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柚皮甙对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

中国老年学杂志 2013年第24期33卷 6217-6219页

作者：刘丹孙品兰杨建平重庆三峡医药高等专科学校重庆404120

目的探讨柚皮甙对心肌缺血再灌注损伤保护作用及机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,柚皮甙低,中,高剂量组。采用结扎冠状动脉左前降支,引起心肌缺血,放松丝线给予再灌注的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。... 详细信息

目的探讨柚皮甙对心肌缺血再灌注损伤保护作用及机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,柚皮甙低,中,高剂量组。采用结扎冠状动脉左前降支,引起心肌缺血,放松丝线给予再灌注的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。柚皮甙低,中,高剂量组,于灌胃60 min后行缺血30 min,再灌注120 min,并监测其心律失常发生率。于再灌注结束后取心肌组织测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)活性,心肌组织中丙二醛(MDA)含量,电镜观察心肌细胞超微结构。结果与模型组相比,柚皮甙三个不同剂量组大鼠心律失常发生率、血清中CK、LDH活性和心肌组织中MDA含量降低(P柚皮甙对缺血再灌注损伤心肌具有保护作用,与其抗氧化活性、减轻心肌细胞超微结构病理改变有关。

关键词：柚皮甙心肌缺血缺血再灌注损伤超微结构

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柚皮甙干预鼠颅顶骨破骨细胞的形成及功能

中国组织工程研究 2013年第37期17卷 6561-6566页

作者：游涛王璐纪艳吴小红重庆医科大学附属口腔医院修复科重庆市401147 口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆市401147

背景:柚皮甙能诱导骨形态发生蛋白2的基因表达,促进成骨细胞系的增殖和分化。体外细胞实验提示柚皮甙有抑制破骨细胞的形成及抗骨质疏松的作用。目的:建立含有柚皮甙的鼠颅顶骨培养模型,观察不同剂量下柚皮甙对破骨细胞增殖分化的影响... 详细信息

背景:柚皮甙能诱导骨形态发生蛋白2的基因表达,促进成骨细胞系的增殖和分化。体外细胞实验提示柚皮甙有抑制破骨细胞的形成及抗骨质疏松的作用。目的:建立含有柚皮甙的鼠颅顶骨培养模型,观察不同剂量下柚皮甙对破骨细胞增殖分化的影响。方法:实验选取出生4 d的SD乳鼠颅顶骨,在分别含有0,1,10,100 mg/L的柚皮甙的培养基中培养,于培养的第1,3,7,10天测定柚皮甙对鼠颅顶骨中破骨细胞标志酶抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数及培养基中钙离子浓度的影响。结果与结论:第1天各组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数及培养基中钙离子浓度无明显变化,第3,7天各组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数随柚皮甙质量浓度增加而减少,而培养基中钙离子浓度变化明显增加,到第10天这种变化趋势最为明显。说明柚皮甙能影响鼠颅顶骨中抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数量及其功能,并且这种作用成明显的时间剂量相关性。提示柚皮甙不仅能促进成骨细胞的增殖,同时也能减少破骨细胞的分化或加速其凋亡。

关键词：组织构建骨组织构建柚皮甙抗酒石酸酸性磷酸酶破骨细胞成骨细胞骨组织培养钙离子颅顶骨细胞增殖国家自然科学基金

反相高效液相色谱法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮甙的含量

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色谱 2002年第6期20卷 585-586页

作者：李秀玲李龙肖红斌梁鑫淼中国科学院大连化学物理研究所辽宁大连116011 大连理工大学化工学院辽宁大连116011

采用高效液相色谱法测定了枳实和枳壳中的橙皮甙和柚皮甙含量。色谱柱为HypersilODS1柱(250mm×4 6mmi d ),流动相为乙腈 0 5%乙酸溶液(体积比为22∶78),流速为1 0mL/min,检测波长为283nm。柚皮甙和橙皮甙的线性范围分别为0 060g/L～0 6... 详细信息

采用高效液相色谱法测定了枳实和枳壳中的橙皮甙和柚皮甙含量。色谱柱为HypersilODS1柱(250mm×4 6mmi d ),流动相为乙腈 0 5%乙酸溶液(体积比为22∶78),流速为1 0mL/min,检测波长为283nm。柚皮甙和橙皮甙的线性范围分别为0 060g/L～0 604g/L和0 0125g/L～0 125g/L,柚皮甙和橙皮甙的平均回收率分别为97 1%和95 3%。该方法具有操作简便、分析快速、准确等优点。

关键词：反相高效液相色谱法测定橙波甙柚皮甙枳实枳壳植物药分析

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柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞的成骨特征

中国组织工程研究 2013年第14期17卷 2603-2608页

作者：杨渊李小峰罗道明温超海广西骨伤医院广西壮族自治区南宁市530012 广西中医学院广西壮族自治区南宁市530000

背景:骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效,其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化?目的:用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。方法:... 详细信息

背景:骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效,其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化?目的:用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。方法:用贴壁筛选法对兔骨髓间充质干细胞进行分离培养。对生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分别用50μg/L的柚皮甙和经典成骨诱导剂向成骨方向进行诱导,分别进行成骨鉴定。结果与结论:经典成骨诱导液、柚皮甙诱导液都能使骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,基质分泌增多,形成钙结节。用酶联免疫检测仪检测柚皮甙诱导组和经典成骨诱导组细胞吸光度值未见明显的差异。同时检测柚皮甙诱导液和L-DMEN细胞培养液的吸光度值发现两者差异无显著性意义(P>0.05)。证实柚皮甙可成功诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,无明显毒性作用。

关键词：干细胞干细胞培养与分化柚皮甙骨髓间充质干细胞成骨细胞细胞分化成骨诱导细胞培养碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原省级基金干细胞图片文章

柚皮甙诱导骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死

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中国组织工程研究 2012年第49期16卷 9232-9235页

作者：杨渊李小峰罗道明温超海广西骨伤医院广西壮族自治区南宁市530012 广西中医学院广西壮族自治区南宁市530000

背景:自体骨髓间充质干细胞体外诱导培养后的多方向分化潜能,体内植入能否修复股骨头坏死成为临床骨科的一个研究热点。目的:柚皮甙诱导的骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死头的作用。方法:柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化... 详细信息

背景:自体骨髓间充质干细胞体外诱导培养后的多方向分化潜能,体内植入能否修复股骨头坏死成为临床骨科的一个研究热点。目的:柚皮甙诱导的骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死头的作用。方法:柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,用自制同种异体松质骨载体负载,制备兔股骨头坏死模型,造模后第3周将12只成年新西兰大白兔随机数字表法分为2组,实验组左侧置入空白载体,对照组左侧不植入任何物品;两组右侧均置入复合有诱导后骨髓间充质干细胞的载体。结果与结论:植入后8周植入物表面有大量骨痂形成,与骨端连接紧密,少部形成连续性骨桥。12周部分充填区广布相对较成熟的骨小梁,但较正常骨小梁粗、排列不够规则,可见缺损区完全被新骨代替,提示柚皮甙诱导的骨髓间充质干细胞可修复兔股骨头坏死。

关键词：柚皮甙骨髓间充质干细胞股骨头坏死植入组织构建干细胞

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骨碎补中柚皮甙的薄层定性定量方法的研究

中国中药杂志 1998年第11期23卷 685-686页

作者：王跃生李计萍中国中医研究院中药研究所

目的：建立骨碎补中柚皮甙的薄层定性定量方法。方法：薄层层析鉴别和薄层扫描法含量测定。结果：可以鉴别出柚皮甙，其含量为７．３％。结论：定性鉴别方法简便可行，定量方法准确可靠，重复性好，平均回收率为１００．４８％，ＲＳＤ... 详细信息

目的：建立骨碎补中柚皮甙的薄层定性定量方法。方法：薄层层析鉴别和薄层扫描法含量测定。结果：可以鉴别出柚皮甙，其含量为７．３％。结论：定性鉴别方法简便可行，定量方法准确可靠，重复性好，平均回收率为１００．４８％，ＲＳＤ１．３７％（ｎ＝５）。

关键词：骨碎补柚皮甙薄层层析定量分析定性分析

柚皮甙复合自固化磷酸钙支架材料修复骨缺损的实验研究

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口腔医学研究 2011年第12期27卷 1039-1041页

作者：李勇李善昌宁尚波姜炳华闫磊佳木斯大学附属口腔医院口腔颌面外科黑龙江佳木斯157002 牡丹江市肿瘤医院

目的:探讨柚皮甙/自固化磷酸钙材料修复骨缺损的效果。方法:将柚皮甙与自固化磷酸钙复合,植入兔下颌骨的缺损区。分别在术后4、8、12周取材,进行大体观察、X线检测、扫描电镜、组织学观察、以及新骨的形成观察。结果:每时间点大体观察、... 详细信息

目的:探讨柚皮甙/自固化磷酸钙材料修复骨缺损的效果。方法:将柚皮甙与自固化磷酸钙复合,植入兔下颌骨的缺损区。分别在术后4、8、12周取材,进行大体观察、X线检测、扫描电镜、组织学观察、以及新骨的形成观察。结果:每时间点大体观察、X线、扫描电镜、组织学观察及新骨的形成,实验组均优于对照组。结论:柚皮甙/自固化磷酸钙材料具有明显加速成骨的作用。

关键词：骨缺损柚皮甙自固化磷酸钙

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不同产地枳壳中柚皮甙及辛弗林的含量测定

中药材 2000年第5期23卷 268-269页

作者：肖鸣吴永忠朱良辉曾宪仪胡世林江西省药物研究所南昌330029 中国中医研究院中药研究所北京100700

本文采用高效液相色谱法测定不同产地香橙枳壳柚皮甙及辛弗林含量,结果显示道地产区江西新干产的枳壳柚皮甙含量较高,江西弋阳产的枳壳(从道地产区江西新干引种)辛弗林含量最高。

关键词：枳壳柚皮甙辛弗林道地药材含量测定

柚皮甙对氨基糖甙类药物和顺铂引起的斑马鱼毛细胞损伤的保护作用

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柚皮甙对氨基糖甙类药物和顺铂引起的斑马鱼毛细胞损伤的保护作用

作者：李明山东大学

学位级别：硕士

研究目的接触耳毒性药物是导致听力损失的一个重要原因,每年约有3万名的儿童会因接受耳毒性药物治疗导致听力缺陷,造成严重的身体、社会和心理障碍。氨基糖甙类药物,包括庆大霉素（Gentamicin）和新霉素（Neomycin）等,和顺铂（Cisplati... 详细信息

研究目的接触耳毒性药物是导致听力损失的一个重要原因,每年约有3万名的儿童会因接受耳毒性药物治疗导致听力缺陷,造成严重的身体、社会和心理障碍。氨基糖甙类药物,包括庆大霉素（Gentamicin）和新霉素（Neomycin）等,和顺铂（Cisplatin）作为临床常用的抗生素和肿瘤化疗药,有很大概率会通过引起听觉毛细胞死亡的方式产生耳毒性。在这里,我利用模式生物斑马鱼,探索黄酮类化合物柚皮甙（Naringin）在拮抗氨基糖甙类药物和顺铂耳毒性方面的潜在应用价值,并研究其作用的机制。研究方法（1）药源性毛细胞损伤模型的构建。受精后五天（five days post-fertilization,dpf）的斑马鱼幼鱼,包括野生型AB和绿色荧光蛋白标记毛细胞的转基因斑马鱼Tg（Brn3c:GFP）,接受不同浓度和时间的耳毒性药物处理（庆大霉素50-150μmol/L,3h;新霉素 50-150 μmol/L,1h;顺铂 150-250 μmol/L,2h）。采用小鼠耳蜗毛细胞系HEI-OC1进行体外模型构建（庆大霉素50μmol/L,2h;新霉素50μmol/L,1h;顺铂 10 μmol/L,3h）。（2）采用预先及与耳毒性药物共孵育的方法检测柚皮甙拮抗药源性毛细胞损伤的效果:不同浓度的柚皮甙（100-400 μmol/L）预先处理斑马鱼3h,然后和不同浓度的耳毒性药物共同处理（庆大霉素100μmol/L,3h;新霉素100μmol/L,1h;顺铂200μmol/L,2h）。在斑马鱼测线毛细胞被耳毒性药物消耗殆尽后加入柚皮甙（400μmol/L,24h）,检测其促进毛细胞再生的效果。体外实验中柚皮甙（25-150μmol/L）单独处理或与耳毒性药物共处理HEI-OC1细胞。（3）应用免疫荧光技术标记斑马鱼测线毛细胞（抗myosinⅦa蛋白）和神经丘增殖细胞（抗Brdu）;活细胞染料FM1-43染色标记功能毛细胞;Tunel染色标记神经丘凋亡细胞;mito-SOX标记线粒体活性氧（Reactive oxygen species,ROS）;共聚焦显微镜拍照,记录存活毛细胞数量,对神经丘形态进行评分,量化荧光信号强度;体外实验中使用DCFH-DA探针标记ROS,应用流式细胞术标记凋亡细胞。（4）应用纸片扩散法药敏试验检测柚皮甙对氨基糖甙类药物抑菌（大肠杆菌）效果的影响,应用CCK-8和流式细胞术检测柚皮甙对顺铂杀伤肿瘤细胞（Hela细胞和4T1细胞）效果的影响。（5）应用实时荧光定量PCR技术检测斑马鱼和HEI-OC1细胞经过不同处理后与细胞凋亡（P53,Bax,Caspase-3和Bcl-2）和焦亡（斑马鱼:caspb,caspa;小鼠:Caspase-1,NLRP3）相关基因的mRNA水平的变化。研究结果（1）成功构建药源性毛细胞损伤模型,斑马鱼测线毛细胞经过耳毒性药物处理后不同程度丢失,神经丘形态受损;HEI-OC1细胞存活率降低。（2）柚皮甙有效改善氨基糖甙类药物和顺铂引起的毛细胞丢失和神经丘形态,提高HEI-OC1细胞存活率,并促进斑马鱼测线功能性毛细胞再生。（3）柚皮甙有效减弱氨基糖甙类药物和顺铂引起毛细胞凋亡、线粒体ROS聚集,并增加神经丘中增殖期细胞的数量。（4）柚皮甙不影响氨基糖甙类药物的抑菌效果,并促进顺铂杀伤肿瘤细胞。（5）无论是体内实验时候体外实验,柚皮甙都可以显著改善耳毒性药物引起的凋亡和焦亡相关基因表达（P＜0.05）。结论综上所述,本研究首次证实了柚皮甙对氨基糖甙类药物和顺铂诱发耳毒性的保护作用,并解释了可能的机制。我从抗凋亡、抗氧化、增殖和分化等方面证明了柚皮甙保障毛细胞存活的机制,并强调了其在临床应用中的潜力。

关键词：柚皮甙氨基糖甙类药物顺铂耳毒性斑马鱼