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柔肝方含药血清对TGF-β1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白的影响及其机制

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中国实验方剂学杂志 2015年第13期21卷 109-113页

作者：吴惠春张斌王灵台上海中医药大学附属曙光医院上海201203

目的:研究柔肝方含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常组、柔肝方低剂量(9 g·kg-1)给药3 d及5 d组、柔肝方高剂量(18 g·kg-1)给药3 d... 详细信息

目的:研究柔肝方含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常组、柔肝方低剂量(9 g·kg-1)给药3 d及5 d组、柔肝方高剂量(18 g·kg-1)给药3 d及5 d组,每组6只,按10 m L·kg-1·d-1灌服饮用水或柔肝方药液,制备含药血清。用含10%正常血清或含药血清的DMEM培养基体外培养LX-2人肝星状细胞株,MTT法检测细胞增殖;LX-2细胞经含10%正常血清或含药血清的培养基预处理24 h,再予TGF-β1(终质量浓度10μg·L-1)刺激24 h,收集细胞,RT-PCR法检测OPN mRNA表达,Western blot法检测OPN及磷酸化蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-PKB)蛋白表达。结果:与正常组比较,各含药血清组均能抑制LX-2细胞增殖(P柔肝方含药血清对TGF-β1诱导的人肝星状细胞表达OPN具有抑制作用,其机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路活化有关。

关键词：柔肝方骨桥蛋白肝星状细胞转化生长因子β1

柔肝方对肝阳上亢型高血压患者心率变异性影响

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柔肝方对肝阳上亢型高血压患者心率变异性影响

作者：何鑫广州中医药大学

学位级别：硕士

原发性高血压(Essential Hypertension)所引起的心、脑、肾等脏器损害的并发症是导致高血压死亡的主要原因。而心率变异性对慢性充血性心力衰竭、冠心病、高血压及肺心病的多种心血管疾病的病因、治疗和预后效果具有重要的指导意义。中... 详细信息

原发性高血压(Essential Hypertension)所引起的心、脑、肾等脏器损害的并发症是导致高血压死亡的主要原因。而心率变异性对慢性充血性心力衰竭、冠心病、高血压及肺心病的多种心血管疾病的病因、治疗和预后效果具有重要的指导意义。中医中药对治疗高血压及预防、延缓其并发症的发生、发展有较好的作用。本课题将针对肝阳上亢型高血压进行柔肝方干预治疗,评价柔肝方对肝阳上亢型高血压心率变异性的影响。以期为中医药防治高血压及预后,提供临床依据。目的:以中药柔肝方对肝阳上亢型高血压患者进行干预治疗,明确柔肝方对肝阳上亢型高血压的临床疗效,评价其对此类患者心率变异性的影响,为中医药治疗本病提供依据。方法:筛选2021年3月至2022年1月广东省第二中医院心血管科门诊部及住院部原发性高血压肝阳上亢型患者60例。按简单随机法分为试验组(柔肝方组)、对照组(西药组)各30例。两组皆使用苯磺酸氨氯地平(络活喜)5mg qd降压治疗,试验组予加用柔肝方治疗,疗程为8周,分别在治疗前、治疗后观察动态心电图,中医证候量表评价及诊室血压,并进行统计分析。结果:(1)共纳入60例患者,未见病例脱落,最终纳入分析60例(柔肝方组30例、对照组30例)。(2)治疗前:两组的合并疾病(如糖尿病、冠心病等)、高血压家族史、性别、吸烟史、饮酒史、工作性质、居住环境地、年龄、BMI指数、病程、平均静息心率、SDNN、SDANN、rMSSD、PNN50、中医证候积分等方面均无明显差异(P>0.05),两组具有可比性。(3)治疗8周后:试验组、对照组的中医证候量表总有效率分别是90%和70%,两组显著差异(P柔肝方治疗和单纯西药治疗均能明显改善肝阳上亢型高血压患者的临床症状,并显著改善心率变异性;但柔肝方组总体疗效更佳,是一种值得推广的有效的中医治疗方法。

关键词：高血压肝阳上亢心率变异性柔肝方苯磺酸氨氯地平

柔肝方对肝纤维化小鼠肝脏内IL-22分泌和IL-22R1表达作用的研究

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上海中医药大学学报 2022年第5期36卷 69-76页

作者：厉姣龙周振华上海中医药大学上海中医药大学附属曙光医院上海201203

目的:监测柔肝方对刀豆蛋白A(ConA)联合3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)诱导的肝纤维化小鼠肝脏内白介素-22(IL-22)分泌及白介素-22受体1(IL-22R1)表达的影响,探讨柔肝方抗肝纤维化的作用机制。方法:60只小鼠随机分为... 详细信息

目的:监测柔肝方对刀豆蛋白A(ConA)联合3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)诱导的肝纤维化小鼠肝脏内白介素-22(IL-22)分泌及白介素-22受体1(IL-22R1)表达的影响,探讨柔肝方抗肝纤维化的作用机制。方法:60只小鼠随机分为对照组、模型组和柔肝方组,每组20只。模型组和柔肝方组小鼠尾静脉注射ConA,每周1次,并予DDC饮食;对照组小鼠尾静脉注射等体积0.9%NaCl溶液,正常饮食。柔肝方组小鼠按8.5 g/kg灌胃给予柔肝方颗粒,每天1次;对照组和模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。药物连续干预10周。10周后处死小鼠,监测各组小鼠肝功能、肝脏中IL-22分泌及IL-22R1表达。结果:(1)与对照组比较,模型组和柔肝方组小鼠肝脏中IL-22、IL-22R1、IL-10R2和STAT3 mRNA表达明显升高(P柔肝方组小鼠肝脏中IL-22和IL-10R2 mRNA表达明显升高(P肝星状细胞(HSCs)表面的IL-22R1 mRNA表达明显升高(P柔肝方组HSCs表面的IL-22R1和IL-10R2 mRNA表达明显升高(P柔肝方组HSCs内的STAT3 mRNA表达升高(P柔肝方组HSCs表面的IL-22R1 mRNA和HSCs内的STAT3 mRNA表达明显升高(P柔肝方组Th22细胞数量明显增加(P柔肝方组Th22细胞数量明显增加(P柔肝方可增加肝脏内IL-22分泌及HSCs表面IL-22R1的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。

关键词：柔肝方肝纤维化 IL-22 IL-22R1

柔肝方联合恩替卡韦治疗乙肝后肝纤维化的临床观察

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云南中医学院学报 2019年第3期42卷 49-52页

作者：吴惠春秦爱兰赵卫峰甘建和苏州大学附属第一医院感染病科江苏苏州215006

目的观察柔肝方联合恩替卡韦治疗乙肝后肝纤维化的临床疗效。方法选取我院门诊诊治的乙肝后肝纤维化患者60例,随机分为对照组和观察组各30例。对照组予以恩替卡韦治疗,观察组予以柔肝方联合恩替卡韦治疗,疗程为3个月。比较2组患者临床... 详细信息

目的观察柔肝方联合恩替卡韦治疗乙肝后肝纤维化的临床疗效。方法选取我院门诊诊治的乙肝后肝纤维化患者60例,随机分为对照组和观察组各30例。对照组予以恩替卡韦治疗,观察组予以柔肝方联合恩替卡韦治疗,疗程为3个月。比较2组患者临床疗效、治疗前后肝功能指标及肝脏弹性值。结果观察组总有效(86.67%)明显高于对照组总有效率(63.33%);治疗前后比较,观察组肝功能指标、肝脏弹性值改善均优于对照组,两者比较差异具有统计学意义(P柔肝方联合恩替卡韦治疗乙肝后肝纤维化疗效肯定,能改善患者肝功能,延缓病情进展,提高患者生活质量。

关键词：柔肝方恩替卡韦乙肝后肝纤维化中西医结合疗法

柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究

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上海中医药杂志 2020年第S01期54卷 167-170,176页

作者：黄凌鹰张鑫李曼陈博武徐张迎张雪唐亦非高月求杨婉凤上海中医药大学附属曙光医院肝病科上海市中医临床重点实验室上海201203

目的评价柔肝方对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及对Dectin-1、Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法C57BL小鼠60只,随机分为对照组、模型组和柔肝方组。模型组与柔肝方组均腹腔注射CCl4,每周3次,共6周;其中第3周起两组分别给予0.9%NaCl... 详细信息

目的评价柔肝方对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及对Dectin-1、Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法C57BL小鼠60只,随机分为对照组、模型组和柔肝方组。模型组与柔肝方组均腹腔注射CCl4,每周3次,共6周;其中第3周起两组分别给予0.9%NaCl溶液与柔肝方灌胃,干预6周。检测各组小鼠肝功能,肝组织中Dectin-1、TLR4及相关下游蛋白和mRNA的水平,探讨柔肝方的抗肝纤维化作用。结果柔肝方组ALT、AST明显低于模型组,ALB明显高于模型组(P柔肝方组肝脏假小叶形成和纤维化程度以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)水平明显低于模型组(P柔肝方组Dectin-1表达高于模型组(P柔肝方组肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子受体(TGF-β1 R)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)表达均明显低于模型组(P柔肝方组脊髓趋化因子受体2(CCR2)表达也明显低于模型组(P柔肝方具有较好的抗肝纤维化的作用,其机制可能与上调Dectin-1、下调TLR4的表达有关,也可能与下调CCR2表达有关。

关键词：柔肝方 Dectin-1 TLR4 肝纤维化

柔肝方对刀豆蛋白A诱导肝纤维化模型小鼠的肝脏胶原代谢的影响

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柔肝方对刀豆蛋白A诱导肝纤维化模型小鼠的肝脏胶原代谢的影响

柔肝方含药血清对纤维化蛋白诱导人肝星状细胞活化的影响及其机制

第二十四次全国中西医结合肝病学术会议

作者：高月求吴惠春李曼周振华孙学华上海中医药大学附属曙光医院肝病科

目的:研究柔肝方对刀豆蛋白A诱导肝纤维化模型小鼠的肝脏胶原代谢的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组及柔肝组,模型组以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)(12.5mg/kg小鼠体重)尾静脉注射制作肝纤维化模型,每周一次;柔肝组... 详细信息

目的:研究柔肝方对刀豆蛋白A诱导肝纤维化模型小鼠的肝脏胶原代谢的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组及柔肝组,模型组以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)(12.5mg/kg小鼠体重)尾静脉注射制作肝纤维化模型,每周一次;柔肝组在造模当日予灌服柔肝方药液(10ml/kg小鼠体重),每天一次,10周后处死小鼠,留取肝组织。试剂盒法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量;天狼猩红染色,观察肝脏胶原沉积;RT-PCR法检测肝脏胶原(Collages,Cols)、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)、特异性金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue inhibitor ofmatrix metalloproteinases,TIMPs)mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠肝组织Hyp水平明显上升(P肝脏天狼猩红染色可以见到大量胶原沉积;肝组织Co1s、MMPs、TIMPs mRNA明显上调(P柔肝组小鼠肝脏Hyp水平明显下降(P肝组织胶原沉积显著改善,柔肝组小鼠Cols、MMPs、TIMPs表达以明显下调(P柔肝方可通过抑制胶原合成、促进胶原降解发挥抗肝纤维化作用。

关键词：柔肝方胶原代谢刀豆蛋白A 抗肝纤维化

来源： cnki会议评论

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柔肝方含药血清对纤维化蛋白诱导人肝星状细胞活化的影响及其机制

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术和网络药理学探讨柔肝方抗肝纤维化的作用机制

第二十四次全国中西医结合肝病学术会议

作者：高月求吴惠春李曼周振华孙学华上海中医药大学附属曙光医院肝病科

目的:研究柔肝方含药血清对纤维化蛋白(FBRS)诱导人肝星状细胞系LX-2活化的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常对照组、柔肝方给药组,按10m1/kg/d灌服饮用水或柔肝方药液,共3d,制备含药血清。用含10%对照血清或含药血清的D... 详细信息

目的:研究柔肝方含药血清对纤维化蛋白(FBRS)诱导人肝星状细胞系LX-2活化的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常对照组、柔肝方给药组,按10m1/kg/d灌服饮用水或柔肝方药液,共3d,制备含药血清。用含10%对照血清或含药血清的DMEM培养基体外培养LX-2人肝星状细胞株,MTT法检测细胞增殖;LX-2细胞经含10%对照血清或含药血清的培养基预处理24 h,再予FBRS(终浓度10 ng/ml)刺激15min/12h/24 h,收集细胞,RT-PCR法检测α-SMA、ColⅠmRNA表达,免疫荧光法、Western blot法检测α-SMA、ColⅠ、p-p38和p38蛋白表达。结果:与对照组相比,FBRS刺激后LX-2细胞的α-SMA和ColⅠ表达明显增加;与FBRS刺激组相比,柔肝方含药血清组,α-SMA、ColⅠ表达明显降低(P柔肝方对FBRS诱导的LX-2细胞P38信号的活化具有明显的下调作用。结论:柔肝方含药血清对FBRS诱导的人肝星状细胞活化具有抑制作用,其机制可能与抑制p38信号通路活化有关。

关键词：柔肝方肝纤维化蛋白肝星状细胞 LX-2 抗肝纤维化

来源： cnki会议评论

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河南中医 2024年第7期44卷 1070-1078页

作者：游丽萍林佳成李文轩孔晓妮高月求王灵台孙学华上海中医药大学附属曙光医院上海201203

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术和网络药理学探讨柔肝方治疗肝纤维化的作用机制。方法:将8只C57BL/J小鼠随机分成空白血清组和柔肝方含药血清组,每组4只。利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术结合Xcalibur软... 详细信息

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术和网络药理学探讨柔肝方治疗肝纤维化的作用机制。方法:将8只C57BL/J小鼠随机分成空白血清组和柔肝方含药血清组,每组4只。利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术结合Xcalibur软件分析空白血清和柔肝方含药血清数据,结合二级谱图鉴定柔肝方的入血成分。通过Swiss Target Prediction数据库和中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索柔肝方入血成分的靶点。利用GeneCards、OMIM、PharmGKB、DrugBank Online和Therapeutic Target Database数据库检索肝纤维化的靶点。采用Cytoscape软件构建“疾病-化合物-靶点”网络,并筛选柔肝方抗肝纤维化的关键成分。借助STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,通过拓扑分析筛选柔肝方抗肝纤维化的核心靶点。采用DAVID数据库进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。结果:柔肝方入血成分主要包括氧化槐果碱、槐果碱、高黄芩素、新补骨脂异黄酮等。通过检索获取柔肝方入血成分相关靶点303个,肝纤维化相关靶点6 331个,两者的交集靶点250个。柔肝方抗肝纤维化的关键成分包括槲皮素、芹菜素、山柰酚、芒柄花黄素等。柔肝方抗肝纤维化的核心靶点包括原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(SRC)、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,PKB,又称AKT1)等。GO分析主要涉及细胞因子介导的信号通路、凋亡过程的负调控、炎症反应、蛋白激酶活性等。KEGG分析主要涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、白细胞介素(interleukin,IL)-17信号通路、HIF-1信号通路等。结论:柔肝方可能通过槲皮素、芹菜素、山柰酚等化合物调控PI3K-Akt、MAPK、IL-17等信号通路,作用于SRC、STAT3、MAPK1等靶点,从而发挥抗肝纤维化的作用,体现了多成分、多途径、多靶点的药理特征。

关键词：柔肝方肝纤维化 UPLC-Q-TOF-MS/MS 网络药理学入血成分小鼠

柔肝方通过抑制纤维化蛋白抗肝纤维化的机制研究

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中国免疫学杂志 2022年第3期38卷 263-269页

作者：李茜吴惠春谭家鑫黄凌鹰高月求李曼上海中医药大学附属曙光医院上海市中医临床重点实验室细胞免疫学实验室上海201203

目的:柔肝方是上海市名中医王灵台教授治疗肝纤维化的临床有效验方,本研究旨在探讨柔肝方通过抑制纤维化蛋白(FBRS)抗肝纤维化的分子机制。方法:质谱法鉴定柔肝方的化学成分及其入血成分。BALB/c小鼠随机分对照组、模型组、柔肝方高剂... 详细信息

目的:柔肝方是上海市名中医王灵台教授治疗肝纤维化的临床有效验方,本研究旨在探讨柔肝方通过抑制纤维化蛋白(FBRS)抗肝纤维化的分子机制。方法:质谱法鉴定柔肝方的化学成分及其入血成分。BALB/c小鼠随机分对照组、模型组、柔肝方高剂量组、柔肝方中剂量组和柔肝方低剂量组。通过尾静脉注射ConA(12.5 mg/kg),每周1次,共10周,建立肝纤维化小鼠模型。体外应用重组FBRS蛋白刺激人肝星状细胞系(LX2细胞),并用柔肝方大鼠药物血清干预。肝组织HE染色、天狼猩红染色和Masson染色。生化法检测血清ALT、AST、肝纤四项(LN、HA、PⅢNP、Col-Ⅳ)表达水平。Western blot法检测肝组织α-SMA,Western blot法和ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、TGF-β1、FBRS的表达水平。结果:各剂量柔肝方均可减少ConA肝纤维化模型小鼠肝脏的胶原沉积,且呈剂量依赖性抑制;柔肝方可明显降低模型小鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达水平;体外应用重组FBRS蛋白可上调LX2细胞的α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达,柔肝方药物血清可抑制FBRS介导的LX2细胞的活化及胶原表达。质谱分析鉴定淫羊藿苷、丹酚酸B、绿原酸是柔肝方中含量较高的活性成分。结论:柔肝方通过下调肝星状细胞FBRS的表达抑制其活化及胶原沉积,发挥抗肝纤维化作用。

关键词：柔肝方纤维化蛋白肝纤维化肝星状细胞