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分泌抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体杂交—杂交瘤的建株

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生物制品资料选编 1991年第15期 126-129页

作者：刘瑛陶玉珍

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杂交－杂交瘤细胞系的建立及其生物学特性

中国免疫学杂志 1995年第6期11卷 362-365页

作者：王德斌曹明华赵德洪中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所

研究了以产生抗人小细胞肺癌相关抗原和ＣＤ３双特异性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）的杂交杂交瘤（Ｈｙｂｒｉｄ－ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）的方法及双特异性抗体的性质。两个具有不同表型（ＨＡＴ敏感／Ｎｅｏ拮抗和ＨＡ... 详细信息

研究了以产生抗人小细胞肺癌相关抗原和ＣＤ３双特异性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）的杂交杂交瘤（Ｈｙｂｒｉｄ－ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）的方法及双特异性抗体的性质。两个具有不同表型（ＨＡＴ敏感／Ｎｅｏ拮抗和ＨＡＴ拮抗／Ｎｅｏ敏感）杂交瘤细胞系，经常规方法进行融合。最后选出７个分泌双特异性抗体的杂交。杂交瘤细胞系并对其中一个克隆系细胞进行了测示研究。结果表明，该克隆系细胞培养上清能有效增强ＬＡＫ细胞对靶瘤细胞的杀伤活性，表明其具有临床应用前景。

关键词：小细胞肺癌杂交-杂交瘤双特异性抗体肺肿瘤

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的提纯及应用

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中国生物制品学杂志 1995年第1期8卷 19-22页

作者：陈利民刘瑛陶玉珍卫生部成都生物制品研究所成都610063

应用杂交—杂交瘤技术中的三瘤体（Trioma）法，获得的能稳定分泌抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的细胞株BS－33所诱生的BALB／c小鼠腹水为材料，采用三种不同的层析方法（DEAE－52、羟基磷灰石及双亲和层析）均能提纯出该双特异抗体... 详细信息

应用杂交—杂交瘤技术中的三瘤体（Trioma）法，获得的能稳定分泌抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的细胞株BS－33所诱生的BALB／c小鼠腹水为材料，采用三种不同的层析方法（DEAE－52、羟基磷灰石及双亲和层析）均能提纯出该双特异抗体。用于临床检测HBSAg，与科华试剂检测结果符合率为100％。

关键词：杂交-杂交瘤三瘤体双特异单克隆抗体 HBsAg

抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

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抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体的制备与初步应用

作者：孟文霞河北医科大学

学位级别：硕士

目的：制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体，建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等，本实验是用人A型红细胞作指示剂，用间接凝集反应测定p24抗原，方法简便、快速，无污染，比较... 详细信息

目的：制备抗HIV p24和抗人A型红细胞双特异性抗体，建立检测HIV p24抗原的新方法。目前检测p24抗原的方法有ELISA、免疫层析、凝集试验等，本实验是用人A型红细胞作指示剂，用间接凝集反应测定p24抗原，方法简便、快速，无污染，比较敏感。方法：基因工程p24抗原免疫小鼠4次，历时2个月，取脾细胞与骨髓瘤细胞株Sp2／0，用PEG融合，HAT选择培养和间接ELISA筛选分泌抗p24抗体阳性的杂交瘤细胞，三次克隆化后得稳定分泌抗p24抗体的杂交瘤细胞株。选其中一株2-E，与本室保存的抗人A型红细胞杂交瘤株S，作为再杂交的备用细胞株，分别用不同浓度的8-氮鸟嘌呤(8-Ag)和5-溴-脱氧尿嘧啶对两株细胞进行驯化培养，使分别成为次黄嘌岭鸟嘌吟磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷株2-E-A和胸苷激酶(TK)缺陷株S-B，并测定其Ig类别。取驯化好并处于对数生长期的2-E-A和S-B细胞，再常规融合和筛选，三次克隆化后得稳定分泌双特异性抗体的杂交-杂交瘤细胞株6株。选其中一株3-H做杂交-杂交瘤细胞染色体计数，同时计数两母株2-E-A和S-B的染色体数：制备腹水型和上清型抗体，用三种方法同时检测其中的双特异性抗体、单特异性抗人红细胞抗体和抗p24抗体，即红细胞固相吸附法测双特异中文摘要性抗体，红细胞凝集试验测单特异性抗人A型红细胞抗体，间接ELISA法测抗p24抗体;用腹水型抗体做耐热性及耐冻融实验。耐热性实验为56”C 30分钟，37C保存 l——7天，及4℃保存7无。耐冻融实验为取腹水于上0℃ 冻实后室温下自然融化，反复6次后测效价。由于杂交－杂交瘤株呵同时产主抗p24和红细胞的双特异性抗体、抗t p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体，所以对杂交瘤培养上清和腹水型抗体进行纯化，以获得较纯双持异性抗体。方法是先用硫酸绥盐析，再过亲和层析柱，即 3 3％饱和硫酸按沉淀后，透祈过夜，上 p24抗原做配体的滨化氰活化的Sepharose 4B柱，流洗掉杂蛋白和抗人红细胞单特异性抗体后，再洗脱并收集双特异性抗体。用双特异性抗体致敏人A型红细胞做指示剂，以抗p24单特异件单克隆抗体9A7做交联剂，建立间接血凝检测p24 抗原的新方法，并初步应用于检测系列稀释的p24抗原以确定测定的敏感性。结果：获得5株产抗p24单克隆抗体的稳定杂交瘤c 选择其中的2工。细胞株作为再杂交的备用细胞，其腹水型抗体的ELISA效价为1：160万。用于再杂交的另一细胞株为本室保存的分泌抗人A型红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株S;，其血凝效价为l：16000。测定2＊4及SZ单克隆抗体的 Ig类别，分别为 IgGZa 不 IgG3。用 20。g／ml Skg驯化 2－E4，得 HGPRT缺陷株 2上4人。用 20。g．／m1 5－BrdU驯化S。，得TK缺陷株S。－B。2－E4＊和 S。＊在HAT 液中培养，均于一周内死亡。取2上厂人和 S厂士常规融合筛选后，经亚克隆化3次，获得6株杂交－杂交瘤稳定株。 2 千文摘要选其中的3十;做染色体计数，为132土15条，同时计数两母株的染色体数，2上。为 84土 9条，S。为 89士 9条J十;的腹水型和上清型双特异性抗体的效价分别为1：16000 和 1：64，同时测定腹水型抗体抗p24抗体活性及抗人A 型红细胞凝集抗体活性，效价分别为 1：800和 1：16000。证明3十;细胞株不是只分泌双特异性抗体。将此混合抗体盐析后过p24亲和层祈柱，流洗出的杂蛋白亘接血凝试验阳性，再洗脱出的p24特异性蛋白有两个峰，第一个峰双特异性抗体及抗p24抗体测定均阳性，第一个峰仅抗 p24抗体阳性，双特异性抗体阴性，两峰血凝试验均为阴性。证明第一个峰是纯化的双特异性抗体。这样，分离出双特异性抗体，并证实杂交－杂交瘤除分泌抗p24和人红细胞的双特异性抗体外，还分泌抗p24单特异性抗体和抗人A型红细胞单特异性抗体。取杂交－杂交瘤株3叫;的腹水鉴定双特异性抗体的耐热性和耐冻融性，结果56℃作用30分钟效价下降一个稀释度;37℃放置2大后效价下

关键词：抗HIV p24单克隆抗体抗人A型红细胞单克隆抗体杂交-杂交瘤双特异性抗体HIV p24抗原的检测红细胞间接凝集

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体纯化方法的比较研究

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生物制品资料选编 1994年第17期 76-83页

作者：陈利民刘瑛卫生部成都生物制品研究所

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的纯化

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生物制品资料选编 1991年第15期 130-134页

作者：陈利民刘瑛

细胞融合法制备抗人CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体

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第一军医大学学报 2001年第12期21卷 902-905页

作者：苏瑾张亚莉郭志兵车小燕王小宁第一军医大学南方医院呼吸科广东广州510515 第一军医大学分子免疫研究所广东广州510515

目的制备抗人CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体(Bispecificantibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交-杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定。方法将抗人CD3单克隆抗体细胞株采用8-AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株,再通过FuGENETM6转染含neo基因质粒pCDa... 详细信息

目的制备抗人CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体(Bispecificantibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交-杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定。方法将抗人CD3单克隆抗体细胞株采用8-AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株,再通过FuGENETM6转染含neo基因质粒pCDaA3,制备成具有双标记杂交瘤αCD3HATS G418R亚系,与抗人IgMμ链单克隆抗体细胞株融合,通过ELISA法及流式细胞仪筛选,制备分泌BsAb的细胞株。结果融合6次,共接种1080孔,共得5株抗CD3-抗IgM杂交-杂交瘤。经亚克隆后,其中2株体外连续传代培养2月仍保持良好的分泌BsAb功能。结论采取细胞融合法可成功制备分泌BsAb的杂交-杂交瘤,其稳定性及效价与亲本杂交瘤相似。

关键词：双特异性抗体细胞融合抗人CD3抗体抗人IgMμ链抗体杂交-杂交瘤