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核仁磷酸蛋白在原发性肝癌中的表达水平及临床意义

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吉林医学 2022年第9期43卷 2475-2480页

作者：周君侯佳影王丽萍于文清周雪刘清华石河子大学医学院第一附属医院肿瘤内科新疆石河子832008 新疆医科大学第一附属医院昌吉分院新疆昌吉831100 重庆市綦江区人民医院感染科重庆401420 德阳市人民医院肿瘤科四川德阳618000

目的:检测核仁磷酸蛋白(NPM)在健康体检者(HE)、慢性乙肝(CHB)、肝硬化(LC)及原发性肝癌(PHC)患者血浆、尿液中的表达水平并分析其临床意义。方法:选取就诊的67例体检者为正常对照组,试验组由65例CHB患者、76例乙肝后LC患者及87例乙肝相... 详细信息

目的:检测核仁磷酸蛋白(NPM)在健康体检者(HE)、慢性乙肝(CHB)、肝硬化(LC)及原发性肝癌(PHC)患者血浆、尿液中的表达水平并分析其临床意义。方法:选取就诊的67例体检者为正常对照组,试验组由65例CHB患者、76例乙肝后LC患者及87例乙肝相关PHC患者组成,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测NPM在四组受试者血、尿中的表达特征并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析诊断效能。结果:(1)CHB、LC及PHC组血清NPM的含量较对照组增高,在PHC组中尤其显著,表现出极显著的差异,有统计学意义(P0.05)。(3)在血清AFP阴性PHC患者中,NPM的ROC曲线AUC为0.714,其可实现72.7%的敏感度以及67.6%的特异度。结论:血清NPM在PHC患者中过表达,其特异性较好,经由与其他肿瘤标志物联合用于诊断,可在诊断筛查早期PHC方面发挥一定作用,尤其在血清AFP阴性的PHC病例中血清NPM具有潜在应用价值。

关键词：核仁磷酸蛋白原发性肝癌乙型肝炎灵敏度诊断价值

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核仁磷酸蛋白在肺癌细胞染色体极化中的作用

核仁磷酸蛋白在肺癌细胞染色体极化中的作用

作者：戴迎初苏州大学

学位级别：硕士

目的:随着我国社会、经济的发展,在人口老龄化加剧、饮食不合理、环境污染等因素影响下,恶性肿瘤早已成为严重影响中国人群健康的主要问题之一,并且日趋年轻化。据报道,我国恶性肿瘤的发病数、死亡数居高不下,每年有巨额的花费投入到恶... 详细信息

目的:随着我国社会、经济的发展,在人口老龄化加剧、饮食不合理、环境污染等因素影响下,恶性肿瘤早已成为严重影响中国人群健康的主要问题之一,并且日趋年轻化。据报道,我国恶性肿瘤的发病数、死亡数居高不下,每年有巨额的花费投入到恶性肿瘤的治疗上,给国家财政带来了极大的负担。2015年我国肺癌新发病例约有78.7万例,死亡人数约为63.1万例,肺癌不仅常年位居我国恶性肿瘤发病首位,也是导致我国死亡人数最多的恶性肿瘤。肺癌有多种分类方法,按照组织病理学分型主要分为非小细胞癌（NSCLC,约占85%）和小细胞癌（SCLC,约占15%）两大类。目前,肺癌的治疗手段主要有外科手术、放疗、化疗、免疫治疗、分子靶向治疗、中医治疗等,临床上推荐采用联合治疗。然而,尽管目前临床上这些治疗手段的普遍使用,肺癌,尤其是NSCLC的5年生存率仍然没有明显提高,依然保持在15～20%左右。因此,从肺癌的分子机制着手,寻找更有效的诊断及治疗靶点具有极其重要的意义。核仁磷酸蛋白（Nucleophosmin,NPM）是一种核仁蛋白,它在核糖体生物合成、细胞凋亡、细胞周期、对应激刺激的反应等一系列细胞生存和增殖途径中发挥着重要作用。目前已经证实NPM和肿瘤的发生发展息息相关。NPM还与含CENP-A的核小体组装、细胞增殖等生物进程相关,前期实验结果也发现NPM可以抑制细胞增殖、增加细胞G2/M期阻滞,这些结果提示NPM可能成为提高肺癌治疗疗效的靶点之一。方法:本研究分为三个部分:（1）建立稳定细胞系。首先构建载体、病毒,并建立稳定细胞系,通过Western-blot方法检测稳定细胞系中NPM的表达,鉴定病毒工作效率。（2）NPM与辐射之间的关系。在本部分,我们利用Western-blot方法检测辐射后NPM的表达水平,以探究二者之间的关系。（3）NPM对细胞周期、细胞增殖及染色体极化等生物学效应的影响。利用CCK8和细胞克隆实验检测NPM对细胞增殖和克隆形成的影响;通过细胞周期实验探究NPM对细胞周期的作用;通过免疫荧光实验和Western-blot方法研究NPM和细胞染色体极化之间的关系。结果:首先,通过包装慢病毒建立敲低和过表达NPM的稳定细胞系,并通过Western-blot方法验证其工作效率,建立好的稳定细胞系用于后续实验。然后我们利用Western-blot方法验证辐射后肺癌细胞NPM蛋白的表达,结果显示细胞在照射后NPM的表达明显降低（p＜0.05）。细胞增殖实验表明过表达NPM组A549细胞的增殖速度明显降低（p＜0.05）,敲低组变化不明显。我们用细胞克隆实验检测了各组细胞克隆形成情况,计算出细胞存活分数,并通过软件模拟细胞存活曲线,结果表明过表达NPM组的细胞克隆形成率明显降低（p＜0.05）。我们用流式细胞仪检测了各组细胞在照射2 Gy后0、10、24小时的细胞周期分布,结果显示在接受2Gy X射线照射后10、24小时,过表达NPM组A549细胞发生G2/M期阻滞（p＜0.05）,并且在照射后10小时G2/M期细胞比例增多,24小时后G2/M期细胞比例未见下降（p＜0.05）。通过检测A549细胞在施加辐射和过表达LNC CRYBG3后NPM的表达我们发现NPM与LNC CRYBG3和辐射之间存在一定的关系,X射线照射后NPM的表达有所下调（p＜0.05）;过表达LNC CRYBG3对NPM的表达没有明显影响;然而当同时施加X射线和过表达LNC CRYBG3的干预后,NPM的表达反而上升（p＜0.05）。最后,我们用免疫荧光法检测中心体和tubulin蛋白以表征细胞分裂,实验结果表明,NPM可以增加细胞的非正常极化,导致基因组不稳定增加（p＜0.05）。结论:过表达NPM可以导致肺癌细胞增殖减慢、存活率减低,并促进肺癌细胞X射线照射导致的G2/M期阻滞,通过与LNC CRYBG3的相互作用增加细胞异常极化的比例,导致肺癌细胞基因组不稳定,促进细胞的死亡。综上所述,本研究阐明了 NPM在肺癌辐射生物效应中的重要作用,可能为肺癌的治疗提供了新的策略。

关键词：电离辐射核仁磷酸蛋白肺癌细胞周期染色体极化

核仁磷酸蛋白和c-Src在耐药肺腺癌细胞中的表达及其与化疗耐药之间的关系

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肿瘤 2016年第6期36卷 613-620页

作者：贺兼斌刘理静向志易高众张平怀化市第一人民医院呼吸内科湖南怀化418000 湖南医药学院临床医学院诊断学教研室湖南怀化418000 南华大学附属第一医院呼吸内科湖南衡阳421001

目的 :观察核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)和c-Src蛋白在耐药肺腺癌细胞中的表达及其与化疗敏感性之间的关系。方法 :通过顺铂浓度梯增渐进式给药法筛选出不同程度的肺腺癌耐药细胞,并将其接种于小鼠皮下。实验分为4组:对照组(小鼠皮... 详细信息

目的 :观察核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)和c-Src蛋白在耐药肺腺癌细胞中的表达及其与化疗敏感性之间的关系。方法 :通过顺铂浓度梯增渐进式给药法筛选出不同程度的肺腺癌耐药细胞,并将其接种于小鼠皮下。实验分为4组:对照组(小鼠皮下接种耐0.0μg/m L顺铂的Lewis肺癌细胞)、非耐药组(小鼠皮下接种耐0.0μg/m L顺铂的Lewis肺癌细胞)、低耐药组(小鼠皮下接种耐10.0μg/m L顺铂的Lewis肺癌细胞)和高耐药组(小鼠皮下接种耐20.0μg/m L顺铂的Lewis肺癌细胞)。对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液,非耐药组、低耐药组和高耐药组小鼠腹腔注射顺铂(4 mg/kg)进行化疗,观察小鼠皮下移植瘤的生长情况和肺转移情况,应用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测小鼠皮下移植瘤组织中NPM和c-Src蛋白及m RNA的表达。结果 :非耐药组、低耐药组和高耐药组小鼠皮下移植瘤的体积和质量均小于对照组(P值均蛋白的表达水平均高于非耐药组和对照组(P值均蛋白的表达水平均高于低耐药组(P值均蛋白表达水平之间的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论 :NPM和c-Src在耐药的Lewis肺癌细胞中表达上调,可能与肺腺癌细胞对顺铂耐药有关。

关键词：肺肿瘤化学疗法,辅助抗药性,肿瘤核仁磷酸蛋白 c-Src

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核仁磷酸蛋白突变与血液肿瘤

中国实验血液学杂志 2007年第3期15卷 662-666页

作者：骆展鹏张伶重庆医科大学医学检验系临床血液教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

核仁磷酸蛋白(NPM)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的蛋白质。最近在核型正常的急性髓系白血病和少数骨髓增生异常综合征中发现有NPM基因突变及其蛋白的胞浆移位,突变的NPM可能通过下调肿瘤抑制因子Arf启动p53活性和诱导细胞周期停止而促... 详细信息

核仁磷酸蛋白(NPM)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的蛋白质。最近在核型正常的急性髓系白血病和少数骨髓增生异常综合征中发现有NPM基因突变及其蛋白的胞浆移位,突变的NPM可能通过下调肿瘤抑制因子Arf启动p53活性和诱导细胞周期停止而促进细胞恶性增殖。临床研究提示,NPM突变与急性髓系白血病患者的预后相关,并且可作为微量残留白血病的监测指标。这些发现提示NPM突变可能在髓系白血病的发生中具有重要作用。本文就NPM突变在血液肿瘤中的研究进展做一综述。

关键词：核仁磷酸蛋白血液肿瘤 Arf P53

核仁磷酸蛋白(NPM/B23)与子宫内膜癌关系的研究进展

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医学综述 2014年第11期20卷 1956-1958页

作者：薛晓芮尹香花扬州大学临床医学院妇产科江苏扬州225001

核仁磷酸蛋白(NPM/B23)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的多功能蛋白质。核仁磷酸蛋白参与核糖体的生物合成,控制中心体复制,并可通过多种信号通路调节细胞增殖和凋亡,参与肿瘤的发生。近年来对NPM/B23的研究多集中于NPM/B23基因突变与血... 详细信息

核仁磷酸蛋白(NPM/B23)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的多功能蛋白质。核仁磷酸蛋白参与核糖体的生物合成,控制中心体复制,并可通过多种信号通路调节细胞增殖和凋亡,参与肿瘤的发生。近年来对NPM/B23的研究多集中于NPM/B23基因突变与血液肿瘤的关系,另有许多研究表明NPM/B23在一些实体肿瘤中过表达,并与肿瘤的发生、发展密切相关。核仁磷酸蛋白可能是许多实体肿瘤的肿瘤标志物之一,但其在子宫内膜癌中作用的报道较少。因此,该文就核仁磷酸蛋白及其与子宫内膜癌关系的研究现状进行综述。

关键词：子宫内膜癌核仁磷酸蛋白雌激素受体肿瘤抑制因子另类阅读框

核仁磷酸蛋白突变对白血病细胞生物学特性的影响及机制初探

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核仁磷酸蛋白突变对白血病细胞生物学特性的影响及机制初探

作者：骆展鹏重庆医科大学

学位级别：硕士

急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)是一类造血系统恶性肿瘤,其发病急骤,病程短,死亡率较高。传统的放化疗治疗AML完全缓解率较低,易复发。虽然造血干细胞移植是根治AML的方法,但是存在着排异反应、治疗费用昂贵等诸多问... 详细信息

急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)是一类造血系统恶性肿瘤,其发病急骤,病程短,死亡率较高。传统的放化疗治疗AML完全缓解率较低,易复发。虽然造血干细胞移植是根治AML的方法,但是存在着排异反应、治疗费用昂贵等诸多问题。近年来不断发现白血病发病过程相关的多种融合基因,这些基因在病程中比较稳定,与白血病的发病及病程进展有关,具有重要的临床意义。然而,白血病具有高度异质性,各型白血病相关基因种类繁多,目前尚未发现与各型别AML发病都密切相关的一个特异性基因。最近研究发现,在AML患者中频繁发生核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)基因突变,它可见于除M3型外的各型AML中。临床资料显示,在成人和儿童AML患者中,NPM突变均有发生,其发生率随着年龄的增长而增加。进一步研究发现,NPM突变通常累及白血病干/祖细胞,并且受累的白血病细胞常不伴有已知AML相关融合基因的异常,提示NPM突变可能在AML发生的早期阶段发挥作用。临床研究发现,NPM突变与患者的预后密切相关,不仅可以指导治疗措施的选择和制定,而且还可以作为监测微量残留病的新指标。因此,有学者建议将NPM突变指标纳入临床AML的WHO分型标准中,这进一步证实了NPM突变在临床上AML的发生发展以及转归中的重要作用。最近发现,NPM突变能够促进正常小鼠成纤维细胞NIH3T3恶性转化,但是其对白血病细胞生物学特性的影响还未见文献报道。因此,NPM突变对白血病细胞生物学特性的影响及作用的分子机制有待阐明。本课题采用基因转染技术,以NPM无突变的CD34+白血病细胞系KG-1a为研究对象,分析突变型NPM对早期白血病细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。主要的结果和结论如下: 1.检测KG-1a细胞中CD34抗原和突变型NPM基因的表达。首先利用流式细胞仪(FACS)检测KG-1a细胞中CD34+细胞含量,发现KG-1a细胞系中CD34+细胞比例占96.3%。然后利用RT-PCR和免疫组化分别检测突变型NPM基因表达及其蛋白的亚细胞分布,证实了KG-1a细胞是高表达CD34的早期白血病细胞,不表达突变型NPM基因和蛋白,符合后续实验的要求。 2.转染突变型NPM基因,观察其对白血病细胞增殖和凋亡的影响。首先在通过脂质体介导下将突变型NPM基因转染入KG-1a细胞并筛选稳定表达株。RT-PCR和免疫组化检测突变NPM基因和蛋白表达情况,证明转染后白血病细胞表达突变型NPM基因和蛋白;其次采用FACS检测细胞周期,发现转染组细胞周期进程明显增快,同时台盼蓝染色计数活细胞,显示细胞增殖能力增强;最后采用分光光度方法检测细胞casepase-3的活性以判断细胞凋亡情况,结果显示转染组细胞casepase-3的活性下降,细胞凋亡减少。上述实验表明了突变型NPM不仅能够促进细胞周期进程,促进细胞体外增殖,而且还赋予细胞抗凋亡的性质。 3.初步探讨突变型NPM影响白血病细胞生物学特性的分子机制。首先利用RT-PCR检测细胞周期调节因子p21 mRNA水平,发现转染组细胞p21的mRNA表达减低;然后检测细胞casepase-9的活性,发现转染组细胞casepase-9活性明显降低。证实了转染突变型NPM可以下调p21的表达,促进细胞周期进程,导致细胞过度增殖;同时还通过下调线粒体凋亡途径中重要的调节因子casepase-9的活性,从而引起凋亡效应分子casepase-3活性的降低,导致细胞抵抗凋亡。

关键词：急性髓系白血病核仁磷酸蛋白突变增殖凋亡

干扰核仁磷酸蛋白对人白血病OCI／AML3细胞凋亡的影响及其机制

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1578-1583页

作者：王娟陈莎娜全静贺金刚张帅帅鲜敬荣张伶重庆医科大学检验医学院血液教研室、临床检验诊断学教育部重点实验室、重庆市重点实验室重庆400016

目的:探讨抑制核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)1基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法:将空载慢病毒p GIPZ和NPM干扰慢病毒sh NPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用q RT-PCR、Wester... 详细信息

目的:探讨抑制核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)1基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法:将空载慢病毒p GIPZ和NPM干扰慢病毒sh NPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用q RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞及NPM1 A型突变(NPM1-m A)基因和蛋白的表达,流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞凋亡情况,q RT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2)和p-ERK信号分子表达;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路抑制剂(PD98059)处理后OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞凋亡率的改变。结果:干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-m A的m RNA水平(F=20.078;P=0.000,PMock vs.sh NPM=0.001,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.003,PMock vs.p GIPZ=0.333)和蛋白水平,伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱;干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率(F=25.236,P=0.000,PMock vs.sh NPM=0.001,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.001,PMock vs.p GIPZ=0.729),同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征。此外,干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和m RNA表达(F=7.649,P=0.000;PMock vs.sh NPM=0.015,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.015,PMock vs.p GIPZ=0.984)、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和m RNA表达(F=5.190,P=0.000;PMock vs.sh NPM=0.034,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.029,PMock vs.p GIPZ=0.909);干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达,PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡(F=25.643,P=0.007)。结论:NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用,潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关。

关键词：白血病核仁磷酸蛋白基因突变 OCI/AML3细胞凋亡

急性白血病中核仁磷酸蛋白异常表达的研究进展

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白血病．淋巴瘤 2014年第12期23卷 754-757页

作者：王凌燕胡建达福建医科大学附属协和医院血液科福建省血液病学重点实验室福州350001

核仁磷酸蛋白（NPM）是一种在各种类型的细胞中广泛表达的多功能蛋白质.NPM基因的异常表达可导致细胞的恶性增殖,参与肿瘤的发生与发展.NPM的基因表达异常主要有过表达、基因重排、基因突变三种情况.NPM高表达于增殖活跃的细胞中,参与... 详细信息

核仁磷酸蛋白（NPM）是一种在各种类型的细胞中广泛表达的多功能蛋白质.NPM基因的异常表达可导致细胞的恶性增殖,参与肿瘤的发生与发展.NPM的基因表达异常主要有过表达、基因重排、基因突变三种情况.NPM高表达于增殖活跃的细胞中,参与实体瘤与白血病的发生、发展.NPM还可与其他基因（RARα、MLF1、ALK）形成致癌性的融合蛋白,促进急性早幼粒细胞白病（M3）、骨髓增生异常综合征（MDS）和淋巴瘤的发生.NPM1突变是导致白血病发生的主要分子事件之一,可以累及AML的多种亚型,影响AML的预后.文章就急性白血病NPM基因表达异常的进展作一综述.

关键词：白血病,急性核仁磷酸蛋白

稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2011年第2期24卷 141-145页

作者：邵会媛覃凤娴苗宗玉陈先春谭诗高玉洁张伶重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建... 详细信息

目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。

关键词：白血病核仁磷酸蛋白突变 THP-1细胞系 K562细胞系