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果菠萝蛋白酶用TiO_2多孔陶瓷柱层析结合超滤法纯化的研究

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中国医药工业杂志 2002年第3期33卷 121-123页

作者：李兴林哲甫贵阳医学院医检系贵州贵阳550004 中山大学生命科学院广东广州510275

将 Ti O2 、粘土、Si O2 、Ca CO3 及活性炭混合 ,经高温烧结 ,制得可用于柱层析的 Ti O2 多孔陶瓷。以陶瓷柱层析结合超滤法纯化果菠萝蛋白酶 ,产品比活力 937u/ mg蛋白 ,活力回收率 48% ,纯化倍数

关键词：果菠萝蛋白酶 TiO2多孔陶瓷超滤纯化

果菠萝蛋白酶在有机溶剂中的变性与失活动力学的研究

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厦门大学学报（自然科学版） 1993年第1期32卷 88-93页

作者：陈清西颜思旭力政军乐伟平厦门大学生物学系

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机... 详细信息

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机溶剂作用下,监测荧光(332nm)强度随时间的变化过程,作为变性的指标,测定酶在不同浓度有机溶剂中的变性动力学,并按邹氏法测定酶的失活动力学,对酶构象及催化活力关系进行比较,酶的失活速度大于变性速度,说明酶活性中心处于对有机溶剂较敏感的区域,酶的变性与失活过程均可分为快、慢两相的一级反应,这意味着可能存在着部分活力的中间态。

关键词：果菠萝蛋白酶有机溶剂变性

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脲对果菠萝蛋白酶的变性与失活动力学

厦门大学学报（自然科学版） 1991年第2期30卷 204-208页

作者：陈清西颜思旭王冬岭王文忠厦门大学生物学系

以脲为变性剂,以荧光光谱为监测手段,对果菠萝蛋白酶(Fruit bromelain)的分子构象变化进行研究,酶的荧光强度随脲浓度增大而递增,发射峰出现红移。荧光偏振在 230～240 nm及 260～290 nm 出现二个负峰,后者较为显著,并随脲浓度增大而加... 详细信息

以脲为变性剂,以荧光光谱为监测手段,对果菠萝蛋白酶(Fruit bromelain)的分子构象变化进行研究,酶的荧光强度随脲浓度增大而递增,发射峰出现红移。荧光偏振在 230～240 nm及 260～290 nm 出现二个负峰,后者较为显著,并随脲浓度增大而加剧。脲对酶水解N-苄氧羰酰 L-赖氨酸对硝基酚酯(CBZ-Lys·pNP)活力的影响,表现为非竞争性抑制类型;比较脲对游离酶(E)及结合酶(ES)的失活速度常数。结果二者相等,底物不表现保护作用。测定酶在不同浓度脲中的变性速度常数和失活速度常数,比较了酶的构象变化及催化活力的关系,酶的失活速度常数比变性速度约大6～16倍。说明酶活性中心对脲的敏感性,酶活力的表现很大程度上依赖于酶构象的稳定性和完整性。

关键词：果菠萝蛋白酶脲变性失活构象

TiO_2吸附及超滤法部分纯化果菠萝蛋白酶的研究

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贵州大学学报（自然科学版） 2000年第4期17卷 282-284,264页

作者：李兴林哲甫贵阳医学院贵阳550004

果汁量 4%的TiO2 作为吸附剂 ,能够吸附菠萝榨汁中 96 %的果菠萝蛋白酶活力 ,然后以 0 4M pH6 6的柠檬酸缓冲液可有效地进行洗脱 ,洗脱液先用截留值 2万的超滤膜超滤 ,流出液再用截留值为 5万的超滤膜超滤 ,最后所得截留液中果菠萝蛋... 详细信息

果汁量 4%的TiO2 作为吸附剂 ,能够吸附菠萝榨汁中 96 %的果菠萝蛋白酶活力 ,然后以 0 4M pH6 6的柠檬酸缓冲液可有效地进行洗脱 ,洗脱液先用截留值 2万的超滤膜超滤 ,流出液再用截留值为 5万的超滤膜超滤 ,最后所得截留液中果菠萝蛋白酶比活力达 91 1单位 /毫克蛋白 ,活力回收率为 5 4% ,纯化倍数 7 9,蛋白质溶液浓缩 1

关键词：二氧化钛纯化超滤法果菠萝蛋白酶吸附超滤膜活力回收率

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脲对果菠萝蛋白酶活力与构象的影响

生物化学杂志 1992年第4期8卷 400-404页

作者：陈清西颜思旭厦门大学生物学系厦门361005 中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室

本文用荧光光谱,紫外差示光谱和CD谱研究果菠萝蛋白酶在不同浓度的脲溶液中的构象及酶活力的变化情况。酶的荧光强度随脲浓度增大而明显增加,8mol/L脲使荧光强度增强65％,发射峰出现红移。差示谱表明在232nm和288nm出现二个正峰,它们均... 详细信息

本文用荧光光谱,紫外差示光谱和CD谱研究果菠萝蛋白酶在不同浓度的脲溶液中的构象及酶活力的变化情况。酶的荧光强度随脲浓度增大而明显增加,8mol/L脲使荧光强度增强65％,发射峰出现红移。差示谱表明在232nm和288nm出现二个正峰,它们均随脲浓度增大而加剧,前者与主链构象变化有关,而后者与生色基团(Trp、Tyr)的微环境变化相关。CD谱表明:天然酶在208nm和225nm处有二个负峰,脲变性后,225nm的负峰基本上不随脲浓度增大而变化,但208nm峰则明显发生变化并逐渐出现红移,6mol/L以上此峰则完全消失。

关键词：果菠萝蛋白酶脲变性构象与活性

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果菠萝蛋白酶催化功能基团的研究

厦门大学学报（自然科学版） 1990年第4期29卷 454-458页

作者：陈清西颜思旭厦门大学生物学系

以菠萝果为材料,应用本实验室开发的工业生产法工艺制备粗酶制品,进一步经DEAE-纤维索(DE-52)和 Sephadex G-75柱层析纯化,获得圆盘电泳单一纯的果酶制剂,测定酶的分子量为29 800,含 19种不同氨基酸,总残基数为286个。化学修饰研究结果... 详细信息

以菠萝果为材料,应用本实验室开发的工业生产法工艺制备粗酶制品,进一步经DEAE-纤维索(DE-52)和 Sephadex G-75柱层析纯化,获得圆盘电泳单一纯的果酶制剂,测定酶的分子量为29 800,含 19种不同氨基酸,总残基数为286个。化学修饰研究结果表明:巯基、氨基、Trp残基和唯一的His残基是酶活性必需基团,而Ser和羧基与酶活性无关。用邹氏作图法判断 Trp残基的必需基团数,表明酶分子中六个Trp残基仅有一个是酶活性所必需的。

关键词：果菠萝蛋白酶功能基团催化