传染病科美国马萨诸塞大学医学中心

目的观察不同品系小鼠（Ｈ２ｂ，Ｈ２ｄ）经乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）基因疫苗免疫后特异性辅助性Ｔ细胞反应类型和特异性细胞毒性Ｔ细胞活性。方法Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法鉴定该基因疫苗的体外表达产物；基因枪法和肌... 详细信息

目的观察不同品系小鼠（Ｈ２ｂ，Ｈ２ｄ）经乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）基因疫苗免疫后特异性辅助性Ｔ细胞反应类型和特异性细胞毒性Ｔ细胞活性。方法Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法鉴定该基因疫苗的体外表达产物；基因枪法和肌内注射法接种该基因疫苗；间接ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清抗ＨＢｃＩｇＧ亚类（ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ）水平；５１铬释放法测定小鼠脾细胞ＨＢｃＡｇ特异性细胞毒性Ｔ细胞活性。结果两种品系小鼠经不同方法接种该基因疫苗后均产生高滴度血清抗ＨＢｃ（１∶１０９３５０～１∶３２８０５０）；抗ＨＢｃＩｇＧ亚类以ＩｇＧ２ａ占优，肌内注射法接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后尤然。各组小鼠的ＨＢｃＡｇ特异性细胞毒性Ｔ细胞杀伤活性均达５０％以上。结论该基因疫苗具有良好的体液免疫和细胞免疫原性，值得进一步探索其临床应用前景。

关键词：乙型肝炎核心抗原基因疫苗疫苗

HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 28-31页

作者：侯俊貌盼勇洪世雯胡燕杨健洋沈宏辉朱雷解放军第三○二医院病毒研究室北京100039

目的　在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法　利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌... 详细信息

目的　在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法　利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果　PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论　成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达。

关键词： HIV 核心抗原高效表达纯化特异性活性原核系统表达载体酶切外源基因表达

人转化生长因子β1抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原融合肽苗的构建与表达

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 582-585页

作者：郭永红罗金燕郝志明王全颖杨广笑西安交通大学第二医院传染科 710004 西安交通大学第二医院消化科 710004 西安华广生物工程公司

目的原核表达、纯化人转化生长因子β1(TGFβ1)抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的基因工程融合肽苗,并测定其抗原性。方法利用聚合酶链反应(PCR)法获得人TGFβ1抗原决定簇成熟编码区编码79-108位氨基酸的32肽基因片断,将其嵌合于HB... 详细信息

目的原核表达、纯化人转化生长因子β1(TGFβ1)抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的基因工程融合肽苗,并测定其抗原性。方法利用聚合酶链反应(PCR)法获得人TGFβ1抗原决定簇成熟编码区编码79-108位氨基酸的32肽基因片断,将其嵌合于HBcAg主要免疫优势区,构建符合开放读码框要求的重组嵌合表达质粒pET28a/HBcAg1-71-TGFβ132-HBcAg89-144,在大肠杆菌BL-21(DE3) 中表达,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸亲和层析法纯化蛋白。电镜观察,酶联免疫吸附法及western blot检测融合蛋白的TGF β1和HBcAg抗原性。结果原核表达融合蛋白相对分子量为2.46×104,与理论预测一致,能形成颗粒,较天然的HBcAg颗粒大;具有TGFβ1抗原性而无HBcAg抗原性。结论构建的pET28a/ CTC融合蛋白可诱导产生抗TGFβ1抗体,为进一步动物实验及阻断TGFβ1抗纤维化治疗奠定基础。

关键词：人转化生长因子β1 抗原决定簇乙型肝炎核心抗原肽苗基因表达 HBcAg

基因工程表达的乙型肝炎病毒核心抗原转变为e抗原的研究

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病毒学报 1992年第1期8卷 93-98页

作者：苏丽娅詹美云中国预防医学科学院病毒学研究所

乙型肝炎病毒核心抗原及e抗原均为乙型肝炎病毒核衣壳的重要组成部分。自从发现病毒核心颗粒中存在着e抗原之后,它们之间的关系一直是人们研究的课题。有些报道认为,e抗原是核心抗原的组成成份。

关键词：乙肝病毒核心抗原 e抗原

前S1蛋白与病毒DNA和核心抗原对乙型肝炎病毒复制诊断的对比

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中华肝脏病杂志 2004年第3期12卷 134-136页

作者：李琴孙桂珍魏玉香闵福援丛玉隆欧晓娟王宝恩首都医科大学附属北京友谊医院肝病研究中心北京100050 北京佑安医院临床检验科北京解放军总医院临床检验科

目的分析前S1(Pre-S1)蛋白在诊断慢性乙型病毒性肝炎病毒复制中的作用。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者共104例,均经肝活组织检查证实。检测其Pre S1蛋白,HBV标志物与HBV DNA。结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性者29例,HBV DNA与Pre-S... 详细信息

目的分析前S1(Pre-S1)蛋白在诊断慢性乙型病毒性肝炎病毒复制中的作用。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者共104例,均经肝活组织检查证实。检测其Pre S1蛋白,HBV标志物与HBV DNA。结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性者29例,HBV DNA与Pre-S1蛋白的检出率均达96.5％,这组患者存在病毒的高复制。HBsAg、抗-HBe和抗-HBc阳性者65例,HBV DNA与Pre-S1蛋白的检出率分别为81.5％和72.3％;HBsAg和抗-HBc阳性者8例,HBV DNA与Pre-S1蛋白的检出率分别为87.5％、75.0％,说明部分HBeAg阴性而抗-HBe阳性/阴性的患者仍存在着病毒复制。以HBV DNA定量>103拷贝/ml为诊断标准,HBV DNA阳性患者HBeAg、Pre-S1蛋白的检出率分别为31.5％(28/89)、80.9％(72/89);两者与HBV DNA的总符合率分别为40.0％(42/104)、82.0％(85/104)。HBV DNA与HBeAg检出率差异有显著性(x2=53.397,P<0.001);HBV DNA与Pre-S1蛋白检出率差异无显著性。结论Pre-S1蛋白较HBeAg更敏感的反映了HBV复制的情况。

关键词：前S1蛋白病毒DNA 核心抗原乙型肝炎病毒病毒复制诊断检测

乙型肝炎病毒前S2抗原决定簇（HBVPreS2epitope）与乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）的基因融合与表达

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病毒学报 1994年第3期10卷 221-228页

作者：朱运峰石成华军事医学科学院生物工程研究所

乙肝前Ｓ２（ＨＢＶＰｒｅＳ２）肽段由５５个氨基酸组成，其Ｎ端肽段含Ｔｈ和Ｂ细胞抗原决定簇。我们将化学合成的ＰｒｅＳ２ｅｐｉｔｏｐｅ（１２０－１４５）基因与ＨＢｃＡｇ基因不同位点进行融合，融合基因在大肠杆菌中获得表达，... 详细信息

乙肝前Ｓ２（ＨＢＶＰｒｅＳ２）肽段由５５个氨基酸组成，其Ｎ端肽段含Ｔｈ和Ｂ细胞抗原决定簇。我们将化学合成的ＰｒｅＳ２ｅｐｉｔｏｐｅ（１２０－１４５）基因与ＨＢｃＡｇ基因不同位点进行融合，融合基因在大肠杆菌中获得表达，并对融合蛋白进行了纯化。经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验表明，融合蛋白具有ＰｒｅＳ２和ＨＢｃＡｇ两者的抗原性。此外，研究还表明，强启动子能使表达水平有一定提高。

关键词：核心抗原乙型肝炎病毒前S2 抗原

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乙型肝炎病毒核心抗原与原发性肝癌

中国肿瘤临床 1995年第10期22卷 753-754页

作者：周佳彦王崇国吴珊莲南京军区肝病研究中心

乙型肝炎病毒核心抗原与原发性肝癌周佳彦，王崇国，吴珊莲南京军区肝病研究中心（泉州市３６２０００）乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌（ＰＨＣ）密切相关，然而迄今对乙型肝炎病毒的确切致癌机制还不甚清楚。肝癌与乙型肝炎病毒表面抗... 详细信息

乙型肝炎病毒核心抗原与原发性肝癌周佳彦，王崇国，吴珊莲南京军区肝病研究中心（泉州市３６２０００）乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌（ＰＨＣ）密切相关，然而迄今对乙型肝炎病毒的确切致癌机制还不甚清楚。肝癌与乙型肝炎病毒表面抗原、ｅ抗原，抗体的关系研究报道较多...

关键词：肝肿瘤乙型肝炎病毒放射免疫分析核心抗原