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基于胆汁酸、TGR5受体枳术丸治疗脾虚型慢传输便秘疗效及机制初探

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基于胆汁酸、TGR5受体枳术丸治疗脾虚型慢传输便秘疗效及机制初探

作者：于爽天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究枳术丸对脾虚型STC小鼠的治疗效果,初步探讨枳术丸对STC的治疗作用是否与调节结肠胆汁酸、TGR5受体促进5-HT释放有关,初步探讨枳术丸对胆汁酸的影响是否通过调节肠道菌群而实现。方法:通过“灌服番泻叶水煎液+隔天喂低纤维饲... 详细信息

目的:研究枳术丸对脾虚型STC小鼠的治疗效果,初步探讨枳术丸对STC的治疗作用是否与调节结肠胆汁酸、TGR5受体促进5-HT释放有关,初步探讨枳术丸对胆汁酸的影响是否通过调节肠道菌群而实现。方法:通过“灌服番泻叶水煎液+隔天喂低纤维饲料和限制饮水”复合因素造模法复制脾虚型STC模型,灌胃低、中、高剂量枳术丸水煎液进行治疗。观察小鼠的一般状况、粪便状况,统计分析小鼠体重、粪便质量、粪便水含量,墨水试验检测小鼠肠道推进率;ELISA法检测各组小鼠血清及结肠中5-HT含量;液相色谱-质谱联用分析各组小鼠结肠内容物中胆汁酸含量;q PCR法检测各组小鼠结肠tgr5 mRNA表达量,Western blot法检测各组小鼠结肠TGR5蛋白表达量;Pearson相关性分析法分析5-HT及便秘疗效评价指标与胆汁酸变化相关性;荧光共定位法分析5-HT表达与TGR5表达相关性;16Sr DNA扩增子测序分析各组小鼠结肠中菌群变化情况,Pearson相关性分析法分析胆汁酸变化与菌群变化相关性。结果:1.枳术丸改善脾虚型STC模型小鼠脾虚、便秘的一般状态:脾虚型STC组小鼠具有消瘦、活动量减少、四肢无力、反应迟钝、粪便质硬、数量少、颗粒小等脾虚、便秘的表现;枳术丸低、中、高剂量组小鼠一般状态较脾虚型STC组小鼠明显好转,毛发逐渐有光泽,外观较前饱满,活动量逐渐增加,四肢逐渐有力,反应尚灵敏,粪便较湿润,颗粒较大,便量较多。2.枳术丸缓解脾虚型STC模型小鼠的体重降低:自造模后,对照组小鼠体重渐增,脾虚型STC组小鼠体重渐减,枳术丸低、中、高剂量组小鼠在给药4周前体重渐减,给药4周后体重有所增加,呈先下降后上升的趋势。给药结束后,与对照组相比,脾虚型STC组小鼠体重明显下降（P＞0.05）,枳术丸低、中、高剂量组可在不同程度上缓解脾虚型STC小鼠的体重下降（P＞0.05）。2.枳术丸明显增加脾虚型STC模型小鼠的粪便质量、粪便含水量及肠道推进率:与对照组比较,脾虚型STC组小鼠粪便质量、粪便水含量、肠道推进率显著降低（P＜0.01）,与脾虚型STC组比较,枳术丸低剂量组小鼠粪便质量、粪便水含量、肠道推进率显著增加（P＜0.01）,枳术丸中剂量组小鼠粪便质量、粪便水含量显著增加（P＜0.05）、肠道推进率显著增加（P＜0.01）,枳术丸高剂量组小鼠粪便质量、粪便水含量有所增加（P＞0.05）,肠道推进率显著增加（P＜0.01）。3.枳术丸明显增加脾虚型STC模型小鼠结肠、血清5-HT含量:与对照组比较,脾虚型STC组小鼠结肠、血清5-HT含量明显降低（P＜0.05）;与脾虚型STC组比较,枳术丸低、中、高剂量组小鼠结肠、血清5-HT含量明显增加（P＜0.05）。4.枳术丸明显增加脾虚型STC模型小鼠结肠内容物中的胆汁酸含量,结肠、血清5-HT含量增加及便秘疗效指标改善与胆汁酸含量增加相关:与对照组相比,脾虚型STC组小鼠结肠内容物中总胆汁酸含量显著减少（P＜0.01）,与脾虚型STC组相比,枳术丸低剂量组小鼠结肠内容物中总胆汁酸含量显著增加（P＜0.05）。对照组、脾虚型STC组和枳术丸低剂量组三组的各种胆汁酸含量存在明显差异,HDCA、DCA、β-MCA、Apo CA、α-MCA、12-KLCA、7-KDCA、CA含量组间差异最为显著,与对照组相比,脾虚型STC组小鼠结肠内容物中HDCA、DCA、β-MCA、α-MCA、12-KLCA水平显著下调（P＜0.05）,与脾虚型STC组小鼠相比,枳术丸低剂量组小鼠结肠内容物中HDCA、DCA、β-MCA、Apo CA、α-MCA显著上调（P＜0.05）。Pearson相关性分析表明5-HT及便秘疗效指标变化与HDCA、DCA、β-MCA、α-MCA、12-KLCA、CA变化呈正相关。5.枳术丸明显增加脾虚型STC模型小鼠结肠中tgr5 mRNA及TGR5蛋白的表达,结肠5-HT增加与结肠TGR5蛋白增加相关:q PCR与WB结果表明,与对照组相比,脾虚型STC组结肠中tgr5 mRNA及TGR5蛋白表达量明显降低（P＜0.05）;与脾虚型STC组相比,枳术丸低、中、高剂量组小鼠结肠中tgr5 mRNA及TGR5蛋白表达量明显增加（P＜0.05）,荧光共定位结果表明,5-HT和TGR5有共定位关系,相关性较强。6.枳术丸对胆汁酸的影响与调节肠道菌群有关:16Sr DNA测序结果表明,胆汁酸代谢相关菌群——杆菌纲、乳杆菌目、乳杆菌科、乳杆菌属在模型组中丰度下调,在枳术丸灌胃治疗后丰度上调,并与12-KLCA、DCA、Apo CA、α-MCA、HDCA、β-MCA、CA存在正相关关系。结论:1.枳术丸可改善脾虚型STC模型小鼠脾虚、便秘的一般状态,缓解脾虚型STC模型小鼠的体重降低,增加脾虚型STC模型小鼠的粪便质量、粪便含水量及肠道推进率,对脾虚型STC小鼠具有治疗作用。2.脾虚型STC小鼠结肠5-HT降低

关键词：肠道菌群胆汁酸 TGR5 慢传输便秘脾虚型枳术丸

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枳术丸加减治疗胃食管反流病的临床观察

中国中西医结合杂志 2004年第1期24卷 25-27页

作者：陈建永邱建荣潘锋丁勇浙江省中西医结合医院杭州310003

目的 :观察枳术丸加减方治疗胃食管反流病 (gastro esophagealrefluxdisease ,GERD)的疗效 ,并探讨其作用机制。方法 :将 6 3例GERD患者随机分为治疗组 (30例 )和对照组 (33例 ) ,治疗组以枳术丸加减方治疗 ,每日 1剂 ,分 2次服 ,每次 1... 详细信息

目的 :观察枳术丸加减方治疗胃食管反流病 (gastro esophagealrefluxdisease ,GERD)的疗效 ,并探讨其作用机制。方法 :将 6 3例GERD患者随机分为治疗组 (30例 )和对照组 (33例 ) ,治疗组以枳术丸加减方治疗 ,每日 1剂 ,分 2次服 ,每次 10 0ml,餐前 0 5h服 ;对照组以雷尼替丁片 0 15 g ,每天 2次 ,西沙比利片 10mg ,每天 3次 ,均餐前服 ,疗程均为 8周。分别检测和记录两组治疗前后症状评分、内镜检查、食管压力测定、2 4hpH监测和胃动素 ,观察上述指标治疗前后两组间变化情况。结果 :两组治疗后其症状积分、食管压力测定、2 4hpH监测和血胃动素水平均较治疗前有改善 (P 枳术丸加减方具有较好的治疗GERD效果。

关键词：枳术丸胃食管反流病临床观察中医药疗法

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枳术丸对功能性消化不良的治疗作用机制探讨

中医药临床杂志 2022年第1期34卷 96-102页

作者：何凡应徐汪君黄柳向湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的:运用网络药理学技术探讨枳术丸对功能性消化不良的作用机制。方法:在TCMSP平台中检索出枳术丸的有关活性成分并进行初步筛选,借助R语言与Uniprot数据库找到活性成分对应的统一规范靶点,在GeneCards数据库中检索到功能性消化不良的... 详细信息

目的:运用网络药理学技术探讨枳术丸对功能性消化不良的作用机制。方法:在TCMSP平台中检索出枳术丸的有关活性成分并进行初步筛选,借助R语言与Uniprot数据库找到活性成分对应的统一规范靶点,在GeneCards数据库中检索到功能性消化不良的作用靶点并进行初步筛选。将二者得到的靶点取交集得到共同靶点,把共同靶点导入String数据库得到PPI蛋白互作网络图。再在DAVID数据库中导入共同靶点信息进行GO分析和KEGG分析。结果:检索筛选得到枳术丸活性成分29种,对应靶点62个,功能性消化不良靶点553个,共同靶点23个。其中关键靶点有EGFR、IL6、VEGFA、CASP3,主要参与凋亡负调控、上皮细胞增殖、氨基酸反应、雌二醇反应、一氧化氮合成等生物进程,涉及的通路有癌症途径、HIF-1信号通路、TNF信号通路等。结论:枳术丸对功能性消化不良的治疗是多成分、多靶点、多途径共同作用的结果,有助于进一步阐释枳术丸的药理作用机制。

关键词：网络药理学枳术丸共同靶点功能性消化不良

枳术丸对脾虚证慢传输型便秘小鼠结肠黏膜AQP3、AQP9的影响

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湖南中医药大学学报 2023年第6期43卷 999-1005页

作者：汤文娟夏旭婷刘富林湖南中医药大学研究生院湖南长沙410208 湖南中医药大学中医学院湖南长沙410208

目的观察枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)小鼠结肠AQP3、AQP9表达的影响,探讨枳术丸改善STC症状的可能作用机制。方法将50只SPF级昆明小鼠随机分成正常组(15只)和造模组(35只),造模组采用复合因素法(番泻叶... 详细信息

目的观察枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)小鼠结肠AQP3、AQP9表达的影响,探讨枳术丸改善STC症状的可能作用机制。方法将50只SPF级昆明小鼠随机分成正常组(15只)和造模组(35只),造模组采用复合因素法(番泻叶+限水+控制饮食)建立脾虚证STC小鼠模型,造模成功后造模组小鼠按体质量随机分为模型组(10只)、枳术丸组(10只)、莫沙必利组(10只)。连续给药7 d后,检测各组小鼠的粪便含水量、肠道推进率、血清木糖含量及结肠黏膜组织病理学特征;免疫组化及Western blot法检测AQP3、AQP9蛋白表达。结果与正常组相比,模型组小鼠粪便含水量显著减少,肠道推进率显著降低,血清木糖含量显著降低,小鼠结肠黏膜AQP3表达显著增多,AQP9表达显著减少(P枳术丸组小鼠粪便含水量显著增加(P枳术丸组小鼠肠道推进率升高(P0.05)。结论STC的发病与结肠黏膜AQP3上调、AQP9下调有关,枳术丸可以通过下调AQP3的表达、上调AQP9的表达,增加粪便的含水量而改善STC。

关键词：慢传输型便秘枳术丸脾虚证结肠黏膜 AQP3 AQP9

枳术丸对脾虚证慢传输型便秘小鼠肠道运动及PLC-γ_1/PLC-γ_2信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第10期25卷 8-14页

作者：王伟松夏旭婷刘富林王文凤陈雨波滕广飞王婷涂琴蓉湖南中医药大学第一附属医院长沙410000 湖南中医药大学中医学院长沙410000 湖南中医药大学招生就业处长沙410000 湖南中医药大学第二附属医院长沙410000

目的:探讨枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(STC)小鼠肠道传导功能的干预作用,及对小鼠结肠组织磷脂酶C-γ_1(PLC-γ_1)/磷脂酶C-γ_2(PLC-γ_2)信号通路表达的影响。方法:将无特定病原体(SPF)健康小鼠随机分为正常组与造模组。采用番泻叶灌... 详细信息

目的:探讨枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(STC)小鼠肠道传导功能的干预作用,及对小鼠结肠组织磷脂酶C-γ_1(PLC-γ_1)/磷脂酶C-γ_2(PLC-γ_2)信号通路表达的影响。方法:将无特定病原体(SPF)健康小鼠随机分为正常组与造模组。采用番泻叶灌胃造成脾虚状态,然后控制饮食饮水的方法造成脾虚便秘的小鼠模型,造模完成后将模型组小鼠随机分为模型组、枳术丸组、莫沙必利组,枳术丸组按9. 0 g·kg^(-1)·d^(-1)给药,莫沙必利组按2. 5 mg·kg^(-1)·d^(-1)给药,模型组和正常组给予等剂量的蒸馏水,连续给药7 d,治疗完成后用印度墨水在结肠中推进的长度计算小鼠肠道推进率;用D-木糖试剂盒测定小鼠血清D-木糖含量;用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理改变;采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织PLC-γ_1,PLC-γ_2蛋白的表达水平;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测PLC-γ_1,PLC-γ_2mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肠道推进率及血清D-木糖值均显著降低(P 枳术丸组和莫沙必利组小鼠肠道推进率及血清D-木糖含量均显著增加(P 枳术丸可有效促进脾虚便秘小鼠的肠道运动,改善便秘症状,其相关的作用机制可能与提高脾虚便秘小鼠结肠组织中PLC-γ_1与PLC-γ_2的表达有关。

关键词：枳术丸便秘慢传输型便秘磷脂酶C-γ1/磷脂酶C-γ2信号通路

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枳术丸与枳术颗粒多成分对比分析研究

中草药 2018年第10期49卷 2394-2400页

作者：马新玲宋志前王淳刘元艳宁张弛甘嘉荷梁东蕊刘振丽中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 北京中医药大学中药学院北京100102

目的建立液质分析方法,对比收载于《中国药典》2015年版的同方不同剂型的枳术丸和枳术颗粒中20个活性成分的含量。方法按《中国药典》2015年版制备工艺,采用3批原料制备枳术丸和枳术颗粒。建立高效液相色谱-三重四级杆-质谱(HPLC-Qq Q-... 详细信息

目的建立液质分析方法,对比收载于《中国药典》2015年版的同方不同剂型的枳术丸和枳术颗粒中20个活性成分的含量。方法按《中国药典》2015年版制备工艺,采用3批原料制备枳术丸和枳术颗粒。建立高效液相色谱-三重四级杆-质谱(HPLC-Qq Q-MS)分析2种剂型中20个活性成分含量的方法。色谱条件为Poroshell 120 SB-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱条件:0~7 min,23%B;7~17 min,23%~80%B;17~20 min,80%~100%B,20~30 min,100%B;体积流量0.5 m L/min;柱温30℃。结果 3批原料制备的枳术丸和枳术颗粒成品,20个活性成分的日服用量,丸剂是颗粒剂的1.48~13.37倍,总量相差493.01~615.07 mg。其中热不稳定性成分白术内酯I、白术内酯II和白术内酯III相差的倍数最大,其次为水溶性较差的川陈皮素。结论枳术丸和枳术颗粒成品中活性成分含量有明显差异,尤其是处方中水溶性差、热不稳定的成分。

关键词：枳术丸枳术颗粒剂型高效液相色谱-三重四级杆-质谱芦丁圣草次苷芸香柚皮苷野漆树苷柚皮苷橙皮苷新橙皮苷柚皮素芹菜素香叶木素橙皮素甜橙黄酮川陈皮素白术内酯Ⅲ 橘皮素 5-去甲川陈皮素白术内酯Ⅱ 白术内酯Ⅰ 橙皮油素佛手柑素

枳术丸联合艾灸治疗功能性消化不良的队列研究

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中国处方药 2023年第4期21卷 115-117页

作者：谢雪梁明辉重庆市渝北区人民医院重庆401120 广州中医药大学第一附属医院广州510000

目的探究枳术丸联合艾灸治疗功能性消化不良的疗效。方法以前瞻性队列研究的方法将重庆市渝北区人民医院收治的功能性消化不良的患者84例按照其意愿分为观察组42例,对照组42例。对照组应用枳术丸治疗,观察组在对照组的基础上应用艾灸治... 详细信息

目的探究枳术丸联合艾灸治疗功能性消化不良的疗效。方法以前瞻性队列研究的方法将重庆市渝北区人民医院收治的功能性消化不良的患者84例按照其意愿分为观察组42例,对照组42例。对照组应用枳术丸治疗,观察组在对照组的基础上应用艾灸治疗,两组患者每日治疗一次,连续治疗2周。应用罗马Ⅳ中的临床症状积分评估患者临床症状,采用广泛性焦虑量表评估患者焦虑情况,应用尼莫地平法计算临床疗效。结果治疗后评估结果显示所有受试者均呈现好转状态。对比两组临床症状积分,其结果显示观察组的症状积分低于对照组(P枳术丸联合艾灸治疗功能性消化不良的疗效显著,可以更有效减轻患者的临床症状,缓解患者的焦虑情绪。

关键词：枳术丸艾灸功能性消化不良队列研究

枳术丸合四逆散治疗肝郁气滞证便秘型肠易激综合征的临床效果及对胃肠激素的影响

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广西医学 2023年第24期45卷 2972-2976,2989页

作者：徐逸庄瑞斐陈亮景姗杨芳南京中医药大学南通附属医院·南通市中医院脾胃病科江苏省南通市226000

目的探讨枳术丸合四逆散治疗肝郁气滞证便秘型肠易激综合征(IBS-C)的临床效果及对患者胃肠激素的影响。方法将61例肝郁气滞证IBS-C患者随机分为对照组30例和观察组31例。在常规治疗的基础上,给予对照组口服枸橼酸莫沙必利分散片治疗,... 详细信息

目的探讨枳术丸合四逆散治疗肝郁气滞证便秘型肠易激综合征(IBS-C)的临床效果及对患者胃肠激素的影响。方法将61例肝郁气滞证IBS-C患者随机分为对照组30例和观察组31例。在常规治疗的基础上,给予对照组口服枸橼酸莫沙必利分散片治疗,给予观察组口服枳术丸合四逆散加减治疗,两组疗程均为6周。比较两组治疗前后的中医证候积分、便秘患者生活质量评估(PAC-QOL)量表评分及血清胃动素、血管活性肠肽(VIP)、P物质水平,以及治疗后的临床疗效和治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,观察组的腹痛腹胀积分、早饱纳差积分、排便次数减少积分、大便硬结积分、排便困难积分、精神症状积分及中医证候总积分低于治疗前及对照组(P0.05)。治疗后,观察组PAC-QOL量表各维度评分及总分低于治疗前和对照组(P0.05)。治疗后,观察组血清胃动素、P物质水平较治疗前及对照组升高,血清VIP水平较治疗前及对照组降低(P0.05)。观察组疗效优于对照组(P枳术丸合四逆散治疗肝郁气滞证IBS-C患者的疗效优于枸橼酸莫沙必利分散片,其可能通过调节患者血清VIP、胃动素、P物质水平来缓解患者临床症状,改善其精神状态,提高其生活质量。

关键词：便秘型肠易激综合征肝郁气滞证枳术丸四逆散临床效果胃动素血管活性肠肽 P物质

枳术丸水煎液及其拆方含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞增殖和凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第19期26卷 120-126页

作者：滕广飞刘富林夏旭婷涂琴蓉王婷湖南中医药大学中医学院长沙410000 中国中医科学院望京医院北京100102

目的:探讨枳术丸水煎液及其拆方对大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)增殖和凋亡的影响及其分子机制,并从细胞分子层面分析中医攻补兼施法治疗慢传输型便秘可能的机制。方法:将40只大鼠随机分成白术组、枳实组、枳术丸组、空白血清组,每组10只... 详细信息

目的:探讨枳术丸水煎液及其拆方对大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)增殖和凋亡的影响及其分子机制,并从细胞分子层面分析中医攻补兼施法治疗慢传输型便秘可能的机制。方法:将40只大鼠随机分成白术组、枳实组、枳术丸组、空白血清组,每组10只。白术组灌以17.7 g·kg^-1·d^-1白术水煎液,枳实组灌以8.9 g·kg^-1·d^-1枳实水煎液,枳术丸组灌以26.4 g·kg^-1·d^-1枳术丸水煎液,空白血清组灌以无菌蒸馏水3 mL,每日1次,连续7 d,取血制备含药血清和空白血清。将4组含药血清分别配成5%,10%,15%,20%4个体积分数,干预24 h,观察ICC的数量、形态,用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖情况,测定各组最佳干预体积分数。将大鼠结肠ICC细胞分为正常组、空白血清组、白术组、枳实组、枳术丸组,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测各组ICC的增殖情况,流式细胞仪检测各组ICC的凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组ICC中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP),增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,空白血清组、白术组、枳实组最佳干预体积分数均为10%,枳术丸组最佳干预体积分数为5%。与正常组比较,所有实验中空白血清组对ICC增殖和凋亡的影响没有明显差异;与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组ICC增殖率有显著差异(P术组和枳实组比较,枳术丸组对ICC增殖率明显增加(P枳实组比较,白术组对ICC增殖率变化不明显。与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组ICC的凋亡率无明显差异;与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组内的XIAP,PCNA蛋白水平均明显上调(P枳术丸、枳实、白术在一定浓度下均能通过增加XIAP,PCNA蛋白表达促进ICC的增殖,且对ICC的凋亡无明显影响;以攻补兼施法立法的方剂枳术丸能促进ICC的增殖,并且其增殖效果优于攻伐单药枳实和补益单药白术。

关键词：枳术丸 Cajal间质细胞细胞增殖细胞凋亡攻补兼施