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杜鹃花总黄酮对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉TRPV4的作用研究

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中国药理学通报 2017年第5期33卷 685-691页

作者：韩军程小龙胡坤媚徐杭杭陈志武皖南医学院基础医学院药理学教研室国家中医药管理局中药药理三级实验室安徽芜湖241002 安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230031

目的探讨杜鹃花总黄酮(TFR)对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉(CBA)瞬时感受器电位通道香草酸受体亚型Ⅳ(TRPV4)的作用。方法以改良四血管阻断法(4-VO)建立大鼠缺血/再灌注模型(IR);运用加压灌注法和细胞膜电位记录法,离体观察TFR对... 详细信息

目的探讨杜鹃花总黄酮(TFR)对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉(CBA)瞬时感受器电位通道香草酸受体亚型Ⅳ(TRPV4)的作用。方法以改良四血管阻断法(4-VO)建立大鼠缺血/再灌注模型(IR);运用加压灌注法和细胞膜电位记录法,离体观察TFR对KCl预收缩IR大鼠CBA的舒张作用和超极化反应及TRPV4阻断剂钌红(RR)对其的影响;采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法,在体观察TFR对IR大鼠脑血管内皮细胞TRPV4 mRNA和蛋白表达以及RR对其的影响。结果递增浓度的TFR可诱导IR大鼠离体CBA产生明显剂量依赖性的舒张效应和超极化反应。去除血管内皮细胞后,TFR仍能介导CBA产生较弱的舒张作用和超极化反应,与血管内皮完整组比较,差异有显著性(P<0.01);去除一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)舒张作用后,TFR仍能诱导IR大鼠CBA产生明显的舒张效应和超极化作用,此作用可被TRPV4通道阻断剂RR抑制;TFR可明显上调IR大鼠脑血管TRPV4 mRNA和蛋白表达,而阻断TRPV4可明显抑制TFR上调的TRPV4基因表达。结论 TFR能介导IR大鼠CBA产生较强的内皮依赖性和较弱的内皮非依赖性血管舒张反应和超极化作用,其内皮依赖性效应推测可能与TFR促使脑血管内皮激活,促进内皮细胞生成和释放内皮衍生性超极化因子(EDHF)增多,继而激活TRPV4,引发Ca^(2+)内流,导致血管平滑肌细胞膜超极化,产生血管舒张效应有关。

关键词：杜鹃花总黄酮缺血/再灌注损伤脑基底动脉超极化作用血管舒张效应内皮衍生性超极化因子瞬时感受器电位通道香草酸受体亚型Ⅳ

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杜鹃花总黄酮对豚鼠心室肌细胞生物电的影响

中国药理学通报 2007年第6期23卷 773-776页

作者：范一菲孔德虎陈志武高杉安徽医科大学生理学教研室安徽医科大学药理学教研室安徽合肥230032

目的观察杜鹃花总黄酮(total flavones of rhododen-dron,TFR)对离体豚鼠右心室乳头肌细胞生物电的影响,以探讨其抗心肌缺血的作用机制。方法采用标准玻璃微电极技术记录心肌细胞的静息电位以及动作电位。结果25、50mg·L-1的TFR可明显... 详细信息

目的观察杜鹃花总黄酮(total flavones of rhododen-dron,TFR)对离体豚鼠右心室乳头肌细胞生物电的影响,以探讨其抗心肌缺血的作用机制。方法采用标准玻璃微电极技术记录心肌细胞的静息电位以及动作电位。结果25、50mg·L-1的TFR可明显缩短动作电位复极50%、90%时程(APD50、APD90),但100、200、400mg·L-1却可明显延长APD50和APD90,200、400mg·L-1的TFR可明显降低0期的动作电位峰值(APA)及动作电位去极化最大速率(Vmax),400mg·L-1的TFR使静息电位减小,200mg·L-1TFR能延长心室肌细胞有效不应期(ERP)。结论低浓度的TFR可能有钙阻滞作用,高浓度的TFR可能对钾通道有一定的阻断作用,200mg·L-1TFR能延长心室肌细胞有效不应期。

关键词：杜鹃花总黄酮心肌细胞细胞内记录豚鼠

杜鹃花总黄酮药理性预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中炎症反应的影响

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中国药理学通报 2007年第10期23卷 1349-1352页

作者：张建华武征陈志武安徽医科大学药理学教研室安徽合肥230032

目的观察杜鹃花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)药理性预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对心肌细胞炎症反应的影响。方法在Langen-dorff离体灌流大鼠心脏,采用停灌K-H液30min后再灌注40min的方法制备大鼠心肌... 详细信息

目的观察杜鹃花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)药理性预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对心肌细胞炎症反应的影响。方法在Langen-dorff离体灌流大鼠心脏,采用停灌K-H液30min后再灌注40min的方法制备大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。TFR药理性预处理(TFR pharmacological preconditioning,TFR-PP)大鼠心脏,在缺血前灌注含TFR的K-H液5min,然后用不含TFR的K-H液灌注5min,如此反复,共3次。观察心肌组织病理学损伤,心肌组织中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及髓过氧化物酶(MPO)活力的变化,心肌组织中核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达。结果在Langendorff离体灌流模型中,TFR-PP(50、100mg.L-1)可明显抑制缺血/再灌注大鼠心肌组织中CK和LDH活性的降低,同时能明显改善心肌组织病理学损伤;TFR-PP(25、50、100mg·L-1)能不同程度的抑制心肌组织中MPO的增加及NF-κB、TNF-α、ICAM-1的表达。结论TFR药理性预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤有明显保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞炎症反应有关。

关键词：杜鹃花总黄酮药理性预适应心肌炎症

杜鹃花总黄酮对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠STIM-Orai调控的G蛋白偶联SOCE通路的影响

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中国药理学通报 2021年第12期37卷 1736-1742页

作者：赫玉香陆嘉珺王书凡姜晨晨施磊尹秀云陈卓曹迪沈学彬韩军国家中医药管理局中药药理三级实验室安徽省皖南地区植物药活性物质筛选与再评价工程实验室安徽省多糖药物工程技术研究中心皖南医学院药物研发中心药学院药理学教研室安徽芜湖241002

目的探究杜鹃花总黄酮(TFR)对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠STIM-Orai调控的G蛋白偶联钙库操作性Ca2+内流(SOCE)通路的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(MCAO)组、TFR组、TFR+2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)组、2-APB组,每... 详细信息

目的探究杜鹃花总黄酮(TFR)对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠STIM-Orai调控的G蛋白偶联钙库操作性Ca2+内流(SOCE)通路的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(MCAO)组、TFR组、TFR+2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)组、2-APB组,每组各8只。ELISA检测大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α的活性;HE染色检测大鼠缺血脑组织的病理变化;TTC染色观察大鼠脑组织梗死情况;Western blot和RT-qPCR分别检测脑组织STIM1、STIM2、Orai1、caspase-3、PKB的蛋白及mRNA表达水平。结果TFR组大鼠神经功能评分相较于MCAO组明显降低,脑组织病理损伤明显改善,梗死率明显降低,血清中IL-1、IL-6、TNF-α的活性明显降低,脑组织中STIM1、STIM2、Orai1、caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调,PKB明显上调,而加入SOCE通道抑制剂后,以上作用进一步加强。结论TFR可减轻MCAO大鼠脑损伤,机制可能与其抑制脑组织SOCE通路,降低炎症介质活性,减少Ca^(2+)超载和细胞凋亡等有关。

关键词：杜鹃花总黄酮缺血/再灌注损伤 STIM Orai SOCE通道 2-APB

杜鹃花总黄酮通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

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安徽医科大学学报 2024年第6期59卷 1047-1052页

作者：余孝海金宇孙敏琼郭欠影从辉安徽医科大学基础医学院合肥230032 安徽医科大学第一附属医院病理科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院东城院区神经内科合肥231600

目的探索杜鹃花总黄酮(TFR)通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路保护脑缺血再灌注(I/R)损伤的机制。方法采用大脑中动脉闭塞术(MCAO)建立大鼠I/R模型,将造模成功大鼠随机分为假手术(Sham)、脑缺血再灌注(MCAO)和脑缺血再灌注术... 详细信息

目的探索杜鹃花总黄酮(TFR)通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路保护脑缺血再灌注(I/R)损伤的机制。方法采用大脑中动脉闭塞术(MCAO)建立大鼠I/R模型,将造模成功大鼠随机分为假手术(Sham)、脑缺血再灌注(MCAO)和脑缺血再灌注术后TFR 200 mg/kg干预(TFR 200 mg/kg)组,制备MCAO大鼠模型,在脑缺血再灌注损伤手术后,TFR 200 mg/kg组连续14 d给予TFR(200 mg/kg)药物溶液。术后14 d,依据大鼠神经功能评分,脑血流图观察脑血流情况,处死大鼠,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织细胞形态学变化,试剂盒检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH或LD)和神经特异性烯醇化酶(NSE)两种酶活性;ELISA试剂盒检测白细胞介素-1(IL-1)和IL-6水平,Western blot和免疫组化同时检测大鼠脑组织中裂解型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、caspase-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白的表达水平。结果脑缺血再灌注处理后,MCAO导致了大鼠神经功能异常,神经功能评分指数显著升高,脑组织病理形态学和脑血流量变化明显,脑组织中cleaved caspase-3、caspase-8、TNF-α蛋白的表达水平显著增加,血清中LDH、NSE、IL-1、IL-6水平明显升高;TFR 200 mg/kg组大鼠神经功能评分明显降低,脑组织病理损伤显著改善,脑组织中cleaved caspase-3、caspase-8、TNF-α蛋白的表达以及血清中LDH、NSE、IL-1、IL-6水平降低。结论TFR可能通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路减轻脑缺血缺氧性损伤。

关键词：杜鹃花总黄酮脑缺血再灌注脑缺血缺氧性损伤凋亡

杜鹃花总黄酮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的延迟相保护作用

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中国中医基础医学杂志 2007年第3期13卷 192-194页

作者：张建华陈志武武征安徽医科大学药理学教研室安徽合肥230032

目的:观察杜鹃花总黄酮(total flavones of Rhododendra,TFR)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的延迟相保护作用及其机制。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支30min造成心肌缺血,随后松线再灌60min。TFR预处理(TFR pharmacological precondit... 详细信息

目的:观察杜鹃花总黄酮(total flavones of Rhododendra,TFR)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的延迟相保护作用及其机制。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支30min造成心肌缺血,随后松线再灌60min。TFR预处理(TFR pharmacological preconditioning,TFR-PP)组在心肌缺血前24h分别静脉给予3次各剂量的TFR(10、20、40mg/kg),分3次给药,每次给药5min,中间间隔5min。观察心肌缺血再灌注损伤后其心电图ST段的改变、心脏梗死区与缺血危险区的比值(IS/AAR)、血清中肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化,同时观察血清中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力的变化。结果:10、20、40mg/kg TFR-PP可不同程度地抑制心电图ST段的升高,降低血清中CK、LDH的活力及心脏IS/AAR,同时降低血清中MDA、NO的含量,升高SOD、NOS的活力。结论:TFR-PP对大鼠心肌缺血再灌注损伤有明显的延迟相保护作用,其作用与减少自由基过氧化、增加NO生成等有关。

关键词：杜鹃花总黄酮药理性预适应心肌缺血再灌注一氧化氮自由基

杜鹃花总黄酮对大鼠脑缺血/再灌注后不同阶段STIM-Orai调控的SOCE通路的影响

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杜鹃花总黄酮对大鼠脑缺血/再灌注后不同阶段STIM-Orai调控的SOCE...

作者：赫玉香皖南医学院

学位级别：硕士

目的:探究杜鹃花总黄酮(Total flavones of Rhododendra simsii Planch,TFR)通过基质相互作用分子(Stromal interaction molecule,STIM)/钙释放激活钙通道调节分子(Calcium release-activated calcium channel modulator,Orai)调控的钙库操作性钙内流(Store-operated calcium entry,SOCE)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠不同阶段脑组织的影响。方法:1.在体实验:运用大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)构建局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将SD雄性大鼠随机分为13组,分别是假手术组(Sham)、MCAO组(1 d、3 d、14 d)、TFR组(1 d、3 d、14 d)、TFR+SOCE抑制剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2APB)组(1 d、3 d、14 d)、2APB组(1 d、3 d、14 d),每组各8只。除Sham组,其余各组建立MCAO模型。除Sham、MCAO组大鼠给予生理盐水(Normal saline,NS)外,1 d组TFR(100 mg/kg)采用尾静脉注射给药,3 d、14 d组均灌胃给予TFR(60 mg/kg)直至取材,SOCE通道抑制剂组术后腹腔注射2APB(2.5mg/kg)。ELISA检测血清中炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的活性;HE染色检测大鼠缺血脑组织的病理变化;TTC染色检测大鼠脑组织梗死的情况;Western blot和RT-q PCR分别检测各时段脑组织STIM1、STIM2、Orai1、Caspase-3、PKB的蛋白及mRNA表达水平;免疫荧光检测慢性恢复期14 d时各组大鼠脑神经元的生长情况。2.离体实验:体外培养PC12细胞,检测急性期细胞水平变化,随机分为5组,分为正常组(Normal)、缺氧复氧组(Model)、TFR组(0.3 mg/m L)、TFR+2APB组(0.3 mg/m L+22.51 mg/m L)、2APB组(22.51 mg/m L)。采用CCK-8检测TFR不同浓度下的细胞活力;采用激光共聚焦技术检测TFR及SOCE信号通路阻断剂对缺氧复氧PC12细胞Ca浓度的变化;运用流式细胞仪检测TFR及SOCE信号通路抑制剂对缺氧复氧PC12细胞凋亡的影响。结果:1.在体实验:(1)与Sham组相比,MCAO大鼠的神经功能在各个时段的评分均显著增加(P<0.01);与同时段MCAO组相比,TFR能够明显降低各个时间段大鼠的神经功能评分(P<0.05),1 d、3 d加入阻断剂2APB后,大鼠神经功能评分进一步降低(P<0.01)。而14 d时,TFR+2APB组神经功能评分明显高于TFR组(P<0.05)。(2)ELISA检测法结果显示,各时间点的MCAO大鼠血清中的IL-1、IL-6、TNF-α含量均显著高于Sham组(P<0.01);与同时段MCAO组相比,各时间段TFR组IL-1、IL-6、TNF-α含量均显著下降(P<0.05,P<0.01);与同时段TFR组相比,1 d、3 d TFR+2APB组IL-1、IL-6、TNF-α的含量均明显降低(P<0.05),而14 d组以上指标均显著高于TFR组(P<0.05);与同时段2APB组比较,各时间段TFR+2APB组IL-1、IL-6、TNF-α含量均明显降低(P<0.05,P<0.01)。(3)HE染色结果显示,Sham组细胞排列规则,核仁清晰,而不同时段的MCAO组形态均不规则,表现为细胞结构紊乱、空泡形成、细胞坏死。与同时段MCAO组相比,各时间点TFR组大鼠梗死侧脑组织细胞坏死明显减少,加入抑制剂2APB后,1 d、3 d脑损伤程度进一步显著降低,但14 d组脑损伤加重。TTC染色法结果显示,各时间段MCAO组出现明显脑梗死灶。与同时段MCAO组相比,各时间点TFR组大鼠脑梗死灶明显减少,脑梗死率明显降低(P<0.01),尤其是14 d TFR组效果最明显;与同时段TFR组相比,1 d、3 d TFR+2APB组脑梗死面积显著减少,脑梗死率显著降低(P<0.01),而14 d组则明显增大(P<0.01);与同时段2APB组相比,各时间段TFR+2APB组脑梗死率均显著降低(P<0.05)。(4)Western blot和RT-q PCR结果显示,与Sham组相比,1 d、3 d MCAO大鼠脑组织中STIM1、STIM2、Orai1、Caspase-3的蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05),PKB蛋白及mRNA表达明显降低(P<

关键词：杜鹃花总黄酮缺血再灌注损伤 SOCE通道 STIM-Orai 2APB

杜鹃花总黄酮抗大鼠脑血管内皮细胞缺氧性损伤作用及其促进H2S生成抑制RhoA-ROCK信号通路的机制

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杜鹃花总黄酮抗大鼠脑血管内皮细胞缺氧性损伤作用及其促进H2S生...

作者：奚娇娇安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:缺血性脑部疾病是全世界人类死亡一个主要原因的疾病,随着年龄的增长,它发生的概率也越发增大。脑缺血/再灌注(I/R)损伤是指脑部缺血一段时间后再恢复血液供应而产生的损伤。当前,我们对于缺血缺氧性脑部疾病的具体机制尚未完全清... 详细信息

背景:缺血性脑部疾病是全世界人类死亡一个主要原因的疾病,随着年龄的增长,它发生的概率也越发增大。脑缺血/再灌注(I/R)损伤是指脑部缺血一段时间后再恢复血液供应而产生的损伤。当前,我们对于缺血缺氧性脑部疾病的具体机制尚未完全清楚,并且针对其治疗药物的开发也未有很大进展。有研究表明,Rho A-ROCK通路参与了缺血性脑损伤的病理过程,缺血性脑损伤可诱导Rho A激活,ROCK和ROCK表达和活性上调,导致神经元细胞死亡,抑制Rho A-ROCK通路可使脑缺血损伤的大鼠海马神经损伤减小,并且研究已证实内皮源性HS可抑制Rho A-ROCK信号通路对抗缺血性脑损伤。杜鹃花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)是从杜鹃花中提取的黄酮类有效部位,具有保护心脑血管方面的作用。前期研究发现TFR有明显抗缺血性脑损伤作用,并初步表明缺氧性损伤可导致脑血管内皮细胞中CSE蛋白表达和HS生成的减少,但尚不清楚TFR对缺氧性损伤中的脑血管内皮细胞有无保护作用及其与HS生成的关系。同样地,TFR对脑血管内皮中Rho A-ROCK信号通路影响的研究也未见报道。因此,本研究旨在探讨TFR对大鼠脑血管内皮细胞缺氧性损伤有无保护作用,并探讨其作用与HS生成及Rho A-ROCK信号通路的关系,为缺血性脑部疾病提供新的治疗思路。目的:1.研究TFR对H/R大鼠脑血管内皮细胞损伤有无保护作用。2.研究TFR对H/R大鼠脑血管内皮细胞保护作用的作用与HS以及Rho A-ROCK信号通路的关系。方法:培养原代大鼠脑血管内皮细胞,构建缺氧复氧模型(H/R)。分组为Control、Model、ACh(1μmol/L)、TFR(90mg/L、270mg/L、810mg/L)、ACh(1μmol/L)+PPG(100μmol/L)、TFR(810mg/L)+PPG(100μmol/L)、ACh(1μmol/L)+ASP(100μmol/L)、TFR(810mg/L)+ASP(100μmol/L)、CCG-1423(1μmol/L)、TFR(810mg/L)+CCG-123(1μmol/L)组。缺氧8h,复氧6h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,试剂盒检测LDH活性、MDA以及HS含量,Western blot检测CSE、3-MST、Rho A、ROCK、ROCK蛋白表达,ELISA检测Rho A、ROCK1、ROCK2活性。结果:1.与对照组相比,模型组细胞活力显著降低,MDA和LDH水平显著提高(P<0.01)TFR各剂量组(90、270、810 mg/L)明显减弱了H/R损伤造成的细胞活力的降低(P<0.01或P<0.05),并且减弱了MDA含量和LDH活性的升高(P<0.05)。此外,给予ACh(1μmol/L)与TFR有相似的作用效果。结果表明TFR可以抑制H/R损伤诱导的大鼠脑血管内皮细胞的细胞内酶渗漏和脂质过氧化,对其有保护作用。与对照组相比,模型组H/R损伤后血管内皮细胞HS含量显著降低,加入TFR后,在270 mg/L和810 mg/L TFR组中,内皮细胞中的HS含量分别显著增加(P<0.05)。与对照组相比,H/R模型组脑血管内皮细胞中的CSE和3-MST蛋白表达明显降低(P<0.05)。给药组,270 mg/L和810 mg/L TFR处理显著增加CSE蛋白的表达(P<0.05)。而对于蛋白3-MST,810 mg/L TFR组能够增加3-MST表达(P<0.05)。与对照组相比,H/R损伤导致模型组ROCK、ROCK和Rho A蛋白表达和活性显着增加(P<0.01或P<0.05)。相比之下,TFR(270和810 mg/L)可显著降低ROCK、ROCK和Rho A蛋白的表达和活性(P<0.05),ACh(1μmol/L)与TFR组的作用效果相似(P<0.01或P<0.05)***合酶CSE抑制剂(PPG 100μmol/L)预处理30 min后,相比于TFR(810mg/L)组,TFR+PPG组H/R的大鼠脑血管内皮细胞活力明显降低、LDH活性明显升高(P<0.01)、大鼠脑血管内皮细胞HS含量明显下降(P<0.05)。而PPG预处理后,ACh(1μmol/L)与TFR组的效果相似(P<0.01或P<0.05)。结果表明TFR抗大鼠脑血管内皮细胞H/R损伤作用与CSE有关,并且TFR可以促进脑血管内皮细胞中CSE产生HS。PPG预处理后,与TFR(810 mg/L)相比,TFR+PPG组抑制H/R诱导大鼠脑血管内皮细胞中ROCK、ROCK及Rho A蛋白表达与活性升高作用有明显的减弱(P<0.05,P<0.01)。这些结果提示TFR抑制H/R大鼠脑血管内皮细胞ROCK、ROCK和Rho A蛋白表达与活性的

关键词：杜鹃花总黄酮 RhoA-ROCK信号通路硫化氢缺氧复氧

杜鹃花总黄酮改善缺血性脑损伤的保护作用与脑基底动脉TRPV4、IKca及SKca通道的关系

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杜鹃花总黄酮改善缺血性脑损伤的保护作用与脑基底动脉TRPV4、IKc...

作者：程小龙皖南医学院

学位级别：硕士

目的:探讨杜鹃花总黄酮(TFR)改善缺血性脑损伤的保护作用与脑基底动脉瞬时受体电位通道4(TRPV4)、中电导的钙激活钾通道(IKca)、小电导的钙激活钾通道(SKca)的关系及可能存在的相关机制。方法:雄性SD(Sprague Dawley Rat)大鼠72只,8周龄... 详细信息

目的:探讨杜鹃花总黄酮(TFR)改善缺血性脑损伤的保护作用与脑基底动脉瞬时受体电位通道4(TRPV4)、中电导的钙激活钾通道(IKca)、小电导的钙激活钾通道(SKca)的关系及可能存在的相关机制。方法:雄性SD(Sprague Dawley Rat)大鼠72只,8周龄,体质量(240±20)g,自由饮食与饮水。适应性喂养7天后,通过四血管阻断法(four-vessel occlusion,4-VO)构建全脑缺血再灌注(CIR)模型。将CIR大鼠随机分为CIR组(NS,n=8)、TFR组(100 mg/kg,n=8)、TFR+TRPV4阻断剂HC-067047组(100 mg/kg+10 mg/kg,n=8)、HC-067047组(10 mg/kg,n=8)、TFR+IKca阻断剂TRAM-34组(100mg/kg+0.5 mg/kg,n=8)、TRAM-34组(0.5 mg/kg,n=8)、TFR+SKca阻断剂Apamin组(100 mg/kg+0.3 mg/kg,n=8)、Apamin组(0.3 mg/kg,n=8),以SD大鼠为假手术组(NS,n=8)。于夹闭两侧颈总动脉前30 min尾静脉注射上述药物,造模完成24 h后处死大鼠。脑电波记录仪检测脑组织缺血前,缺血25 min及再灌注2 h大鼠脑电波;造模前称量大鼠体重,造模完成后取脑组织称量其湿重,比较各组大鼠大脑重量指数差异;大鼠腹主动脉取血,分离血清,采用ELISA法检测血清中MDA含量与LDH活性;HE及尼氏染色分别观察大脑皮层病理学改变;采用动脉加压灌注法,观察TFR对CIR大鼠CBA产生舒张作用的影响及TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂对其产生的影响;Western blot法检测TFR对CIR大鼠脑基底动脉TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表达的影响及各阻断剂对TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表达的影响;RT-qPCR法检测TFR对CIR大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达的影响及各阻断剂对TRPV4、IKca、SKca通道mRNA表达的影响;激光共聚焦检测TFR对CIR大鼠CBA平滑肌细胞Ca浓度的影响以及TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂对其产生的影响。结果:(1)与Sham组相比,CIR组大鼠缺血前脑电波无明显变化;当缺血25min时,脑电波逐渐变平,波动变缓,波幅变低;再灌注2 h后脑电波逐渐恢复。(2)与Sham组相比,CIR组大鼠大脑重量指数明显升高(P0.05)。(3)ELISA法结果显示,CIR组与Sham组相比,大鼠血清中MDA含量及LDH活性显著升高(P<0.01);与CIR组相比,TFR组及TFR联用各通道阻断剂组MDA含量及LDH活性显著降低(P<0.05,P<0.01);与TFR组相比,TFR联用各阻断剂组MDA含量及LDH活性均有所升高(P<0.05,P<0.01)。(4)HE及尼氏染色显示CIR大鼠脑组织大量细胞萎缩变性、胞核深染、胞质空泡、神经纤维崩解,TFR组及TFR联用各阻断剂组脑组织病理变化呈不同程度改善。(5)动脉加压灌注结果显示,累加浓度的TFR能剂量依赖性的舒张CIR大鼠CBA,而使用TRPV4、IKca、SKca通道阻断剂预处理后出现不同程度抑制血管舒张反应的现象。(6)Western blot法结果表明,CIR组较Sham组,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与CIR组相比,TFR组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达水平显著升高(P<0.01),联用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达均有所升高(P<0.05),单用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01);与TFR组相比,各联用通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。(7)RT-qPCR结果显示,CIR组较Sham组,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达显著降低(P<0.01);与CIR组相比,TFR组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达显著升高(P<0.01),联用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表达均有所升高(P<0.01),单用各通道阻断剂组CBA中TRPV4、IKca、SKca mR

关键词：杜鹃花总黄酮缺血性脑损伤脑基底动脉内皮依赖性超极化因子瞬时受体电位通道4 小电导的钙激活钾通道中电导的钙激活钾通道