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日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

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中国人兽共患病杂志 2004年第6期20卷 492-494,499页

作者：董惠芬彭延蒋明森明珍平钟沁萍武汉大学医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室武汉430071

目的通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法联合法培养... 详细信息

目的通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;

关键词：日本血吸虫细胞培养核仁组织区相关嗜银蛋白 β-巯基乙醇

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响

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中国地方病学杂志 2006年第1期25卷 50-53页

作者：陈喜珪易同寅明珍平钟沁萍蒋明森董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室咸宁学院医学院430071 咸宁学院医学院

目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用。方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞... 详细信息

目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用。方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中。接种后第3天,随机分为实验组和对照组。将实验组细胞用无血清培养基配制的终浓度为75μmol/L的Spd处理48h,对照组细胞则用不含Spd的无血清培养基处理,时间相同;PBS清洗3次后换用常规培养基继续培养。于第7、14、21、28、35天分别对培养细胞进行AgNORs染色。使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数及平均吸光值,并作统计分析。结果经Spd处理,各实验组培养细胞AgNORs着色明显深于对照组;但随着培养时间的延长,实验组与对照组细胞着色均逐渐变浅。各实验组细胞AgNORs颗粒数目与平均吸光值高于对照组,二者比较差异有统计学意义(u7=50.95、43.78;u14=55.23、43.54;u21=36.65、32.25;u28=31.6、32.95;u35=28.86、9.54;P0.05),其余差异都有统计学意义(P<0.01)。结论Spd具有促进日本血吸虫培养细胞增殖的能力,每周用Spd处理培养细胞1次,能更大限度地促进血吸虫培养细胞的生长。

关键词：亚精胺血吸虫,日本细胞,培养的核仁组织区相关嗜银蛋白

严重急性呼吸综合征患者外周血T淋巴细胞核仁组织区相关嗜银蛋白表达活性变化的初步分析

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严重急性呼吸综合征患者外周血T淋巴细胞核仁组织区相关嗜银蛋白...

雄虫抽提物对日本血吸虫卵黄培养细胞最适浓度的筛选

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：费书颖王萍于雪莹中日友好医院检验科

目的研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者外周血T淋巴细胞核仁组织区相关嗜银蛋白表达活性(Ag-NORs)的变化。方法用KL型肿瘤免疫图像分析仪检测T淋巴细胞Ag-NORs;用EPICS-XL流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果与正常对照相比,SARS患者外周... 详细信息

目的研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者外周血T淋巴细胞核仁组织区相关嗜银蛋白表达活性(Ag-NORs)的变化。方法用KL型肿瘤免疫图像分析仪检测T淋巴细胞Ag-NORs;用EPICS-XL流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果与正常对照相比,SARS患者外周血T淋巴细胞百分数及其Ag-NORs表达活性均明显减低(P<0.05),但减低的程度与疾病严重程度无关;不同性别、年龄组SARS患者的外周血T淋巴细胞Ag-NORs表达活性无显著差异。结论SARS患者体内细胞免疫功能明显减低。Ag-NORs的检测可以客观的反映机体T淋巴细胞的功能,对SARS患者病情观察及预后判断有重要意义。

关键词：严重急性呼吸综合征核仁组织区相关嗜银蛋白 T淋巴细胞功能

来源： cnki会议评论

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中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 482-486页

作者：李俊琳蒋明森钟沁萍明珍平董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学血吸虫病教学研究室 430071

目的筛选雄虫抽提物对日本血吸虫卵黄培养细胞影响的最适作用浓度。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体，无菌处理后分离雌雄虫体。将雄虫匀浆，反复冻融3次，离心取上清液，考马斯亮蓝法测定蛋白后置于-20℃下保存备用。切下雌... 详细信息

目的筛选雄虫抽提物对日本血吸虫卵黄培养细胞影响的最适作用浓度。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体，无菌处理后分离雌雄虫体。将雄虫匀浆，反复冻融3次，离心取上清液，考马斯亮蓝法测定蛋白后置于-20℃下保存备用。切下雌虫卵黄腺段虫体，冷消化法制备细胞悬液，调整细胞数为1×10^9／L后，将卵黄细胞接种于小盖玻片上，RPMI-1640含20％小牛血清培养，根据加入不同质量浓度雄虫抽提物分为6组（0、10、50、100、150、200mg／L组）。培养第7天，以核仁组织区相关嗜银蛋白（argyrophilic nucleolar organizer region associated proteins，AgNORs）及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）为评价指标，对卵黄细胞进行AgNORs及LDH染色，Olympus-BH2显微镜观察，输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的灰度值。结果随着雄虫抽提物质量浓度的增加，培养细胞的AgNORs与LDH着色均逐渐加深，至100mg／L时最深,随后又逐渐变浅。图像分析显示，雄虫抽提物处理的各组细胞AgNORs及LDH均明显高于对照组（q10=14．2189、q50=18．3358、q100=35．6491、q150=13．1849、q200=13．8604，P＜0．01；g10=10．3377、q50=11．7532、q100=23．1883、q150=10．2792、q200=9．3052，P＜0．01）。雄虫抽提物100mg／L组与其他各组比较，AgNORs及LDH明显升高（q100=21．4302、q50=17．3132、q150=22．4642、q200=21．7887，P＜0．01；g10=12．8506、q50=11．4351、q150=12．8896、q200=13．8831，P＜0．01）。结论雄虫抽提物可显著提高日本血吸虫卵黄细胞的增殖能力与代谢活性，其作用的最适质量浓度为100mg/L。

关键词：雄虫抽提物血吸虫日本卵黄细胞核仁组织区相关嗜银蛋白乳酸脱氢酶

条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞LDH及AgNORs的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2010年第6期22卷 552-556,I0004页

作者：罗超明珍平钟沁萍叶青蒋明森董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071 咸宁学院基础医学院

目的以乳酸脱氢酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响。方法灌注法获取21d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小... 详细信息

目的以乳酸脱氢酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响。方法灌注法获取21d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小盖玻片上的血吸虫细胞随机分为对照(0h)组和24、48、72h3个实验组共4组。对照组用常规培养基即RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基分别与培养24、48、72h的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1∶1的混合液。培养第7天,对培养细胞进行LDH及AgNORs染色;每组随机选取300个LDH染色细胞、50个AgNORs染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的吸光度(A)值,并作统计分析。结果日本血吸虫童虫细胞在不同条件培养基作用下,其LDH及AgNORs着色均比对照组深,其中72h组细胞着色最深,其次是48h组,再是24h组,对照组细胞着色最浅,条件培养基培养的各组细胞,LDH含量及AgNORsA值显著大于对照组细胞(q24=8.5287,q48=15.4253,q72=27.6207,P均<0.01;q24=13.5690,q48=18.7288,q72=27.0356,P均<0.01)。72h的条件培养基作用日本血吸虫童虫细胞后,培养细胞的LDH含量及AgNORsA值明显较对照组高(q0/72=27.6207,P<0.01;q0/72=27.0356,P<0.01),亦高于其他组(q24/72=19.0919,q48/72=11.8426,P均<0.01;q24/72=13.5690,q48/72=18.7288,P均<0.01)。结论条件培养基可明显增强日本血吸虫童虫培养细胞LDH的活性及增加AgNORs的含量,且72h的条件培养基对童虫培养细胞的影响最大。

关键词：日本血吸虫条件培养基童虫细胞乳酸脱氢酶核仁组织区相关嗜银蛋白

条件培养基对日本血吸虫卵黄培养细胞Ag-NORs的影响

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湖北科技学院学报（医学版） 2012年第6期26卷 461-464页

作者：罗超陈喜珪赵桂花湖北科技学院基础医学院湖北咸宁437100

目的以核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫卵黄培养细胞的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,雌雄分离后冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小盖玻片... 详细信息

目的以核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫卵黄培养细胞的影响。方法灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,雌雄分离后冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小盖玻片上的血吸虫卵黄细胞随机分为对照组和实验组2组。对照组用常规培养基即RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基与培养的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1∶1的混合液。在培养的第7d、14d、21d、28d、35d时,定时对各组卵黄培养细胞进行Ag-NORs染色,光镜下观察、拍照,同时随机选取50个左右染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定Ag-NORs光密度值,并做统计分析。结果培养第1～5周,实验组细胞Ag-NORs均深于对照组细胞;随着培养时间的延长,两组细胞核内着色颗粒均逐渐减少;两组培养细胞的Ag-NORs含量均逐渐降低,对照组下降较快,实验组下降较缓。相同培养时间比较,实验组培养细胞的Ag-NORs含量均显著高于对照组(P0.05)无显著性差异外,其余各组差异均显著(P0.05),其余各组差异均显著。结论条件培养基不仅可促进卵黄培养细胞的分裂增殖,而且能保持卵黄细胞在培养过程中的分裂增殖活性。

关键词：日本血吸虫条件培养基卵黄细胞核仁组织区相关嗜银蛋白