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基于性状与化学成分变化规律分析枯芩最佳采收年限

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时珍国医国药 2023年第5期34卷 1219-1223页

作者：肖扬鑫董妍涂济源柯畅张方蕾刘艳菊湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制工程技术研究中心湖北武汉430065

目的通过分析生长年限与黄芩性状和化学成分变化的关联规律,为枯芩合理采收年限的确定提供实验依据。方法在同一道地产区采收2年生子芩和3、5、7、10年枯芩,比较不同年限枯芩的性状差异。运用Matlab软件计算饮片中空腐朽面积占比,采用... 详细信息

目的通过分析生长年限与黄芩性状和化学成分变化的关联规律,为枯芩合理采收年限的确定提供实验依据。方法在同一道地产区采收2年生子芩和3、5、7、10年枯芩,比较不同年限枯芩的性状差异。运用Matlab软件计算饮片中空腐朽面积占比,采用色差仪测定药材粉末色差值,采用超高液相色谱法考察成分整体特征及主要化学成分含量。结果随着采收年限的增加,枯芩中空腐朽面积逐渐增大;药材粉末颜色绿红值a^(∗)升高,亮度值L^(∗)、黄蓝值b^(∗)和总色差值ΔE^(∗)降低;生长年限差距越大,UPLC图谱的相似度降低越明显,由0.999降至0.907;黄芩苷和汉黄芩苷等黄酮苷类成分的含量逐年递减,黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A等黄酮苷元类成分的含量逐年递增,5种成分总含量逐年递减。7年以上样品的色差值和化学成分变化趋于稳定。Pearson相关性分析表明,采收年限与黄芩腐朽面积、颜色值、化学成分含量显著相关。结论基于采收年限与化学成分含量、成分转变、腐朽面积、颜色变化规律综合评判,认为枯芩在3年以上7年以内采收较合理。

关键词：子芩枯芩性状化学成分色差值采收年限

枯芩与条芩化学成分差异及抗炎、抗肿瘤谱效关系研究

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枯芩与条芩化学成分差异及抗炎、抗肿瘤谱效关系研究

作者：贾传青山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:黄芩为中医临床常用清热燥湿、泻火解毒药物,根据外观性状,黄芩饮片有枯芩和条芩之分。古代医家认为枯芩专泻肺胃上焦之火,而条芩专泻大小肠下焦之火。然而,目前临床对枯芩与条芩的应用未进行区分,处方均为黄芩,可能会影响黄芩临... 详细信息

目的:黄芩为中医临床常用清热燥湿、泻火解毒药物,根据外观性状,黄芩饮片有枯芩和条芩之分。古代医家认为枯芩专泻肺胃上焦之火,而条芩专泻大小肠下焦之火。然而,目前临床对枯芩与条芩的应用未进行区分,处方均为黄芩,可能会影响黄芩临床用药的精准化。本研究运用现代分析技术、化学计量学方法对枯芩与条芩的化学成分进行分析,同时进行抗炎、抗肿瘤活性评价,采用谱效相关分析方法研究影响枯芩与条芩药效差异的主要成分,以期为二者的临床用药提供理论依据。方法:收集不同产地枯芩与条芩药材,采用HPLC分析方法,获得黄芩指纹图谱;采用指纹图谱相似度评价方法获得各样品共有峰信息,并分别采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)方法对共有峰的单位质量峰面积进行分析;采用HPLC-Q-TOF/MS对共有峰进行定性分析。采用脂多糖(Lipopolysaccgarudes,LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,以NO、TNF-α IL-6抑制率为指标,考察各枯芩与条芩提取物的抗炎活性;分别采用A549、HCT116两种肿瘤细胞模型,以肿瘤细胞增殖抑制率为指标,考察各黄芩提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用;以各色谱峰的单位质量峰面积为自变量,炎症因子抑制率和肿瘤细胞半数抑制浓度(IC50)为因变量,采用灰色关联度分析(GRA)和偏最小二乘(PLS)回归分析进行谱效关联,建立黄芩提取物的抗炎、抗肿瘤活性的谱效关系。结果:①1 0批枯芩和12批条芩的指纹图谱分析确定了 1 5个共有色谱峰,PCA分析显示,除个别批次外,枯芩与条芩样品可实现良好的区分。②通过OPLS-DA数据分析方法找到了区分枯芩与条芩的主要成分标志物8 个,分别为峰 15、1 2、10、13、11、1、4、和 1 4,经 HPLC-Q-TOF/MS鉴定峰 15、13、11 和 1 4 分别为 Oroxylin A、Wogonin、Baicalein 和Scullcapflavone Ⅱ。③各枯芩提取物与条芩提取物在200 μg·mL-1浓度下对NO、IL-6和TNF-α的释放均具有抑制作用。枯芩和条芩提取物作用72 h后对两种癌细胞均具有显著的抑制效果。IC50值组间t检验发现各枯芩样品对A549和HCT116细胞的抑制效果显著高于各条芩样品。其中各提取物对HCT116细胞的抑制效果优于A549细胞。④偏最小二乘(PLS)和灰色关联(GRA)分析结果显示,峰1、3～4、6～8、10～11、13～15为黄芩抗炎活性的主要成分;峰6、10～14为黄芩提取物中对A549细胞抑制作用发挥主要作用的成分,峰10～15为黄芩提取物中对HCT116细胞抑制作用发挥主要作用的成分。结论:枯芩与条芩共有峰中15、12、10、13、11、1、4、和14的含量是区分枯芩与条芩的指标成分。在200 μg·mL-1浓度下,枯芩与条芩提取物对炎症因子的释放及A549、HCT116肿瘤细胞均具有较好的抑制作用,显示黄芩具有较好的抗炎及抗肿瘤活性。通过谱-效关系分析,发现了与抗炎活性密切相关的活性成分,结合枯芩与条芩差异指标成分,发现峰4、10～11、13～15是黄芩抗炎活性差异的主要指标成分;峰10～14是影响枯芩与条芩对A549抑制率差异的主要指标成分;峰 10～15是影响枯芩与条芩对HCT116抑制率差异的主要指标成分。综上可见,条芩与枯芩各化学成分含量的差异可影响其药效活性,并且对不同的药效,影响的成分的种类也有差异,说明了中药药理作用的多成分、多靶点的特点。以上研究为枯芩和条芩功效差异的深入研究提供了科学依据,为二者能够在临床上区别应用提供了一定的指导依据。

关键词：枯芩条芩差异成分谱-效相关

子芩与枯芩UPLC指纹图谱建立及抗炎作用的谱效关系研究

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中药材 2023年第6期46卷 1454-1461页

作者：涂济源柯畅王燕肖扬鑫刘艳菊张方蕾湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制技术工程研究中心湖北武汉430065

目的:建立子芩和枯芩的指纹图谱,探究子芩与枯芩化学成分差异及与抗炎药效之间的关联性,明确抗炎作用的物质基础。方法:采用UPLC法建立子芩和枯芩指纹图谱,以LPS刺激THP-1巨噬细胞释放的炎症因子IL-1β、TNF-α水平为药效指标,采用正交... 详细信息

目的:建立子芩和枯芩的指纹图谱,探究子芩与枯芩化学成分差异及与抗炎药效之间的关联性,明确抗炎作用的物质基础。方法:采用UPLC法建立子芩和枯芩指纹图谱,以LPS刺激THP-1巨噬细胞释放的炎症因子IL-1β、TNF-α水平为药效指标,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究子芩与枯芩差异化学成分及与抗炎作用的谱效关系,筛选子芩与枯芩抗炎作用的物质基础。结果:子芩和枯芩样品UPLC指纹图谱共有峰有17个,OPLS-DA结果发现二者差异化学成分有4个,分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素,谱效关系结果发现子芩和枯芩抗炎作用的主要相关成分有2个,分别为黄芩苷、黄芩素。结论:该研究建立的子芩和枯芩指纹图谱方法简单可行,通过谱效关系分析筛选出抗炎活性的重要成分,为明确子芩和枯芩抗炎作用提供物质基础。

关键词：枯芩子芩指纹图谱抗炎谱效关系

基于肠道菌群探究中药枯芩“善清肺热”的科学内涵

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基于肠道菌群探究中药枯芩“善清肺热”的科学内涵

作者：熊诗慧江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:本文以传统中药饮片黄芩为研究对象,以枯芩、子芩两种传统商品规格临床作用方向的巨大差异为出发点,采用现代药效评价方法,评价两种传统规格黄芩的疗效差异,验证枯芩对肺部疾病的“药物靶向性”;结合代谢组学与肠道菌群研究,阐释... 详细信息

目的:本文以传统中药饮片黄芩为研究对象,以枯芩、子芩两种传统商品规格临床作用方向的巨大差异为出发点,采用现代药效评价方法,评价两种传统规格黄芩的疗效差异,验证枯芩对肺部疾病的“药物靶向性”;结合代谢组学与肠道菌群研究,阐释枯芩“善清肺热”传统靶向用药的现代科学内涵,为中医古籍的经典理论提供现代科学依据。方法:1.采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)对子芩与枯芩的药材提取液进行质量考察;2.不同类型黄芩提取物分组预防给药:选用雄性C57BL/6小鼠分组为正常组(NC组)、脂多糖(Lipoplysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤小鼠组(ALI组)、地塞米松给药治疗组(DEX组)、子芩治疗组(ZQ组)、枯芩治疗组(KQ组)。用生理盐水、低塞米松注射液、子芩提取液与枯芩提取液对各组小鼠进行治疗7天后,气管滴注脂多糖,构建急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)小鼠模型,评价枯芩、子芩的疗效差异;3.采用肺干湿重、脏器指数、H&E染色切片方法评价基础形态差异;酶联免疫吸附测试法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平;4.UPLC-Q-TOF-MS非靶代谢组方法测定小鼠血浆中差异代谢物;5.16S r RNA测序结合气相质谱联用技术,分析菌群结构的变化和粪便中的短链脂肪酸(Short-chain fatty acid,SCFAs)的水平。6.采用混合抗生素(Antibiotic mixtures,ABX)疗法消除小鼠的内源性微生物,验证关键菌株嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,AKK)对ALI小鼠的治疗作用。采用实时定量PCR和免疫荧光染色法,验证关键酶吲哚2,3双加氧酶1(Indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的表达水平。结果:1.子芩与枯芩的疗效差异:与正常组相比,ALI小鼠的肺水肿严重且免疫功能降低,机体炎症因子水平也极显著升高(p芩,枯芩能够更好地改善ALI引起的肺水肿、平衡免疫以及降低小鼠体内的炎症因子风暴;2.血浆代谢组学研究:枯芩干预组主要涉及13个代谢物,主要表现为通过调节亚油酸代谢和色氨酸代谢而发挥作用,与ALI组相比,枯芩干预能显著降低IDO1(Kyn/Trp)活性(p芩组与ALI组并无显著性差异;3.肠道菌群研究:与正常组相比,ALI小鼠的肠道菌群丰度显著降低(p枯芩治疗后的ALI小鼠肠道菌群丰富度升高,厚壁菌门与拟杆菌门相对含量的比值、短链脂肪酸含量显著升高(p枯芩通过调节增加机体肠道中有益菌嗜黏蛋白阿克曼菌的丰度,抑制色氨酸代谢关键酶IDO1在肺组织中的表达,从而调节色氨酸代谢通路,以此维持小鼠体内的免疫稳态,发挥缓解肺部炎症的作用。

关键词：枯芩急性肺损伤科学内涵嗜黏蛋白阿克曼菌吲哚胺2,3-双加氧酶1

基于药理指标评价子芩与枯芩对大肠湿热证的作用差异

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中国实验方剂学杂志 2020年第7期26卷 57-64页

作者：张方蕾赵佳文胡江慧肖锟钰谢颖雷林刘艳菊湖北中医药大学药学院湖北省中药炮制技术工程研究中心武汉430065

目的:比较子芩与枯芩对大鼠大肠湿热证的药效差异,通过现代药理实验验证将黄芩分为子芩与枯芩分别入药的科学性。方法:将大鼠随机分为空白组,模型组,子芩低、高剂量组(0.9,3.6 g·kg-1),黄芩组(0.9 g·kg-1),枯芩低、高剂量组(0.9,3.6 g... 详细信息

目的:比较子芩与枯芩对大鼠大肠湿热证的药效差异,通过现代药理实验验证将黄芩分为子芩与枯芩分别入药的科学性。方法:将大鼠随机分为空白组,模型组,子芩低、高剂量组(0.9,3.6 g·kg-1),黄芩组(0.9 g·kg-1),枯芩低、高剂量组(0.9,3.6 g·kg-1),复方黄连素片组(0.045 g·kg-1),每组8只。选择大肠湿热证大鼠模型,选择体温、胸腺指数、脾脏指数、回肠病理切片、结肠病理切片、炎症因子以及分泌型免疫球蛋白(SIg)A含量为指标评价子芩与枯芩对大肠湿热证的治疗作用,综合评价子芩与枯芩的药效差异。采用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对2种饮片抗大肠湿热证药理指标进行统计学分析。结果:不同剂量的子芩和枯芩均能降低大肠湿热证模型大鼠的体温、胸腺指数和脾脏指数、血清炎症因子白细胞介素(IL)-2,IL-6,IL-1β和肠黏膜SIg A含量,且大部分具有显著性差异(P枯芩组比较,相应剂量子芩组效果更好,且大部分具有显著性差异(P芩与枯芩各聚类于一侧。结论:子芩与枯芩对大肠湿热证均具有治疗作用,但两者的作用强度有明显差异,子芩优于枯芩,验证了古方中用子芩专泻大小肠下焦之火的科学性。

关键词：黄芩子芩枯芩大肠湿热证偏最小二乘法-判别分析炎症因子分泌型免疫球蛋白A

基于抗菌活性及病理指标评价子芩与枯芩对肺炎的药效学差异

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中草药 2018年第17期49卷 4064-4070页

作者：赵佳文李水清刘艳菊涂济源瞿领航石坤湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制技术工程中心湖北武汉430065

目的比较子芩与枯芩(均为黄芩的根)体外抗菌活性及体内对肺炎大鼠的药效学差异。方法采用体外实验,以二倍微量稀释法测定子芩与枯芩对肺炎链球菌的最小抑菌浓度(MIC);体内实验以肺炎大鼠为模型,选择体温、肺脏指数、血常规检测以及大鼠... 详细信息

目的比较子芩与枯芩(均为黄芩的根)体外抗菌活性及体内对肺炎大鼠的药效学差异。方法采用体外实验,以二倍微量稀释法测定子芩与枯芩对肺炎链球菌的最小抑菌浓度(MIC);体内实验以肺炎大鼠为模型,选择体温、肺脏指数、血常规检测以及大鼠肺部病理切片为评价指标评价子芩与枯芩对肺炎大鼠作用的药效学差异;采用偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)法,对子芩和枯芩的抗菌活性及病理指标进行分析。结果子芩对肺炎链球菌的MIC为0.5 g/mL,枯芩的MIC为0.25 g/mL;子芩和枯芩均能显著降低肺炎大鼠的体温、肺脏指数、全血中白细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数;PLS-DA分析显示子芩与枯芩的体外抗菌活性及体内抗肺炎活性具有显著差异。结论子芩与枯芩对肺炎均具有一定的治疗作用,两者的作用强度有明显差异,枯芩作用优于子芩。

关键词：子芩枯芩肺炎链球菌肺炎血常规偏最小二乘-判别分析

枯芩与子芩醇提物对LPS诱导的急性肺损伤保护作用比较研究

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中成药 2020年第10期42卷 2756-2759页

作者：胡江慧刘艳菊张方蕾许静林雄朱天翔湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制工程技术研究中心湖北武汉430065

目的比较枯芩与子芩醇提物对LPS诱导急性肺损伤的保护作用。方法以SPF级雄性C57BL/6小鼠为实验对象,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、枯芩醇提物(低、高)组、子芩醇提物(低、高)组,LPS(10 mg/kg)滴鼻造模,测定全血白细胞数,肺组织... 详细信息

目的比较枯芩与子芩醇提物对LPS诱导急性肺损伤的保护作用。方法以SPF级雄性C57BL/6小鼠为实验对象,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、枯芩醇提物(低、高)组、子芩醇提物(低、高)组,LPS(10 mg/kg)滴鼻造模,测定全血白细胞数,肺组织湿干比重(W/D),肺组织MDA、MPO水平,以及肺泡灌洗液(BALF)IL-6、IL-1β、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理形态。结果与模型组相比,枯芩醇提物高剂量组、子芩醇提物高剂量组W/D、全血白细胞计数及MDA、MPO、IL-6、IL-1β、TNF-α水平下降(P枯芩与子芩醇提物对LPS诱导的小鼠急性肺损伤均有改善作用,前者存在一定剂量依赖性。

关键词：枯芩子芩醇提物急性肺损伤 LPS

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枯芩中清热黄酮类药效组分的测定

中国实验方剂学杂志 2011年第4期17卷 83-86页

作者：崔萌萌张贵君徐蓓蕾黄睿北京中医药大学中药学院北京100102

目的:测定枯芩中4种黄酮类药效组分,为建立黄芩类中药与疗效对应的质量标准提供科学依据。方法:采用药对配伍组分-液相色谱综合分析法。结果:药效组分黄芩苷-黄芩素-汉黄芩苷-汉黄芩素含量为(75.83±7.25),(2.72±0.53),(18.62±2.89),(... 详细信息

目的:测定枯芩中4种黄酮类药效组分,为建立黄芩类中药与疗效对应的质量标准提供科学依据。方法:采用药对配伍组分-液相色谱综合分析法。结果:药效组分黄芩苷-黄芩素-汉黄芩苷-汉黄芩素含量为(75.83±7.25),(2.72±0.53),(18.62±2.89),(1.44±0.37)mg.g-1。结论:枯芩中黄酮类药效组分黄芩苷-黄芩素-汉黄芩苷-汉黄芩素,比例为52.44:1.89:12.88:1,有清热燥湿作用,与子芩比较有极显著性差异(P芩类中药药效组分质量评价指标。

关键词：枯芩黄酮类药效组分质量评价指标黄芩类中药

多成分含量测定结合UPLC指纹图谱及其模式判别评价子芩与枯芩质量

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中药材 2017年第9期40卷 2101-2106页

作者：赵佳文瞿领航刘艳菊李水清徐依依肖玲湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制技术工程中心湖北武汉430065

目的:建立子芩与枯芩的UPLC指纹图谱及其分析方法,从整体成分分析子芩与枯芩饮片质量的专属性差异。方法:采用UPLC法测定不同产地的子芩与枯芩样品,对比了黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A 5种成分的含量变化;分析两者UPL... 详细信息

目的:建立子芩与枯芩的UPLC指纹图谱及其分析方法,从整体成分分析子芩与枯芩饮片质量的专属性差异。方法:采用UPLC法测定不同产地的子芩与枯芩样品,对比了黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A 5种成分的含量变化;分析两者UPLC的专属性差异特征和相似度评价,并采用主成分分析和偏最小二乘法判别20批子芩与枯芩的指纹图谱。结果:子芩中黄芩苷和汉黄芩苷含量较枯芩分别高28.87%、54.12%,其中子芩的黄芩苷含量范围在11.60%~13.03%之间,枯芩在8.01%~10.53%之间;子芩中黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A含量较枯芩明显较低,分别低70.37%、44.44%、59.09%;通过主成分分析、偏最小二乘判别分析发现子芩与枯芩差异明显,且不同产地也存在一定差异。结论:子芩和枯芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素以及千层纸素A的含量具有明显差异,其UPLC指纹图谱中黄芩苷(3号峰)与黄芩素(10号峰)峰面积比具有明显差异,具鉴别意义,同时其化学计量模式的识别也为子芩和枯芩的质量评价及品质研究提供了一定的参考。

关键词：子芩枯芩 UPLC 指纹图谱含量测定主成分分析偏最小二乘