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树豆酮酸a可减轻db/db小鼠非酒精性脂肪肝损伤

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第3期40卷 373-382页

作者：王一凡吕厚星李志阳代云莉冯昭卫陈佳佳陈圣杰王建塔肖瑛贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室贵州医科大学病理生理学教研室贵阳550025 贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心贵阳550004

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指肝中储存过多的脂肪,与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病(type-2 diabetes mellitus,T2DM)、血脂异常等代谢综合征密切相关。肝纤维化是NAFLD进一步发展为肝细胞癌(hepatoce... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指肝中储存过多的脂肪,与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病(type-2 diabetes mellitus,T2DM)、血脂异常等代谢综合征密切相关。肝纤维化是NAFLD进一步发展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的关键过程,减少肝内的脂肪积累,从而延缓或阻止NAFLD向纤维化的进展是治疗的关键。树豆酮酸a(cajanonic acid A,CAA)在2型糖尿病中能够有效改善胰岛素抵抗,发挥降糖减脂作用。本研究旨在探究CAA对NAFLD肝损伤的保护作用。通过采用db/db自发性NAFLD小鼠模型,将db/db小鼠分为NAFLD组和CAA给药组,CAA组予50 mg/(kg·d)灌胃给药,同期C57BL小鼠作为正常对照组(NC组),每组6只。小鼠生化指标检测和组织病理染色发现,CAA干预可有效缓解db/db小鼠的糖脂代谢紊乱、肝功能损伤(P树豆酮酸a可有效减轻db/db小鼠非酒精性脂肪性肝损伤,改善糖脂代谢紊乱,抑制脂质过度沉积,减轻肝纤维化以缓解NAFLD进一步发展,同时E2F1和E2F7可能参与了CAA改善脂质代谢和纤维化的过程。

关键词：非酒精性脂肪性肝病 E2F转录因子1 E2F转录因子7 树豆酮酸a 肝纤维化上皮-间充质转化

树豆酮酸a抑制3T3-L1细胞脂肪合成与分解的作用研究

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中国药理学通报 2016年第2期32卷 189-193页

作者：秦佑杨瑞仪陈梅果沈小玲胡英杰广州中医药大学热带医学研究所中药新药发现实验室广东广州510405

目的探讨树豆酮酸a(caianonic acid A,CAA)对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂质代谢的影响及其机制。方法诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞加入不同浓度的CAA作用48 h后进行总脂肪、甘油三酯、游离脂肪酸和甘油含量测定。实时荧光定量PCR法检测脂质... 详细信息

目的探讨树豆酮酸a(caianonic acid A,CAA)对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂质代谢的影响及其机制。方法诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞加入不同浓度的CAA作用48 h后进行总脂肪、甘油三酯、游离脂肪酸和甘油含量测定。实时荧光定量PCR法检测脂质代谢相关基因的表达。结果CAA明显降低3T3-L1脂肪细胞总脂肪和甘油三酯含量,抑制游离脂肪酸和甘油的释放,下调乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、激素敏感性脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)和脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因的表达,但增加乙酰辅酶A氧化酶(acyl CoA oxidase,ACOX)和肉碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyl transferase 1,CPT-1)基因的mRNA水平。结论 CAA通过抑制脂肪吸收与合成相关基因(ACC、FAS、LPL)的表达,减少脂肪细胞甘油三酯的合成,抑制细胞过度肥大。同时,下调脂肪分解限速酶基因(HSL、ATGL)mRNA水平,促进脂肪酸氧化关键基因(ACOX和CPT-1)的表达减少游离脂肪酸的释放,改善脂肪细胞的脂质代谢平衡。

关键词：树豆酮酸a 脂肪细胞脂肪合成脂肪分解脂肪酸氧化游离脂肪酸

树豆酮酸a对人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的体外抑制作用研究

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中国药房 2021年第2期32卷 195-200页

作者：陈瑞周维张丽朱高峰黄静汤磊贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004

目的:研究树豆酮酸a对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用。方法:采用Cocktail探针药物法,在人肝微粒体中加入50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05μmol/L的树豆酮酸a,与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥... 详细信息

目的:研究树豆酮酸a对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用。方法:采用Cocktail探针药物法,在人肝微粒体中加入50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05μmol/L的树豆酮酸a,与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥美拉唑、睾酮、甲苯磺丁脲(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的探针药物)]共同孵育60 min。在另设空白组和阳性对照组[α-萘黄铜、奎尼丁、(+)-N-3-苄基香酚、酮康唑、磺胺苯吡唑(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的特异性抑制剂)]的基础上,以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)分析相应代谢产物(对乙酰氨基酚、右啡烷、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮、羟基甲苯磺丁脲)的含量。以ACQUITY UPLC■BEH C18为色谱柱,以0.01%甲酸水溶液-0.01%甲酸乙腈为流动相(梯度洗脱),柱温为40℃,流速为0.4 mL/min,进样量为2μL;采用电喷雾电离源,以多反应监测模式进行正负离子扫描,数据采集范围为m/z 100~1200,碰撞气为氩气,雾化气为氮气,锥孔气流量为50 L/h,脱溶剂气流量为800 L/h,正、负离子模式下毛细管电压分别为2.0、1.5 k V,离子源温度分别为120、110℃,脱溶剂的温度分别为400、450℃。使用Graphpad Prism 5.0软件进行非线性回归分析并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:上述各代谢产物检测浓度的线性范围分别为0.26~8.35、0.36~34.56、0.10~3.09、3.67~117.37、0.15~4.88μmol/L(R^2>0.99),定量下限分别为0.26、0.36、0.10、3.67、0.15μmol/L。阳性对照组特异性抑制剂对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9酶的IC50均在文献报道的可接受范围内。树豆酮酸a对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶的IC50值均大于50μmol/L,对CYP2C9、CYP2C19酶的IC50值分别为4.94、18.00μmol/L。结论:树豆酮酸a对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶没有抑制作用,对CYP2C9、CYP2C19酶有一定的抑制作用。

关键词：树豆酮酸a 人肝微粒体细胞色素P450酶 Cocktail探针药物法超高效液相色谱-质谱联用法特异性抑制剂抑制作用

UPLC-Q-TOF-MS/MS法鉴定大鼠中树豆酮酸a代谢产物

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药学学报 2024年第5期59卷 1382-1390页

作者：程瑶班玉娟陈瑞张丽胡克荣黄静贵州医科大学贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

本研究建立一种简便、快速、灵敏度高的超高效液相色谱串联四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法,研究树豆酮酸a (CAA)在大鼠体内的代谢特征。通过灌胃给予大鼠CAA (30 mg·kg^(-1))后,收集血浆、尿液、胆汁和粪便采用UPLC-Q-TOF-MS... 详细信息

本研究建立一种简便、快速、灵敏度高的超高效液相色谱串联四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法,研究树豆酮酸a (CAA)在大鼠体内的代谢特征。通过灌胃给予大鼠CAA (30 mg·kg^(-1))后,收集血浆、尿液、胆汁和粪便采用UPLC-Q-TOF-MS/MS检测生物样品,收集和处理相关数据,将代谢产物的精确质量数和MS~2质谱与母体化合物进行比较。结果共检测到23种代谢物,其中尿液中有15种,胆汁中有11种,粪便中有11种,血浆中有9种。与CAA相关的主要代谢途径包括脱氢、还原、羟基化、甲基化和葡萄糖醛酸结合。本实验获得贵州医科大学动物伦理委员会批准(编号:1603137)。

关键词：树豆酮酸a UPLC-Q-TOF-MS/MS 代谢产物

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树豆酮酸a对HepG2细胞体外糖代谢影响

中国公共卫生 2016年第7期32卷 928-930页

作者：罗明梁冰陈文章樊玲玲汤磊贵州医科大学药理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院

目的探讨树豆酮酸a对HepG2细胞糖代谢影响及机制。方法体外培养HepG2细胞,实验设10-3、10-4、10-5、10-6mol/L树豆酮酸a组,作用24 h,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测HepG2细胞葡萄糖消耗量,ELISA法检测糖代谢相关酶己糖激酶(HK)和丙... 详细信息

目的探讨树豆酮酸a对HepG2细胞糖代谢影响及机制。方法体外培养HepG2细胞,实验设10-3、10-4、10-5、10-6mol/L树豆酮酸a组,作用24 h,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测HepG2细胞葡萄糖消耗量,ELISA法检测糖代谢相关酶己糖激酶(HK)和丙酮酸脱氢酶(PDH)活性。结果 10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)mol/L树豆酮酸a组HepG2细胞葡萄糖消耗量分别为(8.650±0.319)、(8.231±0.182)、(8.136±0.402)mmol/L,明显高于对照组[(6.521±0.056)mmol/L],差异有统计学意义(P树豆酮酸a组HepG2细胞内HK含量分别为(882.91±30.72)、(718.25±20.67)pg/m L,明显高于对照组[(616.65±17.24)pg/m L];10-3mol/L树豆酮酸a组HepG2细胞内PDH含量为(1 526.69±66.74)pg/m L,明显高于对照组[(1 204.73±55.72)pg/m L],差异有统计学意义(P树豆酮酸a在体外可促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取,具有降糖活性,其作用机制可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性有关。

关键词：树豆酮酸a HepG2细胞糖代谢己糖激酶(HK) 丙酮酸脱氢酶(PDH)

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树豆酮酸a合成方法的改进

化学研究与应用 2021年第10期33卷 2039-2043页

作者：许小婷陈瑞郭兵汤磊王建塔贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心贵州贵阳550004 贵州省重大疾病发病机制研究及药物防治重点实验室贵州贵阳550004

本研究对树豆酮酸a的合成方法进行改进。以2,4-二甲氧基苯甲酸为起始原料,经C—H活化/环合级联反应、选择性脱甲基、威廉姆森醚化、克莱森重排、水解得到目标产物,总收率为21.3%。采用^(1)H NMR、^(13)C NMR和ESI-HRMS对所合成的化合物... 详细信息

本研究对树豆酮酸a的合成方法进行改进。以2,4-二甲氧基苯甲酸为起始原料,经C—H活化/环合级联反应、选择性脱甲基、威廉姆森醚化、克莱森重排、水解得到目标产物,总收率为21.3%。采用^(1)H NMR、^(13)C NMR和ESI-HRMS对所合成的化合物进行表征。本研究为树豆酮酸a的制备提供了一个操作简单、条件温和的合成方法。

关键词：树豆酮酸a C-H活化/环合级联反应合成

树豆酮酸a对PTP1B过表达HepG2细胞胰岛素信号通路的作用研究

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树豆酮酸A对PTP1B过表达HepG2细胞胰岛素信号通路的作用研究

作者：李想广州中医药大学

学位级别：硕士

Ⅱ型糖尿病也称非胰岛素依赖型糖尿病,是一种危害严重的疾病。近年由于人们生活方式的改变使Ⅱ型糖尿病的发病率不断增加,甚至有发病年轻化的趋势。胰岛素抵抗(Insulin Resistance, IR)是Ⅱ型糖尿病主要的病理特征和发病机制,与Ⅱ型糖... 详细信息

Ⅱ型糖尿病也称非胰岛素依赖型糖尿病,是一种危害严重的疾病。近年由于人们生活方式的改变使Ⅱ型糖尿病的发病率不断增加,甚至有发病年轻化的趋势。胰岛素抵抗(Insulin Resistance, IR)是Ⅱ型糖尿病主要的病理特征和发病机制,与Ⅱ型糖尿病及其并发症的发生发展密切相关。预防和治疗胰岛素抵抗是治疗糖尿病和预防糖尿病并发症的重要环节之一。实验目的：本课题组前期在树豆中分离的树豆酮酸a(Cajanonic Acid A, CAA)是一种全新的菧类化合物,在体内研究发现其对Ⅱ型糖尿病大鼠模型等糖尿病动物模型具有降低血糖,增强胰岛素敏感性的作用;体外研究发现其可以抑制脂肪细胞分化,改善地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖吸收。为了进一步研究树豆酮酸a的药理作用,本实验以胰岛素信号通路负性调节因子——蛋白酪氨酸磷酸酶1B (protein tyrosine phosphatase 1B, PTP1B)为靶点,采用PTP1B过表达肝细胞模型,评价树豆酮酸a对PTP1B的表达和活性的抑制作用,对胰岛素信号传导通路的调控作用,以及改善胰岛素抵抗、调节糖代谢的作用,为树豆酮酸a用于治疗Ⅱ型糖尿病的开发提供实验依据。实验方法：树豆酮酸a对PTP1B活性的作用：以磷肽IR5(胰岛素受体β亚基氨基酸1142-1153)为底物,通过比色法检测磷酸基团的释放来反映树豆酮酸a对重组PTP1B蛋白活性作用的影响。过表达PTP1B细胞的建立：采用脂质体(Lipofectamine2000)将携带ptplb基因的表达载体(pCMV-PTPN1)转染HepG2细胞,建立ptp1b基因稳定过表达的HepG2/PTP1B细胞。实时荧光定量RT-PCR法检测ptp1b的mRNA水平,葡萄糖氧化酶法检测HepG2/PTPlB细胞对胰岛素刺激的敏感性。树豆酮酸a对HepG2/PTPlB细胞胰岛素敏感性的作用：树豆酮酸a分高、中、低(25、12.5和6.25μmol/L)三个浓度,以罗格列酮(Rosiglitazone, ROS)为阳性对照,ROS分组高、中、低三个浓度组(30、20和10μmol/L),分别作用HepG2/PTPlB细胞24h和48h,并添加胰岛素(10 nmol/L)刺激,葡萄糖氧化酶法检测树豆酮酸a对HepG2/PTP1B细胞胰岛素敏感性的改善作用。树豆酮酸a对HepG2/PTPlB细胞胰岛素信号传导通路的作用：树豆酮酸a分高、中、低(25、12.5和6.25μmol/L)三个浓度分别作用HepG2/PTP1B细胞24h,胰岛素刺激30min后提取总RNA,实时荧光定量RT-PCR法检测胰岛素信号传导通路中ptp1b、胰岛素受体底物-1 (insulin receptor substrate-1, irs-1)、胰岛素受体底物-2 (insulin receptor substrate-2, irs-2)、糖原合成酶激酶3β (glycogen synthasekinase 3β,有负向调节作用)以及葡萄糖转运体1, (glucose transporterl,glut-1)基因的mRNA水平。树豆酮酸a同样方式作用细胞,提取总蛋白,蛋白印迹(Western Blot)法检测PTPIB与GLUT-1蛋白表达水平以及IRS-1和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(Phosphatidyl Inositol 3-kinase, PI3K)的酪氨酸磷酸化水平实验结果：体外活性检测发现树豆酮酸a对纯化重组PTPIB活性具有抑制作用,半数抑制浓度IC50为63.19 μmol/L,其中在200 p mol/L树豆酮酸a作用下,PTP1B的活性仅为空白对照的1.8%。PTP1B表达载体转染HepG2后经过潮霉素筛选得到PTP1B稳定过表达的细胞系HepG2/PTP1B。实时荧光定量RT-PCR结果显示：与HepG2细胞比较,HepG2/PTP1B细胞的ptp1b mRNA水平提高4倍。葡萄糖消耗实验显示：在不同浓度的胰岛素(1、10、100 nmol/L)刺激下,HepG2细胞对葡萄糖的消耗明显增多(P0.05),表明PTPlB过度表达使细胞对胰岛素敏感性显著降低,形成胰岛素抵抗。不同浓度树豆酮酸a分别作用HepG2/PTP1B细胞使其胰岛素敏感性明显增强(P树豆酮酸a高、中、低剂量组作用24h和48h后,HepG2/PTP1B细胞葡萄糖消耗量分别提高154.3%、127.5%、58.8%和92.1%、53.7%、28.1%;而ROS高、中、低剂量组在24h和48h作用后,HepG2/PTP1B细胞糖消耗量分别提高224.2%,213.7%,168.4%

关键词：树豆酮酸a Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗胰岛素信号传导通路 PTP1B

树豆酮酸a对HepG2细胞体外糖代谢的影响及改善HepG2细胞胰岛素抵抗的实验研究

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树豆酮酸A对HepG2细胞体外糖代谢的影响及改善HepG2细胞胰岛素抵...

作者：罗明贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨树豆酮酸a(Cajanonic acid A)对HepG2细胞体外糖代谢的影响及对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用,并探讨相关机制。方法:第一部分研究树豆酮酸a对HepG2细胞体外糖代谢的影响1.体外培养HepG2细胞,检测经不同浓度(10-3 mol/L、10-4... 详细信息

目的:探讨树豆酮酸a(Cajanonic acid A)对HepG2细胞体外糖代谢的影响及对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用,并探讨相关机制。方法:第一部分研究树豆酮酸a对HepG2细胞体外糖代谢的影响1.体外培养HepG2细胞,检测经不同浓度(10-3 mol/L、10-4 mol/L、10-5 mol/L和10-6 mol/L)树豆酮酸a作用24 h后HepG2细胞对葡萄糖代谢的影响;***法检测经不同浓度(10-3mol/L、10-4 mol/L、10-5 mol/L和10-6 mol/L)树豆酮酸a作用24 h后HepG2细胞糖代谢相关酶己糖激酶(HK)和丙酮酸脱氢酶(PDH)的活性。第二部分研究树豆酮酸a对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR-HepG2)的改善作用1.经不同浓度(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L和10-9 mol/L)胰岛素作用HepG2细胞后,选择出现最佳抵抗作用的胰岛素浓度;在采用最佳胰岛素抵抗浓度作用HepG2细胞不同时间(12 h、24 h、36 h和48 h)后,选择最佳抵抗作用时间,建立胰岛素抵抗模型;2.检测经不同浓度(10-3 mol/L、10-4 mol/L和10-5 mol/L)树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞对葡萄糖代谢的影响;***法检测经不同浓度(10-3 mol/L、10-4 mol/L和10-5 mol/L)树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞糖代谢相关酶己糖激酶(HK)和丙酮酸脱氢酶(PDH)的活性;4.蛋白印迹法(Western blot法)检测经不同浓度(10-3 mol/L、10-4 mol/L和10-5 mol/L)树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞中AMPK和AKT蛋白的表达水平。结果:10-3mol/L、10-4 mol/L和10-5 mol/L浓度树豆酮酸a作用24 h后HepG2细胞葡萄糖的消耗量分别为(8.650±0.319)mmol/L、(8.231±0.182)mmol/L和(8.136±0.402)mmol/L,与阴性对照组(6.521±0.056)mmol/L相比,差异具有统计学意义(P树豆酮酸a作用24 h后HepG2细胞内己糖激酶含量分别为(882.91±30.72)pg/mL和(718.25±20.37)pg/mL,与阴性对照组(616.65±17.24)pg/m L相比,己糖激酶活性增加;10-3 mol/L浓度树豆酮酸a作用24 h后HepG2细胞内丙酮酸脱氢酶含量为(1526.69±66.74)pg/mL,与阴性对照组(1204.73±55.72)pg/mL相比,丙酮酸脱氢酶活性增加,差异具有统计学意义(P树豆酮酸a作用24h后IR-HepG2细胞葡萄糖的消耗量分别为(7.934±0.013)mmol/L、(7.032±0.032)mmol/L,与阴性对照组(5.952±0.015)mmol/L相比,差异具有统计学意义(P树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞内己糖激酶含量分别为(568.87±39.77)pg/mL、(495.43±35.43)pg/mL和(489.63±27.30)pg/mL,与阴性对照组(444.42±33.52)pg/mL相比,己糖激酶活性增加;10-3 mol/L、10-4 mol/L浓度树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞内丙酮酸脱氢酶含量分别为(1765.54±135.26)pg/mL、(1620.48±149.81)pg/mL,与阴性对照组(1247.92±152.47)pg/m L相比,丙酮酸脱氢酶活性增加,差异具有统计学意义(P树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞内AMPK蛋白的表达增加,10-3 mol/L树豆酮酸a作用24 h后IR-HepG2细胞内AKT蛋白的表达增加,差异具有统计学意义(P树豆酮酸a在体外能促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取,具有降糖活性,其作用可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性有关。2.树豆酮酸a对HepG2细胞胰岛素抵抗具有一定改善作用,其作用可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性以及上调AMPK、AKT蛋白的表达有关。

关键词：树豆酮酸a HepG2细胞糖代谢胰岛素抵抗己糖激酶丙酮酸脱氢酶磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK) 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)

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树豆酮酸a改善胰岛素抵抗的作用研究

树豆酮酸A改善胰岛素抵抗的作用研究

作者：谢洁广州中医药大学

学位级别：硕士

实验目的采用地塞米松诱导的肝胰岛素抵抗细胞模型、脂肪细胞胰岛素抵抗模型和肌细胞胰岛素抵抗模型,研究树豆酮酸a(缩写CAA)调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。实验方法采用CCK8法检测不同浓度的CAA对3T3-L... 详细信息

实验目的采用地塞米松诱导的肝胰岛素抵抗细胞模型、脂肪细胞胰岛素抵抗模型和肌细胞胰岛素抵抗模型,研究树豆酮酸a(缩写CAA)调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。实验方法采用CCK8法检测不同浓度的CAA对3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖的影响;诱导3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化,油红0染色法检测不同浓度的CAA对细胞成脂分化的影响;实时荧光定量PCR和Western-blot法在mRNA和蛋白质水平追踪细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)的表达情况。3T3-L1小鼠前脂肪细胞、C2C12小鼠成肌细胞分别诱导分化为成熟的脂肪细胞和肌细胞,采用地塞米松(DEX)诱导人肝细胞HepG2以及分化成熟的3T3-L1、C2C12细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,不同浓度CAA作用于各细胞模型,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)检测细胞葡萄糖消耗量;实时荧光定量PCR和Western-blot法检测PTP1B基因及蛋白表达水平;Western-blot法检测胰岛素信号传导通路中相关蛋白(IRS-1、IRS-2、IRβ、PI3K、 AKT、GLUT1、GLUT4、GSK-3β)表达及磷酸化(p-IRβ、p-AKT)水平。实验结果1. PTP1B在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中的表达：实时荧光定量PCR结果显示,3T3-L1前脂肪细胞于细胞融合1天后,PTP1B mRNA水平逐渐增加,分化诱导剂Ⅰ加入2天出现峰值;随后PTP1B mRNA水平呈下降趋势,诱导分化液换成正常培养基后,随着细胞呈现明显的成脂样分化(胞质出现脂滴),PTP1B mRNA水平再次上升。Western-blot结果显示,PTP1B蛋白水平变化趋势同mRNA,但出现滞后。***对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响：CAA在18.75-200μ mol/L浓度范围内对3T3-L1前脂肪细胞增殖无显著影响(P>0.05),但抑制其向脂肪细胞的分化以及脂肪的合成,且随剂量增加而增强。在150和200μ mol/L浓度抑制作用显著(P0.05),但明显促进地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗(P0.05),其中,IR β增加了26.99%,p-IRβ增加了67.19%,IRS-1增加了60.03%,IRS-2增加了180.67%,PI3K增加了40.74%。***对胰岛素抵抗肝细胞的作用：CAA (40μmol/L)对正常细胞葡萄糖消耗无显著影响(P>0.05),但明显促进地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗(P酸化水平稍有下降,但与正常细胞比较无显著性差异,IRS-2及GSK-3β表达水平也无明显变化;CAA可上调胰岛素抵抗肝细胞IRS-2、AKT、GLUT1表达及IRβ磷酸化水平(P<0.01),下调GSK-3β表达(P<0.05),其中,IRS-

关键词：树豆酮酸a C2C12细胞 3T3-L1前脂肪细胞 HepG2细胞胰岛素抵抗