检索结果-南通市图书馆

丝氨酸-精氨酸蛋白激酶对剪接因子调节作用的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织化学与细胞化学杂志 2002年第2期11卷 199-201,240页

作者：林雯刘朝王焕友付向东华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022 Division of Cellular and Molecular Medicine Department of MedicineUniversity of CaliforniaSanDiegoUSA

目的　研究丝氨酸 -精氨酸蛋白激酶 (Serine \arginineprotein -specifickinase,SRPK)对剪接子在哺乳动物细胞核内定位的调节作用。方法　转染SRPK1和SRPK2 的细胞系通过免疫荧光染色在显微镜下观察剪接因子在胞核内的定位。结果　在转... 详细信息

目的　研究丝氨酸 -精氨酸蛋白激酶 (Serine \arginineprotein -specifickinase,SRPK)对剪接子在哺乳动物细胞核内定位的调节作用。方法　转染SRPK1和SRPK2 的细胞系通过免疫荧光染色在显微镜下观察剪接因子在胞核内的定位。结果　在转染了SRPK1和SRPK2 的细胞中 ,SRPK1和SRPK2 的绿色荧光信号可见于胞浆及胞核中 ,剪接因子以核斑点的形式集中在未转染SRPK1和SRPK2 的细胞中 ,而弥散性分布于表达SRPK1和SRPK2 的细胞中。结论　SRPK家族蛋白激酶可调节剪接因子在核内的重新分布。

关键词：丝氨酸-精氨酸蛋白激酶剪接因子调节作用核内定位

Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌A549细胞DNA双链断裂中的作用及其机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌A549细胞DNA双链断裂中的作用及其机制...

作者：盛亚第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景:肺癌死亡率居常见恶性肿瘤的首位,放疗是局部晚期肺癌综合治疗的主要方法之一,但由于放疗过程中亚致死性和潜在致死性损伤修复所导致的放疗抵抗在很大程度上降低了肺癌放射治疗的敏感性,因此人们试图通过针对DNA损伤修复的靶... 详细信息

研究背景:肺癌死亡率居常见恶性肿瘤的首位,放疗是局部晚期肺癌综合治疗的主要方法之一,但由于放疗过程中亚致死性和潜在致死性损伤修复所导致的放疗抵抗在很大程度上降低了肺癌放射治疗的敏感性,因此人们试图通过针对DNA损伤修复的靶向治疗来抑制肿瘤细胞的损伤性修复。Nm23-H1作为肿瘤转移抑制基因,除具有核苷二磷酸激酶(NDPK)、组氨酸/丝氨酸激酶外,还具有3’-5’核酸外切酶活性。因此当前研究认为Nm23-H1还可能参与DNA损伤修复。我们前期研究及文献报道证实,Nm23-H1与DNA损伤修复中的碱基切除修复及核苷酸切除修复有关。我们同时还发现Nm23-H1在电离辐射(Ionizing Radiation IR)诱导下发生核转位,而电离辐射主要诱导DNA双链断裂(DSBs),因此其很有可能还参与了DSBs损伤修复,而这一机制目前还未见报道。研究目的:本研究拟采用肺癌A549细胞为研究对象,抑制或核过表达A549细胞的Nm23-H1蛋白,探讨Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌细胞DNA双链断裂中的作用及其机制研究。研究内容和方法:1.本研究首先构建Nm23-H1可诱导表达载体和带有核引导序列的Nm23-H1过表达载体并稳定转染肺癌A549细胞系;采用Western blot验证Nm23-H1蛋白的表达,免疫荧光实验检测核过表达细胞株的Nm23-H1蛋白亚细胞定位;并通过CCK-8实验检测Nm23-H1核过表达A549细胞株的细胞增殖情况。2.检测Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌细胞DNA双链断裂中的作用:采用单细胞凝胶电泳实验检测8Gy X线电离辐射后1h、2h、4h时DNA双链断裂损伤修复的情况;通过激光共聚焦检测γ-H2AX foci实验来观察8Gy X线电离辐射后DNA双链断裂损伤修复的情况。3.Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌细胞DNA双链断裂中的作用机制:通过Western blot检测8Gy X线电离辐射后ATM是否激活,并检测其下游分子通路的磷酸化水平变化;通过免疫共沉淀实验检测8Gy X线电离辐射Nm23-H1与DNA损伤修复相关蛋白结合情况。研究结果:1.Nm23-H1可诱导稳定敲低和Nm23-H1核过表达A549细胞株的成功构建:shNm23-H1可调控重组载体质粒pLentis-Bid-tetO-H1-NM23-SFFV-GTP酶切鉴定及测序结果测序均验证正确,Western blot验证该稳定转染细胞系构建成功;Nm23-H1(NME1)核内定位表达载体pLentis-CMV-NME1-IRES2-PURO酶切鉴定及测序结果测序均验证正确,Western blot验证未转染组的A549细胞Nm23-H1蛋白的定位及表达主要在胞浆,而转染组的Nm23-H1蛋白在胞浆和胞核均检测到,且主要以胞核表达为主。免疫荧光实验显示未转染组Nm23-H1蛋白主要位于A549细胞的胞浆,转染后其在细胞核表达明显增多,证明稳定转染细胞系构建成功。采用CCK-8法检测Nm23-H1核过表达组细胞的增殖,结果显示空载体组与空白对照组相比,二者无明显差异,Nm23-H1核过表达组增殖速度快于对照组和空载体组,与空载体组相比在72h、96 h和120 h差异有统计学意义。2.Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌细胞DNA双链断裂中的作用研究:(1)单细胞凝胶电泳实验结果显示,A549细胞经8Gy X线照射后,Nm23-H1敲低组与对照组相比,敲低组可以显著增加彗尾DNA含量,提示Nm23-H1可能参与DNA双链断裂损伤的修复;Nm23-H1核过表达组结果显示其在1h、2h、4h较对照组彗星尾矩显著减少,且具有显著性差异(P核过表达组的γ-H2AX foci阳性细胞数在2hr后消散较对照组更快(P核转位有关。3.Nm23-H1在电离辐射诱导肺癌细胞DNA双链断裂中的作用机制研究:(1)通过Western blot检测8Gy X线电离辐射后ATM是否激活,并检测其下游分子通路的磷酸化水平变化,结果显示Nm23-H1核过表达细胞组在8Gy X线照射后能使pS1981-ATM、pS15-p53、pT68-Chk2表达均增强,而Nm23-H1敲低组则使以上三种磷酸化蛋白少表达甚至不表达。说明Nm23-H1可以通过对ATM、p53、Chk2磷酸化的激活参与DSBs损伤修复。(2)通过免疫共沉淀实验,检测8Gy X线电离辐射Nm23

关键词： Nm23-H1 核内定位 DSBs修复肺癌电离辐射

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

血管形成的分子机制

解剖科学进展 1997年第3期3卷 13-16页

作者：姚忠祥蔡文琴第三军医大学基础部组织学与胚胎学教研室

血管形成因子的核内定位对血管形成具有重要的生理和病理意义，它们主动运输到核内需要有合适的核内定位信号（ＮＬＳ），ＮＬＳ的典型结构是一段短的特殊序列，它包含有较多的碱性氨基酸，ＮＬＳ是蛋白质到达核内目标的必要条件。本文... 详细信息

血管形成因子的核内定位对血管形成具有重要的生理和病理意义，它们主动运输到核内需要有合适的核内定位信号（ＮＬＳ），ＮＬＳ的典型结构是一段短的特殊序列，它包含有较多的碱性氨基酸，ＮＬＳ是蛋白质到达核内目标的必要条件。本文将对血管内皮细胞中血管形成因子的核内易位机制及外源性血管形成因子的核内定位对血管形成的作用进行介绍。

关键词：血管形成因子血管形成素核内定位神经生长因子碱性氨基酸外源性核仁蛋白蛋白质角膜内皮细胞酸性成纤维细胞生长因子

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

核内肌动蛋白的研究进展

东北师大学报（自然科学版） 2001年第3期33卷 96-100页

作者：陈婷黄百渠东北师范大学遗传与细胞研究所吉林长春130024

肌动蛋白是细胞质中的一种重要的胞质蛋白 ,承担多种细胞质功能 .近年的研究工作表明在细胞核中存在肌动蛋白 ,而且 ,肌动蛋白还参与了核内多种生理活动 ,如DNA的转录、RNA的转运等 .

关键词：核内肌动蛋白核内定位肌动蛋白结合蛋白肌肉细胞