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生物工程学报 2022年第12期38卷 4658-4668页

作者：高涵龚劲松汪子凯苏畅许正宏史劲松江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生命科学与健康工程学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心江苏无锡214122

海藻糖酶在工业发酵和食品医药等领域应用广泛,我国缺乏性能优良工业品种的海藻糖酶,同时在应用研究领域还不够深入。本研究从自然界筛选获得一株产酸性海藻糖酶的杓兰果胶杆菌(Pectobacterium cypripedii),克隆获得其海藻糖酶基因PCTre... 详细信息

海藻糖酶在工业发酵和食品医药等领域应用广泛,我国缺乏性能优良工业品种的海藻糖酶,同时在应用研究领域还不够深入。本研究从自然界筛选获得一株产酸性海藻糖酶的杓兰果胶杆菌(Pectobacterium cypripedii),克隆获得其海藻糖酶基因PCTre,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)体系中实现了重组表达,在5 L发酵罐上28 h产酶达到4130 U/mL。酶学性质研究显示,PCTre能特异性水解海藻糖,最适反应温度和pH分别是35℃和5.5,在pH 4.0、4.5、5.0处理8 h后残余酶活仍超过80%,表现出良好的耐酸性。同时该酶还显示出优良的有机溶剂耐受性,在20%(V/V)乙醇溶液中处理24h仍能保留60%的酶活。进一步在含有20%(V/V)乙醇和7.5%海藻糖的模拟发酵体系中,当添加500 U/L PCTre,可在16 h内完全水解海藻糖,具有良好的应用于工业乙醇发酵的潜力。

关键词：海藻糖酶海藻糖杓兰果胶杆菌乙醇耐受性

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拟松材线虫体表微生物及其致病作用研究

拟松材线虫体表微生物及其致病作用研究

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作者：张兴华四川农业大学

学位级别：硕士

近年来在我国的许多非松材线虫疫区(重庆南山和福建邵武等)的马尾松发生大面积死亡,但是死树中没有发现松材线虫,而是大量拟松材线虫,确认了拟松材线虫对松树具有致病性,但它的致病机理目前还尚未有研究。本试验以某地拟松材线虫为材料... 详细信息

近年来在我国的许多非松材线虫疫区(重庆南山和福建邵武等)的马尾松发生大面积死亡,但是死树中没有发现松材线虫,而是大量拟松材线虫,确认了拟松材线虫对松树具有致病性,但它的致病机理目前还尚未有研究。本试验以某地拟松材线虫为材料,分离并鉴定其体表微生物;利用体表微生物的代谢产物处理马尾松松针,分析体表微生物对松针的致病作用,并筛选出强致病菌;将强致病菌的代谢产物分离为蛋白质和非蛋白液,室内测试其对马尾松松针苯丙烷类代谢途径的影响,选择效果显著的微生物的代谢产物对三年生马尾松进行接种,观察其致病结果,测试其对马尾松苯丙烷类代谢途径的影响,得到以下结论: 1.在拟松材线虫的体表分离到26种细菌和4种真菌。拟松材线虫在不同培养阶段,体表微生物体系不同,未经纯化培养的线虫体表微生物种类最多为30种、1次纯化后微生物种类变为21种、小麦培养基继代培养1次后20种、继代培养2次后为18种、继代培养3次后微生物种类是9种、继代培养4次后微生物数为7种、继代培养5次后为5种。在人工培养6次后,线虫体表还存在的菌有:枯草芽孢杆菌Ⅱ、枯草芽孢杆菌Ⅵ、嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ、荧光假单胞、解淀粉芽孢杆菌Ⅱ,这5种菌和线虫建立了牢固的附生关系,能长期在线虫体表附生。 2.从线虫体表分离到的微生物共30种,通过代谢产物粗测松针筛选出9种对马尾松致病作用明显的细菌,它们是:枯草芽孢杆菌Ⅲ、嗜麦芽寡养Ⅰ、杓兰果胶杆菌、解淀粉芽孢杆菌Ⅰ、枯草芽孢杆菌Ⅴ、肺炎杆菌Ⅰ、恶臭假单胞、嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ、根癌农杆菌。这9种菌在线虫体表的存在时间最长的为嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ为继代培养5次;恶臭假单胞、根癌农杆菌在纯化后消失;杓兰果胶杆菌、枯草芽孢杆菌Ⅲ、枯草芽孢杆菌Ⅴ、肺炎杆菌Ⅰ均在人工培养2代后消失,这说明拟松材线虫经继代培养2次后体表的致病微生物消失66%,这将影响拟松材的致病性。 3.本实验将代谢产物分离为蛋白和非蛋白液,室内处理松针,分12h,24h,36h测试松针总酚含量、PAL、PPO、POD活性变化,说明松树收到浸染情况。并筛选出致病作用最强的杓兰果胶杆菌非蛋白液。 4.将杓兰果胶杆菌的非蛋白液按原液,稀释1倍,菌原液进行接种,通过总酚含量、PAL、PPO、POD活性变化的表明,杓兰果胶杆菌的非蛋白液浓度越高致病力越强。将无菌拟松材线虫和拟松材线虫接种效果对比可知,拟松材线虫比无菌线虫作用强,说明拟松材线虫的体表微生物是其必要的致病因素。 5.拟松材线虫体表携带的杓兰果胶杆菌非蛋白液对马尾松有致病作用,杓兰果胶杆菌在线虫体表的附生是拟松材线虫致病的必要因素,也是杓兰果胶杆菌保持活力的必要条件。

关键词：拟松材线虫苯丙烷代谢杓兰果胶杆菌

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