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国际口腔医学杂志 2018年第2期45卷 170-176页

作者：熊毅宫苹伍颖颖口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院种植科成都610041

目的建立成骨细胞条件性FoxO1基因敲除的糖尿病小鼠模型,并进行初步的表型研究。方法设计基因敲除策略,获得野生型和纯合小鼠。提取鼠尾组织DNA,经聚合酶链式反应(PCR)扩增后鉴定其基因型。分别提取小鼠原代成骨细胞mRNA和蛋白质,以及... 详细信息

目的建立成骨细胞条件性FoxO1基因敲除的糖尿病小鼠模型,并进行初步的表型研究。方法设计基因敲除策略,获得野生型和纯合小鼠。提取鼠尾组织DNA,经聚合酶链式反应(PCR)扩增后鉴定其基因型。分别提取小鼠原代成骨细胞mRNA和蛋白质,以及其他组织的mRNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot技术检验FoxO1的表达。在不同时间点监测小鼠体重、血糖,并进行胰岛素耐受实验。结果成功建立FoxO1基因敲除小鼠模型并诱发糖尿病,糖尿病小鼠从第2周开始体重明显低于正常小鼠。在糖尿病条件下,纯合小鼠血糖值明显低于野生型小鼠,其胰岛素敏感性明显高于野生型小鼠。结论成功建立了成骨细胞条件性FoxO1基因敲除小鼠模型;FoxO1基因敲除可改善糖尿病小鼠的高糖血症,可能是由于FoxO1基因敲除增加了糖尿病小鼠的胰岛素敏感性。

关键词：叉头转录因子条件性基因敲除糖尿病

FAM20A条件性基因敲除小鼠牙龈增生的组织测量学分析

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口腔医学 2020年第12期40卷 1084-1087,1102页

作者：刘静李丽丽刘培红马肃哈尔滨医科大学附属第一医院牙周病科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院龙江学者实验室黑龙江哈尔滨150001

目的分析Fam20A条件性基因敲除对小鼠牙龈组织形态的影响。方法k14-Cre;Fam20Aflox/flox条件性基因敲除小鼠及同窝正常小鼠各20只,分别于出生后4、6、8、12周随机处死每组中的5只;体视显微镜下观察下颌磨牙区牙龈的大体形态;常规法获得... 详细信息

目的分析Fam20A条件性基因敲除对小鼠牙龈组织形态的影响。方法k14-Cre;Fam20Aflox/flox条件性基因敲除小鼠及同窝正常小鼠各20只,分别于出生后4、6、8、12周随机处死每组中的5只;体视显微镜下观察下颌磨牙区牙龈的大体形态;常规法获得下颌第一磨牙近远中向中点部位的颊舌向石蜡切片,行HE染色,光学显微镜下分别测量颊侧牙龈总面积、牙龈上皮面积和牙龈结缔组织面积;析因设计的方差分析和费舍尔最小显著性差异确定显著性水平。结果基因敲除小鼠牙龈增生,颊侧牙龈总面积、牙龈上皮面积和牙龈结缔组织面积均大于对照组(P敲除小鼠牙龈上皮组织内的Fam20A基因后,导致牙龈组织增生,牙龈组织增生涉及牙龈上皮组织和结缔组织。

关键词： Fam20A 条件性基因敲除形态计量学牙龈增生小鼠

间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析

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中华整形外科杂志 2023年第9期39卷 1003-1009页

作者：尹艳爽李秀杨志岗马世泽曹焱肖苒中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心、中国医学科学院体表组织器官再造研究重点实验室北京100144 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院病理科北京100144

目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型,并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交,获得子代小鼠,饲养1~2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及... 详细信息

目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型,并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交,获得子代小鼠,饲养1~2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因,于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织,一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定,随后进行HE染色和Masson染色,在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析,组间比较采用t检验,P基因条件性敲除小鼠,基因型为Bicc1^(f/f)Cre+/-,野生型小鼠基因型为Bicc1^(f/f)Cre^(-/-);RT-qPCR检测结果显示,实验组小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤、脂肪组织中Bicc1 mRNA表达水平均显著低于对照组(P均基因条件性敲除小鼠模型,可以为研究Bicc1基因在组织器官间质细胞中的作用提供动物模型;3周龄小鼠间质细胞中敲除Bicc1后1周,其肾脏和骨骼肌发生病理性改变。

关键词：小鼠,基因敲除间质细胞双尾C基因条件性基因敲除他莫昔芬

口腔上皮细胞条件性ASCT2基因敲除小鼠模型的建立

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口腔上皮细胞条件性ASCT2基因敲除小鼠模型的建立

应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体基因条件性敲除小鼠模型及其鉴定

中华口腔医学会第十三次全国口腔粘膜病学暨第十一次全国口...

作者：李围凌子航陆景怡程斌陶小安中山大学光华口腔医学院中山大学附属口腔医院

目的:建立口腔上皮细胞条件性ASCT2基因敲除小鼠模型,为后续探究ASCT2在白斑发病中的作用及癌变机制奠定基础。方法:设计基因敲除策略,获得对照野生型和纯合基因敲除小鼠。提取鼠趾或鼠尾组织DNA,经聚合酶链式反应(PCR)扩增后鉴定其基... 详细信息

目的:建立口腔上皮细胞条件性ASCT2基因敲除小鼠模型,为后续探究ASCT2在白斑发病中的作用及癌变机制奠定基础。方法:设计基因敲除策略,获得对照野生型和纯合基因敲除小鼠。提取鼠趾或鼠尾组织DNA,经聚合酶链式反应(PCR)扩增后鉴定其基因型。Slc1a5 fl/fl Cre+/-基因背景小鼠于4周以75 mg/kg连续腹腔注射他莫昔芬(20 mg/ml)5天,分别于完成注射后1,3,7,14,21天处死Slc1a5 fl/fl Cre+/-及Slc1a5 fl/fl小鼠,提取小鼠舌上皮DNA和蛋白质,利用PCR技术检验ASCT2基因的敲除情况,通过Western blot与免疫组织化学(IHC)验证舌组织中的ASCT2表达水平。结果:基因型鉴定结果表明已培养出Slc1a5 fl/fl Cre+/-纯合子小鼠;基因敲除鉴定显示相对于Slc1a5 fl/fl小鼠,Slc1a5 fl/fl Cre+/-小鼠在他莫昔芬诱导后舌上皮出现470bp大小的条带,提示舌上皮Slc1a5基因已被敲除;Western blot与IHC结果显示他莫昔芬诱导后Slc1a5 fl/fl Cre+/-小鼠舌上皮ASCT2表达明显下调。结论:成功建立了口腔上皮细胞条件性ASCT2基因敲除小鼠模型。

关键词： ASCT2 条件性基因敲除口腔白斑

来源： cnki会议评论

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中华烧伤杂志 2019年第10期35卷 740-745页

作者：孙睿曹永倩马嘉旭殷思源张敏宋茹江杭高岩张华宇冯璋刘健刘振兴王一兵山东大学附属省立医院烧伤与创面修复外科济南250021 山东第一医科大学第一附属医院济南250014

目的应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体(p75NTR )基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定。方法应用Cre-loxP系统将5只6~8周龄雌雄不限(用于繁殖的小鼠鼠龄和性别下同)p75NTRflox/flox转基因C57BL/6J小鼠和5只角蛋白14启... 详细信息

目的应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体(p75NTR )基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定。方法应用Cre-loxP系统将5只6~8周龄雌雄不限(用于繁殖的小鼠鼠龄和性别下同)p75NTRflox/flox转基因C57BL/6J小鼠和5只角蛋白14启动子驱动(KRT14-)Cre+/-转基因C57BL/6J小鼠进行饲养和杂交。从繁育产生的第1代小鼠中筛选出5只p75NTRflox/+·KRT14-Cre+/-小鼠与5只p75NTRflox/flox小鼠进行交配,获得第2代小鼠。第2代小鼠出生20~25d,切取每只小鼠鼠尾,通过PCR法进行基因型鉴定。分别选取经鉴定后生长至6周龄的p75NTR基因完全条件性敲除小鼠、野生型小鼠各4只处死,切取腹部皮肤组织和脑组织,经免疫组织化学染色对比观察p75NTR在2种小鼠2种组织中的表达情况;另切取腹部皮肤组织,经苏木精-伊红染色观察2种小鼠组织形态学变化。结果(1)共繁育第2代小鼠20只,其中4只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre+/-(p75NTR-/-),即p75NTR基因完全条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75NTRflox/+·KRT14-Cre+/-,即p75NTR基因部分条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre-/-,6只小鼠基因型为p75NTRflox/+·KRT14-Cre-/-,均为野生型小鼠。(2)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠皮肤表皮组织中未见p75NTR表达,野生型小鼠皮肤表皮组织中可见较多p75NTR阳性表达;p75NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠脑组织中均有丰富p75NTR阳性表达。(3)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠皮肤表皮组织均无生长异常情况且毛囊结构均完整。结论应用Cre-loxP系统能够成功构建表皮细胞中p75NTR基因条件性敲除小鼠模型且小鼠皮肤组织形态无明显变化。

关键词：受体,神经生长因子类角蛋白14 模型,动物条件性基因敲除表皮细胞 Cre-loxP系统

血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠与非基因敲除小鼠在急性肺损伤肺组织病理改变以及肺微血管通透性变化的比较

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南方医科大学学报 2011年第6期31卷 995-998页

作者：胡国栋陈英华佟万成程远雄张琳张磊蔡绍曦南方医科大学南方医院呼吸科广东广州510515 南方医科大学基础医学院组织胚胎学教研室广东广州510515

目的比较血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠与非基因敲除小鼠在急性肺损伤肺组织病理改变和肺微血管通透性变化的差异。方法 cdc42flox/flox小鼠与血管内皮细胞特异性表达cre重组酶的小鼠杂交,取其基因型为cdc42flox/+Cre+/... 详细信息

目的比较血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠与非基因敲除小鼠在急性肺损伤肺组织病理改变和肺微血管通透性变化的差异。方法 cdc42flox/flox小鼠与血管内皮细胞特异性表达cre重组酶的小鼠杂交,取其基因型为cdc42flox/+Cre+/-的子代小鼠与cdc42flox/flox小鼠回交,得到基因型分别为Cdc42flox/+Cre+/-、Cdc42flox/+Cre-/-、Cdc42flox/floxCre-/-的小鼠,其中Cdc42flox/+Cre+/-为血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠,其余两种同一窝出生的非基因敲除小鼠作为对照组,在各组小鼠气道内滴入LPS,制成急性肺损伤模型,比较各组小鼠在肺组织病理改变、病理评分、肺湿干重比值、肺微血管通透系数等指标变化的差异。结果血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠急性肺损伤模型在肺组织病理改变、病理评分、肺湿干重比值、肺微血管通透系数等方面与对照组小鼠比较无明显统计学差异。结论血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因杂合子小鼠与非基因敲除小鼠比较,在急性肺损伤中肺组织病理改变和肺微血管通透性的变化无明显差异。

关键词：条件性基因敲除 cre/loxp技术 cdc42基因急性肺损伤血管通透性

条件性敲除Osterix基因获得先天性脊柱侧凸小鼠动物模型及表型分析

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中华实验外科杂志 2013年第10期30卷 2169-2171,F0004页

作者：陈思旭宗兆文贾敏沈岳赵玉峰郭庆山第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤科创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的通过Osterix基因敲除获得先天性脊柱侧凸动物模型及表型分析.方法应用Cre-LoxP系统繁育成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠.取4、12周龄的敲除小鼠各10只,以同龄同系野生型小鼠各10只为对照,行全身及脊柱X线摄像观察；收集脊柱标... 详细信息

目的通过Osterix基因敲除获得先天性脊柱侧凸动物模型及表型分析.方法应用Cre-LoxP系统繁育成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠.取4、12周龄的敲除小鼠各10只,以同龄同系野生型小鼠各10只为对照,行全身及脊柱X线摄像观察；收集脊柱标本行苏木素-伊红（HE）染色及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察并检测.结果成功获得成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠,X线显示敲除小鼠中75％出现严重的脊柱侧凸,Cobb角平均值为35..HE染色显示敲除小鼠椎体生长板增宽,椎体骨量增加,TRAP染色显示腰椎中破骨细胞数量显著减少（P＜0.05）.结论小鼠成骨细胞中条件性敲除Osterix基因后成功获得先天性脊柱侧凸模型,提示Osterix在先天性脊柱侧凸的发病中有重要作用.

关键词： Osterix 先天性脊柱侧凸条件性基因敲除模型,动物

条件性敲除Med23基因对成年小鼠海马新生神经元及行为的影响

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神经解剖学杂志 2021年第3期37卷 293-298页

作者：孙颖志陈国艳空军军医大学唐都医院放射科西安710038 空军军医大学唐都医院神经内科西安710038

目的:观察条件性敲除中介体亚单位23(Med23)基因对小鼠海马神经发育和行为的影响。方法:利用灌胃方法给予Med23 CKO小鼠他莫昔芬(TAM),通过括旷场实验、悬尾实验和黑白箱实验检测检测小鼠的行为,利用免疫荧光染色检测小鼠海马5-溴-2-脱... 详细信息

目的:观察条件性敲除中介体亚单位23(Med23)基因对小鼠海马神经发育和行为的影响。方法:利用灌胃方法给予Med23 CKO小鼠他莫昔芬(TAM),通过括旷场实验、悬尾实验和黑白箱实验检测检测小鼠的行为,利用免疫荧光染色检测小鼠海马5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)、mKi-67基因编码核蛋白(Ki67)、微小染色体维持蛋白2(MCM2)、双皮质素(DCX)和神经源性分化因子(NeuroD)的表达。结果:与WT小鼠相比,Med23 CKO小鼠中间静息时间明显缩短(P性细胞数也明显减少。结论:Med23参与调节小鼠海马神经化生,海马Med23缺失会导致小鼠出现焦虑及抑郁行为。

关键词：条件性基因敲除中介体复合物23亚单位焦虑抑郁小鼠

软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析

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中国骨质疏松杂志 2009年第1期15卷 9-15页

作者：雷子贤戚华兵苏楠赵子瑜陈锚锚何启芬赵玲金旻谢杨丽李福兵杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠（Pten^flox/flox小鼠），与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠（Col2αCre）交配，获得在软骨细胞中特异敲除PTEN... 详细信息

目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过PTEN条件性基因敲除小鼠（Pten^flox/flox小鼠），与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠（Col2αCre）交配，获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠（Co12αCre：Pten^flox/flox）；同时，利用Pten^flox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠（Fgfr3^G369C/小鼠，即ACH小鼠）交配，子代杂合子小鼠（Pten^flox/＋：ACH）之间再交配，获得Pten^flox/flox：ACH小鼠；通过Col2αCre：Pten^flox/flox和Pten^flox/flox：ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠（Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH）。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定，免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率，通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析。结果获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠，免疫荧光染色证实Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低。初步的表型分析显示：Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠身长、尾长均较Pten^flox/flox：ACH小鼠长（P〈0．05，n=5）。Col2αCre：Pten^flox/flox：ACH小鼠表型，较Pten^flox/flox：ACH小鼠的侏儒表型有所缓解。结论采用基于Cre／LoxP系统的条件性基因敲除策略，获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠，表型分析初步显示，软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型。该小鼠的获得，为研究P13K／AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台。

关键词： PTEN FGFR3 软骨发育不全条件性基因敲除小鼠