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栉江珧染色体制备及核型分析

渔业科学进展 2018年第5期39卷 66-72页

作者：周丽青王雪梅吴彪孙秀俊陈四清刘志鸿杨爱国张盛农赵庆张高伟农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 山东省日照市海洋与渔业研究所日照276800 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

为了解栉江珧(Atrina pectinata)的细胞遗传学特征,取暂养促熟的雌雄亲贝共12枚为研究对象,通过调节暂养水温、采用鳃丝及鳃丝对应部位创面的愈合增生组织为染色体制备材料来改良染色体制备方法,采用常规的热滴片法制备出大量形态好且... 详细信息

为了解栉江珧(Atrina pectinata)的细胞遗传学特征,取暂养促熟的雌雄亲贝共12枚为研究对象,通过调节暂养水温、采用鳃丝及鳃丝对应部位创面的愈合增生组织为染色体制备材料来改良染色体制备方法,采用常规的热滴片法制备出大量形态好且分散均匀的染色体标本,并进行染色体核型分析。结果显示,适度调节暂养水温和给鳃组织制造微创并以创面愈合增生组织为染色体制备材料均能有效增加组织细胞的分裂增生能力,为染色体制备提供了充足的材料;栉江珧二倍体染色体数目2n=34,雄性染色体组型为2n=8m+10sm+16st,雌性染色体组型为2n=6m+10sm+18st,染色体组型中,雌雄两性中期分裂相的染色体排序基本一致,都有1对染色体相对长度明显大于其他染色体;两性染色体组型有两处明显不同,其一,雄性第14对染色体为中着丝粒染色体,而雌性相对应的是亚端着丝粒染色体;其二,雄性栉江珧相对长度最大的染色体存在异形情形,雌性最大的染色体对则为同形,基本确定栉江珧存在初级的性染色体分化,属于XX/XY型性别决定方式。大型贝类染色体制备方法的改进将有助于丰富贝类细胞遗传学和分类学的研究内容。

关键词：栉江珧染色体核型异形染色体分类

栉江珧(Atrina pectinata)EST-SSR标记的开发与应用

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渔业科学进展 2017年第2期38卷 137-142页

作者：李东明杨爱国吴彪孙秀俊周丽青刘寒苗张广明上海海洋大学水产与生命学院上海201306 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071

本研究以前期获得的栉江珧(Atrina pectinata)转录组数据为基础,筛选获得10550条微卫星标记(SSR),检出率为8.2%,平均9.01 kb出现1个SSR位点。设计并合成120对SSR引物,筛选得到36对能够稳定扩增的引物,并利用已获得的36对SSR引物对青岛... 详细信息

本研究以前期获得的栉江珧(Atrina pectinata)转录组数据为基础,筛选获得10550条微卫星标记(SSR),检出率为8.2%,平均9.01 kb出现1个SSR位点。设计并合成120对SSR引物,筛选得到36对能够稳定扩增的引物,并利用已获得的36对SSR引物对青岛海区栉江珧进行了群体遗传多样性分析。结果显示,12对引物的扩增片段表现出多态性,共产生42个等位基因,平均每个位点产生3.5个等位基因,平均观测杂合度(H_o)、平均期望杂合度(H_e)和平均多态信息含量(PIC)分别为0.417、0.604和0.526,表明青岛海区栉江珧群体的遗传多样性较高。本研究获得的EST-SSR标记和群体遗传信息为栉江珧的种质资源保护提供了重要的参考资料。

关键词：栉江珧 EST-SSR 遗传多样性杂合度

栉江珧wnt4基因cDNA的克隆表达及调控

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中国水产科学 2016年第5期23卷 1041-1051页

作者：王昌勃李琪于瑞海孔令锋于红中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

本研究运用同源克隆技术和RACE技术克隆了栉江珧(Atrina pectinata)wnt4基因cDNA全长序列。该基因序列全长为1493 bp,其中开放阅读框1074 bp,编码由357个氨基酸组成的蛋白。氨基酸序列分析表明,栉江珧wnt4基因具有wnt家族保守结构域,与... 详细信息

本研究运用同源克隆技术和RACE技术克隆了栉江珧(Atrina pectinata)wnt4基因cDNA全长序列。该基因序列全长为1493 bp,其中开放阅读框1074 bp,编码由357个氨基酸组成的蛋白。氨基酸序列分析表明,栉江珧wnt4基因具有wnt家族保守结构域,与栉孔扇贝(Chlamys farreri)、海胆(Paracentrotus lividus)等物种具有高度的同源性。荧光定量PCR分析表明,wnt4基因表达具有广泛性和组织差异性,且与性别和性腺繁殖周期相关。wnt4基因表达量与性腺成熟度相关,并且整个繁殖周期卵巢表达量均显著高于精巢,说明wnt4基因参与了栉江珧两性性腺的发育,并在卵巢中发挥更重要的作用。不同发育阶段胚胎荧光定量分析表明,wnt4基因主要参与了栉江珧的早期胚胎发育。在胚胎发育早期(囊胚期和原肠期)wnt4基因的表达水平最高,是成体表达量的500倍;在担轮幼虫和D形幼虫期迅速下降,暗示wnt4基因可能在栉江珧早期发育阶段参与了某些器官的形成。17β-雌二醇诱导实验显示,17β-雌二醇可能通过反馈调节抑制卵巢wnt4基因表达(P<0.05);短时间处理,17β-雌二醇能诱导精巢wnt4基因显著表达(P<0.05)。

关键词：栉江珧 wnt4 基因克隆 qRT-PCR 个体发育繁殖周期 17β-雌二醇

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栉江珧和近江牡蛎的精子超低温冷冻保存

农业生物技术学报 2016年第2期24卷 305-312页

作者：于非非余祥勇郑娇曹静王梅芳广东海洋大学水产学院

栉江珧(Atrina pectinata)和近江牡蛎(Crassostrea rivularis)是我国重要的海产经济贝类,建立其精子冷冻保存技术及精子冷冻库,对种质资源的保护和遗传育种具有重要意义。本研究对其精子冷冻保存过程中冷冻剂种类和浓度的选择、冷冻程... 详细信息

栉江珧(Atrina pectinata)和近江牡蛎(Crassostrea rivularis)是我国重要的海产经济贝类,建立其精子冷冻保存技术及精子冷冻库,对种质资源的保护和遗传育种具有重要意义。本研究对其精子冷冻保存过程中冷冻剂种类和浓度的选择、冷冻程序、平衡时间、保存体积、精液稀释方式、保存时间等多个影响因素进行了比较筛选,并利用显微镜直接检测和曙红Y(eosin Y)染色检测结合的方式检验精子存活率。结果表明,二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为抗冻剂的保存效果要明显优于甘油(glycerol,Gly),终浓度为8%~10%的二甲亚砜保存效果最好,其栉江珧和近江牡蛎精子活率均可达60%以上,而甘油保护下精子活率小于40%。精液的稀释方式采用将抗冻液等分为3份,依次与精液混合,每次间隔8 min,整个过程约30 min;此种精液稀释方式与一次性混合方式相比,精子活率可提高约30%。稀释后精液需要在4℃下平衡15~25 min,平衡样品与直接冷冻样品相比,精子活率提高约50%。精液降温程序为在样品投入液氮前,于液氮面以上15 cm处停留5 min,5 cm处停留10 min,精子活率可达60%以上;而未经此降温程序直接投入液氮中的样品精子活率接近0。与此降温程序相对应的样品冷冻体积在1.0~1.4 m L范围内为宜。冷冻180 d内复苏的精子活率由90%左右(鲜精)下降至60%左右,180 d后精子活率下降至56%左右。研究结果为栉江珧和近江牡蛎精子超低温冷冻保存、双壳类种质保护和遗传育种提供了理论和技术依据。

关键词：栉江珧近江牡蛎精子冷冻保存

栉江珧(Atrina pectinata)催产方法及幼虫培养条件

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渔业科学进展 2015年第6期36卷 127-133页

作者：郑言鑫杨爱国吴彪孙秀俊周丽青李东明董迎辉农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室浙江万里学院宁波315100

为探究江珧亲贝的最佳催产方法及减少工厂化育苗过程中栉江珧幼虫上浮粘连现象,分别研究了不同催产方法对受精率和胚胎发育的效果,不同培育密度和培育方式对幼虫生长发育的影响。结果显示,阴干4 h后用升温3℃的次氯酸钠中和海水,可诱导... 详细信息

为探究江珧亲贝的最佳催产方法及减少工厂化育苗过程中栉江珧幼虫上浮粘连现象,分别研究了不同催产方法对受精率和胚胎发育的效果,不同培育密度和培育方式对幼虫生长发育的影响。结果显示,阴干4 h后用升温3℃的次氯酸钠中和海水,可诱导亲贝大量排放精卵。并且对卵子受精及胚胎发育影响较小。幼虫培养实验结果显示,幼虫最适培育密度为1 ind/ml,在降低幼虫培育密度的同时,在培育池内安装造浪泵,使培育水体流动起来,能够有效减少幼虫的相互粘连提高幼虫的成活率。

关键词：栉江珧催产胚胎发育幼虫培育上浮粘连

基于线粒体COⅠ序列的南海北部栉江珧遗传多样性分析

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水生生物学报 2019年第3期43卷 494-503页

作者：于非非钟智明牛素芳杜晓东许开航林子腾张颖懿王家晋刘漫玲广东海洋大学水产学院湛江524088

为了解南海栉江珧(Atrina pectinata)的群体遗传变异特征,研究利用线粒体DNA COⅠ(细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ)基因部分序列对7个群体共191个栉江珧个体进行群体遗传多样性和遗传结构分析。结果显示:在600 bp长的序列中,共检测到113个核苷... 详细信息

为了解南海栉江珧(Atrina pectinata)的群体遗传变异特征,研究利用线粒体DNA COⅠ(细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ)基因部分序列对7个群体共191个栉江珧个体进行群体遗传多样性和遗传结构分析。结果显示:在600 bp长的序列中,共检测到113个核苷酸变异位点,定义了73个单倍型。南海北部栉江珧总体呈现较高的单倍型多样性(0.8996)和较高的核苷酸多样性(0.0257),但L1组内6个群体(汕头、阳江、湛江、海口、琼海、北海)呈现较高的单倍型多样性(0.8133—0.9286)和较低的核苷酸多样性(0.0033—0.0045)。单倍型系统发育树和网络支系图将7个群体划分为L1和L2(防城港群体)两大类群,但L1组单倍型并未表现出与地理位置相对应的谱系结构。F_(st)分析显示, L1组内6个群体间不存在明显的遗传分化(F_(st)=–0.0200—–0.0055, P>0.05),但L1组与L2组间存在极显著的遗传分化(F_(st)=0.8729—0.8821, P栉江珧可能已经分化为两个群体, L1组内6个群体具有频繁的基因交流,导致了较高的遗传同质性。

关键词：栉江珧南海北部遗传多样性 COⅠ

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栉江珧解剖卵的体外促熟研究

中国海洋大学学报（自然科学版） 2015年第12期45卷 38-42页

作者：李浩浩王昌勃于瑞海牟宗宝李琪中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室山东青岛266003

本研究探讨了在不同浓度或不同处理时间下氨海水、5-羟色胺、多巴胺和维生素对栉江珧(Atrina pectinata)解剖卵的促熟作用。通过体外浸泡的方法处理栉江珧卵母细胞使其成熟,并完成人工授精。研究表明:浓度0.008%~0.014%的氨海水处理40~6... 详细信息

本研究探讨了在不同浓度或不同处理时间下氨海水、5-羟色胺、多巴胺和维生素对栉江珧(Atrina pectinata)解剖卵的促熟作用。通过体外浸泡的方法处理栉江珧卵母细胞使其成熟,并完成人工授精。研究表明:浓度0.008%~0.014%的氨海水处理40~60min可显著提高栉江珧解剖卵的生发泡破裂率和受精率(P栉江珧解剖卵的促熟效果最好;而5-羟色胺、多巴胺和维生素对栉江珧解剖卵的体外促熟的效果不明显。通过人工授精、早期胚胎发育观察,本研究阐明了栉江珧卵子的最佳促熟条件,得到了育苗生产所需的幼虫量,为确立栉江珧人工育苗技术提供了基础资料。

关键词：栉江珧体外促熟卵细胞浓度时间

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栉江珧与旗江珧贝壳中黑色素的提取研究

栉江珧与旗江珧贝壳中黑色素的提取研究

作者：王晓娜烟台大学

学位级别：硕士

此研究是为了提取及鉴定栉江珧(Atrina pectinata)和旗江珧(Atrina vexillum)贝壳中的黑色物质,并鉴定是否为黑色素。实验选取了成体栉江珧和旗江珧,分别从这两种江珧的贝壳中提取黑色物质并加以鉴定。两种江珧经贝壳的提取清理、粉碎... 详细信息

此研究是为了提取及鉴定栉江珧(Atrina pectinata)和旗江珧(Atrina vexillum)贝壳中的黑色物质,并鉴定是否为黑色素。实验选取了成体栉江珧和旗江珧,分别从这两种江珧的贝壳中提取黑色物质并加以鉴定。两种江珧经贝壳的提取清理、粉碎、盐酸水解、水浴加热、乙醚抽脂,从3份栉江珧贝壳中提取了3份黑色固体物质,从3份旗江珧贝壳中提取了3份黑色固体物质,分别将两种江珧中提取的黑色物质溶解于0.01mol/L氢氧化钠溶液中,经紫外分光光度计在190-500nm波长下测紫外吸收光谱,两种江珧的最大吸收峰都在210-240nm,且随着波长增加其吸光值下降,与公认黑色素紫外吸收光谱一致;另外将从两种江珧中提取的两份黑色固体物质分别用进行傅里叶红外光谱扫描,其红外图谱都在3500300 cm、1670600cm和1100000 cm处分别有特征吸收峰,亦与公认的黑色素红外扫描图谱特征一致,从而首次确定栉江珧和旗江珧中的黑色物质为黑色素。黑色素不溶于水,而可溶性的黑色素在功能验证中才具有实用性,采用酸碱法并结合超声波破碎法,成功获取了可溶性的栉江珧和旗江珧贝壳中的可溶性黑色素,并通过紫外吸收和红外吸收检验,发现超声波处理之后,黑色素的化学性质并没有变化,但溶解性大大提高,为以后的江珧黑色素功能验证实验奠定了基础。本研究还存在不足之处,比如提取的黑色素为黑色素的粗制品,并没有黑色素的进一步提纯实验,且不能准确的测量出黑色素的确切纯度,这也许与生物体内黑色素本身就是混合物有一定关系。

关键词：栉江珧旗江珧黑色素提取鉴定

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栉江珧繁殖周期及苗种培育技术的研究

栉江珧繁殖周期及苗种培育技术的研究

作者：郑言鑫上海海洋大学

学位级别：硕士

栉江珧(Atrina pectinata)是广泛分布于温、热带近海海域的一种大型底栖双壳贝类,我国沿海北起辽东半岛,南至琼州海峡的潮间带到20 m深的浅海砂泥底质中,均可见其生活踪迹。目前关于栉江珧的研究相对较少,我国学者对于栉江珧的研究大约... 详细信息

栉江珧(Atrina pectinata)是广泛分布于温、热带近海海域的一种大型底栖双壳贝类,我国沿海北起辽东半岛,南至琼州海峡的潮间带到20 m深的浅海砂泥底质中,均可见其生活踪迹。目前关于栉江珧的研究相对较少,我国学者对于栉江珧的研究大约开始于上世纪60年代,已有的资料主要集中在栉江珧的分类学、形态学、资源、生化和繁殖生物学等方面,关于性腺发育、人工催产和幼虫培育条件的研究报道较少。多年来由于对栉江珧野生资源的过度捕捞,造成了野生资源总量急剧减少,为达到可持续采捕的目的,采用人工增殖是一个有效增加资源量的方法。因此,突破规模化人工育苗技术是目前急需解决的重要问题。论文以长岛野生栉江珧为材料,采用组织学方法研究了其性腺发育规律;比较了不同催产方法对卵子受精和胚胎发育的作用效果;观察了胚胎及浮游幼虫的生长发育规律;探讨了不同培育密度和培育方式条件下其浮游幼虫在存活和生长方面的差异。为栉江珧的苗种培育提供了参考资料,取得的主要结果如下:作者对长岛栉江珧周年取样观察,发现其雌雄比例为1:1,雌雄性腺发育基本同步,通过组织切片观察性腺发育情况,根据性腺中生殖细胞发育状况及滤泡细胞中各种细胞的比例,可分为五个时期,即增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期。在确定长岛栉江珧性腺发育时期的基础上确定生殖周期,长岛栉江珧性腺发育周期为一年,每年的12月月为增殖期,1月为生长期,5月为成熟期,7月为排放期,91月为休止期,全年只有一个繁殖盛期。栉江珧亲贝催产难是目前制约苗种规模化生产的主要问题之一。为探索栉江珧亲贝的最佳催产方法,实验研究了不同催产方法对卵子受精和胚胎发育的作用效果,结果表明,阴干4小时后用升温3℃的次氯酸钠中和海水刺激,可诱导亲贝大量排放精卵,且对卵子受精及胚胎发育影响较小,适合适合工厂化育苗过程中栉江珧亲贝的催产。栉江珧浮游期幼虫粘连的问题,是生产过程中造成幼虫死亡的主要原因。实验研究了不同培育密度和培育方式对幼虫生长发育和成活的影响,结果表明,降低幼虫培育密度可以提高幼虫成活率,但并不能完全解决粘连问题,为充分利用水体,在培育密度为1 ind/ml的条件下,应同时在幼虫培养池内加装冲浪泵,使培育水体流动起来,能够有效减少幼虫的粘连,提高幼虫的成活率。

关键词：栉江珧繁殖周期苗种培育