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E1A激活基因阻遏子对抗肿瘤坏死因子α引起的血管内皮细胞炎性损伤

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中国动脉硬化杂志 2011年第9期19卷 721-726页

作者：段岩李杰陶杰游洋栾波刘少伟张效林闫承慧韩雅玲辽宁医学院辽宁省锦州市121001 沈阳军区总医院心血管病研究所辽宁省沈阳市110840

目的探讨E1A激活基因阻遏子表达对血管内皮细胞病理性炎症反应的生物学作用及机制。方法以E1A激活基因阻遏子过表达和基因沉默的人动脉血管内皮细胞为细胞模型,应用肿瘤坏死因子α刺激,ELISA检测白细胞介素6的变化,Rhodamin-Phalloidin... 详细信息

目的探讨E1A激活基因阻遏子表达对血管内皮细胞病理性炎症反应的生物学作用及机制。方法以E1A激活基因阻遏子过表达和基因沉默的人动脉血管内皮细胞为细胞模型,应用肿瘤坏死因子α刺激,ELISA检测白细胞介素6的变化,Rhodamin-Phalloidin检测肌动蛋白骨架F-actin分布,应用Transwell小室和Biotin标记的BSA检测单层内皮细胞通透性改变。进一步通过免疫荧光染色和Western blot检测细胞内核因子κB蛋白表达和转位情况。结果 ELISA检测发现,E1A激活基因阻遏子基因过表达显著抑制肿瘤坏死因子α刺激引起血管内皮细胞白细胞介素6的表达及分泌增加。同时,细胞F-actin应力纤维的形成和细胞单层通透性增加受到明显抑制。相反,E1A激活基因阻遏子基因沉默组白细胞介素6分泌较对照组明显增多。细胞F-actin应力纤维形成、细胞单层通透性显著增加。免疫荧光和Western blot分析证实,肿瘤坏死因子α刺激后,E1A激活基因阻遏子过表达组核因子κB出现短时的入核现象并迅速出核,对应蛋白出现相应的表达变化,而E1A激活基因阻遏子基因沉默组核因子κB表达持续增高且发生明显的入核转位现象。结论 E1A激活基因阻遏子可通过减少核因子κB的表达对抗肿瘤坏死因子α刺激引起的血管内皮细胞炎症反应和细胞通透性增加,对抗细胞病理性损伤发生。

关键词： E1A激活基因阻遏子血管内皮细胞炎性损伤核因子kb

梗阻性黄疸大鼠NF-κB的变化及其对免疫应答的影响

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世界华人消化杂志 2009年第7期17卷 662-666页

作者：成小林时开网徐锦李伟南京医科大学附属南京第一医院普外科江苏省南京市210006

目的:探讨梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)时NF-κB的变化及其对免疫应答的影响.方法:60只Wistar♂大鼠随机分成3组:假手术组(SHAM组)、梗阻性黄疸组(CBDL组)和梗阻性黄疸+NF-κB抑制剂脯氨酸二硫化氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC组).每... 详细信息

目的:探讨梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)时NF-κB的变化及其对免疫应答的影响.方法:60只Wistar♂大鼠随机分成3组:假手术组(SHAM组)、梗阻性黄疸组(CBDL组)和梗阻性黄疸+NF-κB抑制剂脯氨酸二硫化氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC组).每组术后7、14d分批(n=10)检测光镜下肝脏病理组织学,血清总胆红素(TB),谷丙转氨酶(ALT),内毒素(LPS)水平,肝组织促炎因子IL-1β、IL-6,抑炎因子IL-10以及NF-κB蛋白表达.结果:CBDL组7、14d大鼠均出现肝组织病理损伤,CBDL组较SHAM组血清TB、ALT、LPS增高(7d:140.14±10.17vs7.309±1.04,134.479±10.20vs35.79±3.76,189.33±11.05vs2.816±0.58;14d:194.608±12.73vs36.142±3.51,217.797±12.37vs7.321±1.03,292.816±14.53vs2.664±0.53,均P因子的表达,减轻肝损.后期(14d)作用不明显,其机制可能是通过LPS、IL-10等其他途径所致.

关键词：梗阻性黄疽核因子kb 脯氨酸二硫化氨基甲酸酯血清总胆红素谷丙转氨酶内毒索

重复经颅磁刺激对抑郁模型大鼠行为的改善作用及机制

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中华行为医学与脑科学杂志 2013年第9期22卷 769-772页

作者：刘高华陈冠婕陈怡环杨帆张瑞国彭正午谭庆荣第四军医大学西京医院心身科西安710032

目的观察重复经颅磁刺激（repetitivetranscranialmagneticstimulation，rTMS）对慢性不可预见性温和应激（chronicunpredictablemildstress，CUMS）抑郁模型大鼠行为的改善作用及对脑源性神经营养因子（brainderivedbeurotrophicfactor，BDNF），白介素-1β（IL-1β），核因子kb（nuclearfactor—kb，NF—kb）表达的影响。方法32只成年雄性SD大鼠随机分为Control组、Control＋rTMS组、CUMS组、CUMS＋rTMS组。CUMS＋rTMS组接受为期21d的造模处理，随后接受连续7d的rTMS干预；CUMS组大鼠也进行21d的造模处理，但是接受连续7d的rTMS假刺激；Control和Control＋rTMS组正常饲养21d后，接受相应的rTMS假刺激或真刺激，为期7d。各组在处理结束后采用糖水偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验检测大鼠抑郁样行为表现，并且在行为学实验完成后处死大鼠，以蛋白质印迹法（Westernblot）检测海马BDNF、***的表达水平，以酶联免疫吸附法（ELISA）检测海马IL-1β的含量。结果***对CUMS大鼠抑郁样行为的影响：糖水偏好实验中，CUMS组大鼠的糖水偏好系数（0．67±0．06）较Control组（0．91±0．04）明显减小，而CUMS＋rTMS组大鼠的糖水偏好系数（0．83±0．08）增加；强迫游泳实验中，CUMS组大鼠的不动时间[（26．88±11．33）S]较Control组[（15．22±6．75）S]延长，而CUMS＋rTMS组大鼠不动时间[（18．41±6．95）s]缩短；旷场实验中，CUMS组大鼠的自发活动总距离[（849．17±769．01）cm]与进入旷场中心区次数[（7．42±5．68）次]均显著低于Control组[（6224．81±1403．20）cm，（22．86±3．72）次]，而CUMS＋rTMS组大鼠的自发活动总距离[（4105．574-1516．92）cm]与进入旷场中心区次数[（21．25±3．45）次]增多，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。Control组与Control＋rTMS组的上述行为学指标之间均差异无统计学意义。***对CUMS大鼠海马BDNF、NF—kb和IL-1β水平的影响：与Control组相比，CUMS组海马BDNF表达降低，而NF—kb的表达及IL-1β水平明显增高（均P〈0．05），而与CUMS组大鼠相比，CUMS＋rTMS组BDNF表达增高、NF—kb表达水平及IL-1β水平均降低（均P〈0．05）。Control组与Control＋rTMS组NF—kb、BDNF的表达情况及IL-1β的水平均差异均无统计学意义。结论rTMS干预能改善CUMS模型大鼠抑郁样行为，并且这种作用可能是通过上调海马BDNF的表达，降低NF—kb以及IL-1β水平实现的。

关键词：重复经颅磁刺激脑源性神经营养因子核因子kb 白介素-1 β 大鼠

肥育猪背最长肌NF-κB,IκBα和p94蛋白表达量与其剪切力的相关性研究

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沈阳农业大学学报 2012年第1期43卷 67-71页

作者：张勇朱宇旌邓科孙璀陶亮崔岩季文彦邵彩梅沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 辽宁禾丰牧业股份有限公司沈阳110164

研究饲粮不同蛋白水平对猪骨骼肌中NF-κB、IκBα和p94蛋白表达量的影响,并探讨其与剪切力的相关性。试验选用90头约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪(公母各半,公猪去势),随机分为3个处理组,每个处理组3个重复,每个重复10头,分别... 详细信息

研究饲粮不同蛋白水平对猪骨骼肌中NF-κB、IκBα和p94蛋白表达量的影响,并探讨其与剪切力的相关性。试验选用90头约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪(公母各半,公猪去势),随机分为3个处理组,每个处理组3个重复,每个重复10头,分别饲喂蛋白质水平为12%、16%和20%的饲粮,各饲粮能量及氨基酸模式相同,饲养58d后屠宰取样,用蛋白质免疫印迹法测定猪背最长肌中NF-κB、IκBα和p94在骨骼肌中的蛋白含量。结果表明:饲粮蛋白水平对猪骨骼肌中NF-κB蛋白含量影响不显著(p>0.05),但对IκBα和p94蛋白含量和肌肉剪切力影响显著(p<0.05),且随着饲粮蛋白水平升高,肌肉IκBα蛋白含量呈升高趋势,p94和NF-κB蛋白含量呈降低趋势,肌肉剪切力呈升高趋势。肌肉IκBα蛋白含量与剪切力呈正相关,p94蛋白含量与剪切力呈负相关,NF-κB蛋白含量与剪切力不相关。

关键词：肥育猪饲粮蛋白水平核因子kb 抑制蛋白kba p94 肌肉剪切力

病理性瘢痕中粘着斑激酶、磷酸化蛋白激酶B和核因子κB的表达

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病理性瘢痕中粘着斑激酶、磷酸化蛋白激酶B和核因子κB的表达

作者：刘玉丽郑州大学

学位级别：硕士

病理性瘢痕(pathologic scar，PS)是真皮损伤后组织异常修复的结果。它发生在创伤、感染、烧伤后，以成纤维细胞(fibroblast，FBs)的过度增生和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的过度沉积为特征。临床表现为疼痛、骚痒、瘤样增... 详细信息

病理性瘢痕(pathologic scar，PS)是真皮损伤后组织异常修复的结果。它发生在创伤、感染、烧伤后，以成纤维细胞(fibroblast，FBs)的过度增生和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的过度沉积为特征。临床表现为疼痛、骚痒、瘤样增生并伴有不同程度的功能障碍。病理性瘢痕的病因和发病机制尚未明了，目前尚无行之有效的治疗方法。近年来，随着现代细胞生物学和分子生物学在瘢痕领域的深入研究，从而进一步认识了病理性瘢痕的生物学基础：即修复细胞(主要是FBs)的大量增殖与凋亡抑制、ECM中胶原合成与降解失衡、部分细胞因子的大量产生及其三者之间的密切关系。病理性瘢痕FBs的生物学行为是探索其发病机制的重点，信号传导通路激活使FBs大量增殖在纤维化疾病中的意义已引起关注。粘着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是一种非受体型的酪氨酸蛋白激酶，主要参与整合素介导的信号传导。整合素激活FAK后进入磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatedylinositol-3 kinase，PI3K／AKT)途径。蛋白激酶B(protein kinase B，Pkb)作为PI3K途径直接的靶蛋白，在该信号系统中起着关键作用，磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B，P-Pkb)为其活化形式，具有促进细胞增殖、对抗细胞调亡、调节细胞周期等多种生物学功能。核因子κB(nuclear factorκB，NF-κB)是一种具有多向性调节作用的转录因子，对细胞内许多基因的表达起着关键性的调控作用。为Pkb的下游信号蛋白，在外来信号刺激下，抑制性蛋白IκB降解，NF-κB从其复合物中解离，才能进入细胞核，与胞核内特定的DNA序列，发挥其转录调节作用。已有研究表明，病理性瘢痕的发生发展与FBs表面整合素的过度表达密切相关。PI3K是整合素介导的信号传导途径之一，整合素介导的PI3K途径在肿瘤发生发展中的作用已被证实。在肿瘤基质和病理性瘢痕中都伴有整合素的过度表达。研究PI3K途径在病理性瘢痕中的表达与病理性瘢痕发生发展的关系，将有助于揭示病理性瘢痕发生的机制，为预防和临床治疗提供依据。本课题利用免疫组化染色技术，探讨FAK、P-Pkb和NF-κB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮肤中的表达情况及其相互关系，旨在揭示PI3K途径与病理性瘢痕形成的关系，以便为预防和治疗病理性瘢痕提供新的思路。材料与方法选用整形外科手术切除的病理性瘢痕、非病理性瘢痕，取材部位为面、颈、胸或四肢等。正常皮肤取自皮肤移植供皮区的全厚皮肤，取材部位为四肢、腹部或背部等。所有标本均有详细的完整病历和随访记录、均未行放疗、激光或免疫等治疗并经病理证实。瘢痕疙瘩10例，增生性瘢痕30例为病理性瘢痕组，其中男22例，女18例，年龄2～65(20.8±9.1)岁，病程0.6～6.0(2.3±1.4)年;非病理性瘢痕20例，男10例，女10例，年龄3～50(21.5±11.3)岁，病程0.5～5.0(2.3±1.6)年;正常皮肤20例，男12例，女8例，年龄2～64(23.5±11.6)岁。本课题采用免疫组化染色技术(SP法)，分别检测PI3K途径中的FAK、p-Pkb和NFκB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮肤中的表达情况，并探讨在病理性瘢痕中FAK、p-Pkb和NF-κB表达的相互关系。所测数据用SPSS13.0软件包进行统计分析，以α=0.05为检验水准。结果***蛋白免疫组化结果病理性瘢痕中胶原结节、漩涡状结构中的大部分FBs胞浆阳性着色，阳性表达率为65.00％(26／40)。非病理性瘢痕组织中部分FBs胞浆阳性，着色较淡，阳性表达率为35.00％(7／20)。正常皮肤组织中FBs中FAK蛋白阳性表达率为25.00％(5／20)。病理性瘢痕与非病理性瘢痕、正常皮肤比较差异有统计学意义(P＜0.05)。非病理性瘢痕与正常皮肤比较差异无统计学意义(P＞0.05)。2．p-Pkb蛋白免疫组化结果病理性瘢痕中p-Pkb主要表达于FBs胞浆，阳性信号主要集中在胶原结节、漩涡状结构中，阳性表达率67.50％(27／40)。部分血管内皮细胞和皮肤基底层细胞胞浆亦呈阳性。在非病理性瘢痕的FBs胞浆中部分表达，阳性表达率40.00％(8／20)。正常皮肤中则大多缺乏表达，阳性表达率20.00％(4／20)。病理性瘢痕与非病理性瘢痕、正常皮肤比较差异有统计学意义(P＜

关键词：整合素粘着斑激酶磷酸化蛋白激酶B 核因子kb 病理性瘢痕

缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠TLR4和NF-κ B表达的影响

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缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠TLR4和NF-κ B表达的影响

作者：王鹏青岛大学

学位级别：硕士

第一部分大鼠局灶性脑缺血后处理动物模型的建立目的：建立大鼠局灶性脑缺血后处理（ischemic postconditioning, IP）模型,并确定IP对局灶性脑缺血再灌注（ischemic reperfusion,I/R）损伤发挥神经保护的最佳时间窗。方法： ... 详细信息

第一部分大鼠局灶性脑缺血后处理动物模型的建立目的：建立大鼠局灶性脑缺血后处理（ischemic postconditioning, IP）模型,并确定IP对局灶性脑缺血再灌注（ischemic reperfusion,I/R）损伤发挥神经保护的最佳时间窗。方法：将成年健康雄性SD大鼠60只,随机分为6组（n=10）,假手术组、缺血再灌注组（I/R）组、IP-15s组、IP-30s组、IP-45s组和IP-60s组。采用线栓法阻塞大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion, MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注模型。IP方法为在MCAO 2h后对每个亚组大鼠分别给与3个循环的15s/15s、30s/30s、45s/45s、60s/60s再灌注/缺血。所有动物于再灌注24h进行神经功能缺损评分,并测定脑梗死体积及细胞凋亡的变化。结果：用线栓法成功建立大鼠缺血再灌注模型。与I/R组相比,IP-15s组、IP-30s组、IP-45s组大鼠神经功能缺损评分明显降低（P＜0.05）,其中IP-15s神经功能缺损评分低于IP-30s、IP-45s（P＜0.05）。I/R组脑梗死体积及凋亡细胞计数显著增加,IP-15s组、IP-30s组、IP-45s组较I/R组显著降低,特别以IP-15s组明显（P＜0.05）。IP-60s组与I/R组无显著性差异（P＞0.05）。结论：改良的线栓法效果可靠,是制备MCAO再灌注的理想模型;缺血后处理能减轻局灶性的脑缺血再灌注损伤,其最佳时间窗为反复3次,15s/15s再灌注／缺血。第二部分缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠TLR4和NF-κB表达的影响目的：探讨缺血后处理（IP）对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4（TLR4）和核因子-κB（NF-κB）表达的影响,阐明TLR4-NF-κB信号通路在脑缺血后处理中的作用。方法：将成年健康雄性SD大鼠110只,随机分为假手术组（n=10）、缺血再灌注（I/R）组（n=50）和缺血后处理组（IP）（n=50）。后两组根据再灌注时间每组又分为6h、12h、24h、48h、72h五个亚组（n=10）。采用线栓法阻塞大脑中动脉（MACO）2h建立局灶脑缺血模型,后处理方法为大脑中动脉阻闭2h后持续再灌注前,行3个循环的15s/15s再灌注/缺血。。对各组进行神经功能缺损评分,TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TLR4和NF-κB蛋白的表达,原位杂交法检测TLR4和NF-κmRNA的表达。结果：（1）I/R组和IP组大鼠均可见神经功能缺损及缺血侧大脑半球梗死。与I/R组相比,IP组大鼠脑梗死体积明显减少（P＜0.05）,神经功能缺失评分明显改善（P＜0.05）。（2）I/R组TLR4蛋白及mRNA在再灌注6h开始升高,24h达高峰,之后逐渐下降。IP组TLR4蛋白及mRNA表达时间曲线与I/R组相一致,但与I/R组各相应亚组比较,IP组的TLR4蛋白及mRNA表达均明显降低（P＜0.05）。（3）NF-κB蛋白及mRNA在I/R组和IP组均与再灌注6h升高,24h达高峰后下降,与TLR4时间变化曲线相一致。与I/R组各相应亚组比较,TLR4蛋白及mRNA表达在IP组均明显降低（P＜0.05）。结论：（1）缺血再灌注可引起TLR4和NF-κB的表达。（2）IP能抑制缺血再灌注后TLR4和NF-κB的表达,减小缺血再灌注损伤,改善神经行为功能。

关键词：脑缺血缺血后处理细胞凋亡再灌注 Toll样受体4 核因子kb

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骨保护素

中国兽医杂志 2007年第2期43卷 71-72页

作者：马世波孙立婷韩璐韩博中国农业大学动物医学院北京海淀100094

骨保护素(osteoprotegerin,OPG)又称破骨细胞抑制因子(osteoclast inhibitory factor,OCIF),是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)受体超家族的新成员,即是核因子kb受体活化因子(receptoractivator of nuclear factor kappa B lig... 详细信息

关键词：骨保护素心血管疾病肿瘤坏死因子骨质疏松骨代谢病核因子kb 抑制因子破骨细胞

内脏脂肪素对人内皮祖细胞致炎作用及相关机制的研究

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内脏脂肪素对人内皮祖细胞致炎作用及相关机制的研究

作者：胡荣河北医科大学

学位级别：硕士

目的：内皮功能障碍和炎症是动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的始动环节。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是内皮细胞的前体细胞，参与内皮细胞的损伤修复。内脏脂肪素（Visfatin）能增加内皮细胞炎症因子细胞... 详细信息

目的：内皮功能障碍和炎症是动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的始动环节。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是内皮细胞的前体细胞，参与内皮细胞的损伤修复。内脏脂肪素（Visfatin）能增加内皮细胞炎症因子细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule1，ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule1，VCAM-1）的mRNA表达，但Visfatin是否能增加EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1的表达，进而损伤EPCs修复能力尚未可知。本研究采用外源性重组人Visfatin刺激EPCs，观察细胞表面ICAM-1和VCAM-1表达的变化，并用核因子kb（Nuclear factor kappa B，NF-kb）通道抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC）处理细胞，探讨外源性人Visfatin对EPCs的致炎作用及相关机制。方法： 1体外分离培养人内皮祖细胞取健康足月剖腹产妇新鲜脐带血，用等体积PBS缓冲液稀释，加入一定体积的人淋巴细胞分离液，室温2000rpm/min离心25分钟分离获得人单个核细胞（Mononuclear cells，MNCs），密度1×106/ml接种于纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）包被的培养瓶中，人EPCs专用培养基培养，37℃、5%CO2孵箱内培养，每天在倒置显微镜下观察细胞生长形态学变化，并记录，第3天换液，弃未贴壁细胞，第7天时传代。用流式细胞仪检测细胞表面CD34、CD133、CD309三阳性细胞，用激光共聚焦显微镜观察Dil标记乙酰化低密度脂蛋白（Dil-acLDL）和FITC标记荆豆凝集素（FITC-UEA-I）双染色的细胞。 2Visfatin刺激内皮祖细胞培养7-10天的细胞传代后铺6孔板，实验分为4组①Control（对照组）;②Visfatin（10ng/ml）③Visfatin（20ng/ml）④Visfatin（50ng/ml）。Visfatin孵育EPCs24小时后以反转录聚合酶链反应（Reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）检测各组细胞表面ICAM-1和VCAM-1mRNA的量，结果以荧光强度表达，48小时后用流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达量。 3吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对Visfatin刺激EPCs的作用培养7-10天的细胞传代后铺6孔板，实验分为4组①Control（对照组）;②Visfatin（50ng/ml）③PDTC组（100uM）④PV[PDTC（100uM）+Visfatin（50ng/ml）]。PDTC100uM预处理EPCs2小时后，Visfatin孵育EPCs24小时，RT-PCR检测各组ICAM-1和VCAM-1mRNA的量，48小时用流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达量。结果： 1人单个核细胞培养24-48小时后细胞呈圆形，多数悬浮在培养液中，3-4天后细胞逐渐贴壁，约40-50%贴壁细胞呈梭形，5-7天贴壁细胞出现细胞集落，10-14天细胞呈“铺路石”样外形，增殖能力强。 2培养7天时大部分细胞能够结合FITC-UEA-I，并吞噬Dil-acLDL，双荧光染色实验阳性。 3流式细胞仪检测培养7天EPCs表面CD34、CD133、CD309表达率分别为43.12%，36.03%和67.76%。 4Visfatin对EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1转录水平的影响：Visfatin刺激EPCs后ICAM-1和VCAM-1的mRNA的量增加，随着Visfatin浓度的增加，EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1mRNA的量随之增加,呈一定的量-效关系。 5Visfatin对EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平的影响：Visfatin刺激EPCs后流式细胞仪检测4组（0,10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml）细胞表面ICAM-1蛋白的表达量分别为18.25±3.77%，25.40±4.25%，38.88±4.02%和48.83±5.12%，有统计学差异（p<0.05）;VCAM-1蛋白的表达量分别为6.75±2.07%，10.65±2.33%，17.11±2.37%和24.82±3.19%，有统计学差异（p<0.05），均呈一定的量-效关系。 6PDTC对Visfatin刺激EPCs细胞表面ICAM-1和VCAM-1转录水平的影响：PV组与Visfatin（

关键词：内脏脂肪素内皮祖细胞核因子kb 细胞间黏附分子-1 血管细胞黏附分子-1

右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用及机制的研究

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右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用及机制的研究

作者：史琪清复旦大学

学位级别：硕士

目的：观察右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法：将大鼠随机分为6组,分别为正常对照组（NS,0.5 ml）、LPS模型组（LPS,4 mg/kg）、高、中、低剂量右旋美托咪定组（Dex 4.5 u g/kg、1.5μg/kg, 0.5μg/k... 详细信息

目的：观察右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法：将大鼠随机分为6组,分别为正常对照组（NS,0.5 ml）、LPS模型组（LPS,4 mg/kg）、高、中、低剂量右旋美托咪定组（Dex 4.5 u g/kg、1.5μg/kg, 0.5μg/kg）及育亨宾拮抗组（YHB,0. 1mg/kg）,每组8只。大鼠腹腔内注射1%戊巴比妥钠30 mg/kg后,将其固定,颈前正中切口行气管插管并保留自主呼吸,切开右侧股静脉插管用于静脉给药。各Dex组大鼠按上述设定剂量分别予Dex 0.5μg/kg、1.5μg/kg、4.5μg/kg。除NS组外,其余各组大鼠均予LPS 4 mg/kg（溶于NS 0.5 ml）;NS组注射生理盐水0.5 ml/kg;YHB组则另注育亨宾0.1 mg/kg。6h后处死大鼠,分离肺组织,记录其外观,并称重计算肺脏器系数（全肺重/体重）。取大鼠右下肺叶,记湿肺质量,置于80℃真空干燥仪干燥72 h,记干肺质量,计算湿／干重比值（W/D）。取大鼠右中肺叶,称重后用生理盐水制备成10%匀浆,收集上清液,通过Elisa法测定肿瘤坏死因子（TNF-a）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）炎症因子浓度。取大鼠右上肺叶,置于10%甲醛液中固定24 h,常规石蜡包埋,切片,苏木精-伊红（HE）染色,封片,光学显微镜下观察肺病理组织学变化。同时通过免疫组化法测定NF-κB蛋白的表达。取大鼠左肺叶,用RT-PCR法测定大鼠肺组织TLR4受体表达。结果：（1）大体观察各组大鼠肺组织,NS组肺组织表面光滑,呈淡粉红色,无充血水肿及梗死灶,触之弹性较好;LPS组大鼠肺组织呈现暗红色,肺包膜下明显充血水肿,可见广泛出血点,弹性较差;各Dex组大鼠可见肺组织表面色泽暗红,充血水肿,有散在出血点,但较LPS组少,且随Dex剂量的增加,肺损伤的程度有所减少。（2）与NS组相比,LPS组大鼠肺脏器系数、肺湿/干重比明显增高（P＜0.01）;与LPS组相比,高、中剂量Dex组的大鼠肺脏器系数和湿/干重比明显降低（P＜0.05或P＜0.01）：（3）与NS组相比,LPS组大鼠肺匀浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高,（P＜0.01）;与LPS组相比,高、中剂量Dex组大鼠肺匀浆炎症因子水平显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;YHB组大鼠肺匀浆炎症因子除TNF-a外,IL-1β和IL-6水平均有所下降（P＜0.05或P＜0.01）;与YHB组相比,高、中低剂量Dex组大鼠肺匀浆炎症因子水平显著下降（P＜0.01）。（4）光镜下可见LPS组大鼠肺组织结构明显被破坏,主要表现为肺泡内出血、肺间质水肿、肺泡萎陷以及肺组织内大量炎性细胞浸润。与LPS组相比,预先应用Dex各组大鼠肺组织的损伤程度减轻,表现为肺间隔轻度增宽、无明显出血、少量炎性细胞浸润,尤其高剂量组,减轻程度最为明显。（5）免疫组化结果显示,NS组大鼠气道黏膜上皮和肺间质中,仅见少量散在的NF-κB核阳性细胞,而LPS诱导急性肺损伤后,气道黏膜、肺间质、肺泡腔及血管内皮细胞中NF-κB核阳性的细胞明显增多,各Dex剂量治疗组随着剂量增加,NF-κB核阳性细胞较LPS组呈减少趋势。半定量结果显示,与LPS组相比,Dex高中剂量组NF-κB染色的灰度值呈不同程度减少,明显低于LPS组（P＜0.01）。（6） RT-PCR结果显示肺内TLR4 mRNA的表达,LPS组水平明显升高（P＜0.01）;与LPS组相比,高、中剂量Dex组mRNA水平显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;与YHB组相比,高Dex剂量组大鼠mRNA水平显著下降（P＜0.01）。结论：使用高、中剂量的Dex能使肺脏器系数、肺湿／干重比值下降,保护肺泡膜,减轻间质水肿及炎性细胞浸润、渗出,IL-1β、IL-6等炎性因子下调,NF-κB蛋白及TLR4 mRNA表达减少,减轻了肺部的炎症反应程度,具有肺保护作用。

关键词：右旋美托咪定大鼠急性肺损伤核因子kb Toll样受体4