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西瓜枯萎病菌PCR分子检测方法研究

果树学报 2019年第12期36卷 1771-1779页

作者：钟鑫赵静吴晓蕾李敬蕊吕桂云河北农业大学园艺学院

【目的】西瓜枯萎病是一种严重危害西瓜生产的世界性土传真菌病害,快速及时地检测出西瓜枯萎病菌,对西瓜枯萎病的早期监控预测及后期防治具有重要意义。【方法】利用镰孢属尖孢镰刀菌基因组的数据库,设计筛选西瓜枯萎病菌的特异引物,基... 详细信息

【目的】西瓜枯萎病是一种严重危害西瓜生产的世界性土传真菌病害,快速及时地检测出西瓜枯萎病菌,对西瓜枯萎病的早期监控预测及后期防治具有重要意义。【方法】利用镰孢属尖孢镰刀菌基因组的数据库,设计筛选西瓜枯萎病菌的特异引物,基于普通PCR技术建立快速简便的分子检测体系,对接种过的西瓜植株和土壤进行检测验证。【结果】该引物可获得556 bp的特异性扩增片段,体系的灵敏度为365 pg·μL^-1。利用PCR检测体系对感病西瓜植株和土壤进行检测,结果显示在抗感品种接种1~5 d后都能检测到西瓜枯萎病菌,而此时植株没有病症,后期检测到的病菌量与其病情指数有一定的相关性;检测接种过的土壤的灵敏度为5×10^2 cfu·g^-1,而在此密度的病菌土壤中,西瓜植株的发病株率较低。【结论】建立了一套基于普通PCR技术分子检测体系,可用于感病植株和土壤的西瓜枯萎病菌快速及时检测,为指导西瓜枯萎病的早期预测以及制定综合防治措施提供重要的参考依据。

关键词：西瓜枯萎病菌 PCR检测土壤

枯萎病菌对不同抗性黄瓜品种几种酶活性的影响

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植物保护 2009年第1期35卷 82-85页

作者：刘守伟吴凤芝马艳玲东北农业大学园艺学院哈尔滨150030

用枯萎病菌接种不同抗性黄瓜品种,研究不同抗性黄瓜品种的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和几丁质酶的活性变化。结果表明,接种后抗感品种POD、PPO和几丁质酶活性基本都呈现先升后降再升(再降)的趋势。抗感品种均在接种后12h时出现第... 详细信息

用枯萎病菌接种不同抗性黄瓜品种,研究不同抗性黄瓜品种的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和几丁质酶的活性变化。结果表明,接种后抗感品种POD、PPO和几丁质酶活性基本都呈现先升后降再升(再降)的趋势。抗感品种均在接种后12h时出现第1次POD活性峰值,抗病品种中农13号、津优3号分别在接种后60、72h、感病品种在84h出现第2次POD活性峰值;接种后24h时抗感品种均达到第1次PPO活性峰值,抗病品种在48h、感病品种在60h时达到第2次PPO活性峰值;接种后抗病品种在48h时达到第1次几丁质酶活性峰值,72h时达到第2次峰值,而感病品种只在60h时出现1次几丁质酶活性峰值。抗感品种的POD、PPO、几丁质酶活性的2次峰值都显著或极显著地高于各自的对照,在接种后的早期阶段,感病品种的POD、几丁质酶活性的第1次峰值都显著或极显著地高于抗病品种,PPO活性的第1次峰值极显著地低于抗病品种。

关键词：枯萎病菌黄瓜过氧化物酶多酚氧化酶几丁质酶

枯萎病菌对西瓜不同抗感品种丙二醛含量及某些保护酶活性的影响

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植物病理学报 2001年第2期31卷 152-156页

作者：王建明张作刚郭春绒贺运春山西农业大学农学院太谷030801

本文以西瓜为材料 ,研究了西瓜苗期感染枯萎病菌 ( Fusarium oxysporum Schlecht.)后根部细胞内丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的动态变化。结果表明 ,受枯萎病菌侵染的幼苗细胞内 MDA含量的增加比率 ,抗病品种克伦生低于... 详细信息

本文以西瓜为材料 ,研究了西瓜苗期感染枯萎病菌 ( Fusarium oxysporum Schlecht.)后根部细胞内丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的动态变化。结果表明 ,受枯萎病菌侵染的幼苗细胞内 MDA含量的增加比率 ,抗病品种克伦生低于感病品种早花 ;SOD酶活性的下降比率 ,抗病品种克伦生低于感病品种早花 ;CAT酶活性增减的幅度 ,抗病品种克伦生低于感病品种早花。抗病品种克伦生在染病后的短时间内 ( 4 8h左右 )能使细胞内 MDA、SOD酶和 CAT酶的代谢基本恢复到正常状态 ,其自我调节和恢复正常状态的能力显著大于感病品种早花。

关键词：西瓜枯萎病枯萎病菌丙二醛超氧化物歧化酶抗感品种过氧化氢酶

枯萎病菌毒素粗提液对美洲南瓜幼苗生长及生理的影响

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中国瓜菜 2023年第4期36卷 81-88页

作者：刘佳柴改凤郭风清张树武徐秉良甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室·甘肃农业大学植物保护学院兰州730070

为了揭示美洲南瓜枯萎病菌产生的毒素粗提液对幼苗的影响,研究了病原菌产毒的条件以及不同浓度毒素粗提液对美洲南瓜幼苗生长及生理的影响。结果表明,美洲南瓜枯萎病菌在pH值=7的Czapek培养液中24 h连续光照、振荡培养15 d时,产毒效果... 详细信息

为了揭示美洲南瓜枯萎病菌产生的毒素粗提液对幼苗的影响,研究了病原菌产毒的条件以及不同浓度毒素粗提液对美洲南瓜幼苗生长及生理的影响。结果表明,美洲南瓜枯萎病菌在pH值=7的Czapek培养液中24 h连续光照、振荡培养15 d时,产毒效果最明显,对美洲南瓜种子胚根生长抑制率最高,毒素粗提液亦具有较强的热稳定性。80%的病原菌毒素粗提液,对美洲南瓜株高、茎粗和根长的生长抑制效果最好。处理11 d时,80%毒素粗提液处理下,美洲南瓜幼苗根系和叶片的细胞膜透性分别达到62.71%和62.31%;叶片MDA含量为对照的2.61倍,叶片PAL活性最高,为84.25 U·g^(-1),是对照处理PAL酶活性的2.09倍。研究结果可为揭示美洲南瓜枯萎病菌的致病机制提供一定的理论依据。

关键词：美洲南瓜枯萎病菌毒素生长细胞膜透性生理指标

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枯萎病菌侵染后香蕉乙烯形成酶基因MaA CO及乙烯响应因子MaERF1表达水平分析

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基因组学与应用生物学 2014年第5期33卷 1013-1018页

作者：李文彬李春强孙建波彭明中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

香蕉与枯萎病互作机理研究一直是近年来研究的热点,目前对枯萎病菌的致病机理及香蕉的感、抗病机理还不清楚。本文利用前期表达谱分析结果克隆了乙烯合成及调控途径中的关键酶基因乙烯形成酶基因(MaACO)和乙烯响应因子基因(MaERF1),通过... 详细信息

香蕉与枯萎病互作机理研究一直是近年来研究的热点,目前对枯萎病菌的致病机理及香蕉的感、抗病机理还不清楚。本文利用前期表达谱分析结果克隆了乙烯合成及调控途径中的关键酶基因乙烯形成酶基因(MaACO)和乙烯响应因子基因(MaERF1),通过RT-PCR检测,对这两个基因在感、抗病香蕉种质中的表达水平进行研究。结果表明,MaACO和MaERF1基因对机械损伤非常敏感,尤其在损伤初期(3h)的表达水平远高于后期;对于枯萎病菌侵染处理的植株,尤其在感染初期(3h)MaACO和MaERF1的表达水平在抗性植株中的表达量均比感病植株中的低;抗性种质中乙烯途径可能受到抑制,香蕉的感病性可能与侵染初期对乙烯信号的敏感性相关。本研究为利用乙烯抑制剂进行香蕉抗枯萎病新方法的研究奠定了基础。

关键词：香蕉枯萎病菌 MaA CO MaERF1 表达水平

杜鹃花枯萎病菌TaqMan MGB探针实时荧光快速检测方法

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园艺学报 2020年第4期47卷 797-804页

作者：段丽君张慧丽李雪莲陈先锋段维军宁波检验检疫科学技术研究院浙江宁波315012 宁波中盛产品检测有限公司浙江宁波315012 宁波海关浙江宁波315012

根据杜鹃花枯萎病菌(Ovulinia azaleae)及其近似种ITS基因序列差异,设计合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了杜鹃花枯萎病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测杜鹃花枯萎病菌;灵敏度试验结果... 详细信息

根据杜鹃花枯萎病菌(Ovulinia azaleae)及其近似种ITS基因序列差异,设计合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了杜鹃花枯萎病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测杜鹃花枯萎病菌;灵敏度试验结果表明,最低检测限量为10μL反应体系中总DNA含量0.25 pg;实际样品检测结果表明,该方法可用于疑似携带杜鹃花枯萎病菌样品的检测与初筛。此方法快速、灵敏,整个反应过程约1 h,检测过程完全闭管,无需PCR后处理,为杜鹃花枯萎病菌早期诊断检测提供了重要参考。

关键词：杜鹃花枯萎病菌实时荧光PCR TaqMan-MGB探针检测

枯萎病菌对节瓜抗镰刀菌酸细胞系叶片中生化指标的影响

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江苏农业学报 2012年第2期28卷 402-405页

作者：王永飞王力先马三梅何晓明暨南大学生物工程学系广东广州510632 广东省农业科学院蔬菜研究所广东广州510640 广东省体育科学研究所广东广州510663

为了探讨节瓜抗镰刀菌酸细胞系抗枯萎病的机理,本试验测定了接种枯萎病菌后节瓜抗镰刀菌酸细胞系、抗枯萎病品系和感病品系叶片中过氧化物酶(POD)活性、多酚氧化酶(PPO)活性和可溶性蛋白含量。结果显示,接种枯萎病菌后,枯萎病感病品系... 详细信息

为了探讨节瓜抗镰刀菌酸细胞系抗枯萎病的机理,本试验测定了接种枯萎病菌后节瓜抗镰刀菌酸细胞系、抗枯萎病品系和感病品系叶片中过氧化物酶(POD)活性、多酚氧化酶(PPO)活性和可溶性蛋白含量。结果显示,接种枯萎病菌后,枯萎病感病品系、抗镰刀菌酸细胞系、抗枯萎病品系的节瓜叶片POD、PPO活性均极显著高于未接种病菌的对照(P病菌的对照(P枯萎病抗机理。

关键词：节瓜枯萎病菌抗镰刀菌酸细胞系抗病性

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枯萎病菌胁迫下黄瓜叶片蛋白质组分析

沈阳农业大学学报 2012年第4期43卷 444-448页

作者：王红杨涛肖军王娜金迪李浩戈沈阳农业大学生物科学技术学院/辽宁省农业生物技术重点实验室沈阳110161 辽宁省农业科学院沈阳110161

以黄瓜感枯萎病品系1900和抗枯萎病转基因品系1905为试材,采用灌根法接种枯萎病菌分生孢子悬浮液,48h后提取叶片蛋白质,采用差异蛋白质双向电泳技术研究枯萎病胁迫下黄瓜叶片蛋白质组的变化。结果表明:黄瓜幼苗在枯萎病菌胁迫下,感病和... 详细信息

以黄瓜感枯萎病品系1900和抗枯萎病转基因品系1905为试材,采用灌根法接种枯萎病菌分生孢子悬浮液,48h后提取叶片蛋白质,采用差异蛋白质双向电泳技术研究枯萎病胁迫下黄瓜叶片蛋白质组的变化。结果表明:黄瓜幼苗在枯萎病菌胁迫下,感病和抗病品系的双向电泳图谱存在一定差异。通过质谱分析,共鉴定出3-磷酸甘油醛脱氢酶、景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶、木葡聚糖内转糖苷酶、聚光复合体叶绿素a/b结合蛋白、假拟蛋白和5类表达差异的蛋白点。这些植物代谢中产生的能量和一些小分子可能激发了黄瓜抗枯萎病基因的表达。

关键词：黄瓜枯萎病菌差异蛋白质组学双向电泳

采用西瓜汁蔗糖琼脂培养基有效筛选西瓜枯萎病菌拮抗细菌

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植物病理学报 1997年第4期27卷 369-375页

作者：林福呈陈卫良许建平龚鸿飞葛起新李德葆浙江农业大学生物技术研究所

用１１种培养基，即ＣＭＡ，ＴＳＡ，ＰＤＡ，ＰＳＡ，ＮＡ，ＫＭＢ，ＷＳＡ，ＷＡ，ＯＭＡ，ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ，在培养皿平板上，２８℃培养下，测定它们对西瓜枯萎病菌拮抗细菌筛选能力。由西瓜皮提取汁，蔗糖，溴麝香草酚蓝和琼脂... 详细信息

用１１种培养基，即ＣＭＡ，ＴＳＡ，ＰＤＡ，ＰＳＡ，ＮＡ，ＫＭＢ，ＷＳＡ，ＷＡ，ＯＭＡ，ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ，在培养皿平板上，２８℃培养下，测定它们对西瓜枯萎病菌拮抗细菌筛选能力。由西瓜皮提取汁，蔗糖，溴麝香草酚蓝和琼脂配制成的ＷＳＡ培养基在４ｄ内可清晰地分辨出拮抗细菌，ＴＳＡ培养基广泛地用于测定来自作物根部对根部病原真菌具有拮抗作用的拮抗细菌，但与ＷＳＡ培养基比较，在其上细菌和真菌生长较弱，较不明显，因而只能较低水平地检测出拮抗细菌。在ＣＭＡ和ＷＡ培养基上，细菌生长最慢，有些种类的细菌甚至在ＷＡ培养基上不能生长。在ＰＤＡ，ＰＳＡ和ＯＭＡ培养基上ＦＯＮ菌落生长很快，因而不能检出抑制区域，而在ＮＡ、ＰＤＡ和ＫＭＢ培养基上某些细菌菌落生长很快，甚至与ＦＯＮ菌落相重叠，故不能出现抑菌圈，在ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ上ＦＯＮ和某些细菌生长相对较慢。

关键词：西瓜枯萎病菌拮抗细菌培养基