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结核分枝杆菌杂交信号放大检测方法的建立

中国生物制品学杂志 2009年第2期22卷 185-187页

作者：王海河赵春燕李凡吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室长春130021

目的建立结核分枝杆菌杂交信号放大检测方法。方法构建纳米颗粒信号放大载体,建立杂交信号放大方法,检测标本中结核分枝杆菌特异性的插入序列IS6110。应用该方法检测124份临床结核患者标本,并与细菌培养和生化鉴定法的检测结果进行比较... 详细信息

目的建立结核分枝杆菌杂交信号放大检测方法。方法构建纳米颗粒信号放大载体,建立杂交信号放大方法,检测标本中结核分枝杆菌特异性的插入序列IS6110。应用该方法检测124份临床结核患者标本,并与细菌培养和生化鉴定法的检测结果进行比较,确定该方法的灵敏度和特异性。结果杂交信号放大方法检测临床标本的灵敏度为87.7%,特异性为92.2%,假阳性率为7.8%,假阴性率为12.3%。结论已建立具有较高灵敏度和特异性的杂交信号放大检测方法,该方法操作简便、快速,可作为结核分枝杆菌临床标本的检测方法。

关键词：杂交信号放大结核分枝杆菌

两种标记方法对cDNA芯片杂交信号的初步分析

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中国兽医科学 2016年第3期46卷 338-343页

作者：杨国淋赵松黄小波马锐张仙滑翔赵玉佳曹三杰文翼平伍锐文心田四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川成都611130

为研究两种不同的标记方法对杂交效率的影响,将含NDV的F和HN基因、IBV的M和N基因、ILTV的TK和gB基因的重组质粒作为靶基因,分别采用Cy3直接引物标记法和间接掺入标记法进行PCR扩增。然后将荧光标记的样品与芯片进行杂交,收集扫描后的输... 详细信息

为研究两种不同的标记方法对杂交效率的影响,将含NDV的F和HN基因、IBV的M和N基因、ILTV的TK和gB基因的重组质粒作为靶基因,分别采用Cy3直接引物标记法和间接掺入标记法进行PCR扩增。然后将荧光标记的样品与芯片进行杂交,收集扫描后的输出图像和荧光强度信号值,分析两种标记方法对芯片杂交效率的影响。结果显示,Cy3引物标记方法所获得NDV、IBV、ILTV芯片扫描数据结果,图像直观判断均优于间接掺入标记方法。表明Cy3直接引物标记法是一种能够提高杂交的信号值,降低背景信号值,提高杂交效率的方法,有利于检测型基因芯片的应用。

关键词：标记方法杂交信号基因芯片

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串联重复核酸序列构建及其杂交信号放大作用

生物医学工程学杂志 2004年第1期21卷 38-41页

作者：彭晓谋黄仰甦顾琳陈雪娟高志良中山大学附属第三医院广州510630

采用交错延伸聚合酶链反应技术将含重复单位的 DNA片段拼接成 4串联重复核酸序列 ,再用重复克隆方式获得含 2 5串联重复核酸序列的重组载体。通过杂交产物直接凝胶电泳和斑点杂交等方法分析其信号放大作用。经凝胶电泳和限制性内切酶分... 详细信息

采用交错延伸聚合酶链反应技术将含重复单位的 DNA片段拼接成 4串联重复核酸序列 ,再用重复克隆方式获得含 2 5串联重复核酸序列的重组载体。通过杂交产物直接凝胶电泳和斑点杂交等方法分析其信号放大作用。经凝胶电泳和限制性内切酶分析证实 ,2 4串联重复核酸序列构建成功 ,加上插入噬菌粒原有的 1个重复单位 ,使整个重组载体含 2 5个串联重复。凝胶电泳分析显示 ,串联重复核酸序列可与多个次级探针结合。斑点杂交分析显示 ,串联重复核酸序列可使信号放大 ,将检测的敏感性提高约 16倍。串联重复核酸序列具有较好的信号放大作用 ,克隆化后又有利于大量制备和降低成本。

关键词：脱氧核糖核酸串联重复核酸序列核酸序列构建杂交信号基因

一种提高基因芯片检测中杂交信号强度的简单方法

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中华医学遗传学杂志 2002年第4期19卷 347-349页

作者：夏庆杰张思仲杨元王军王修杰马用信孙岩四川大学华西医院医学遗传室成都610041 四川大学华西医院医学肿瘤研究所成都610041

目的　改进 PCR产物与固定探针杂交效率 ,提高信噪比 ,以提高基因芯片检测的灵敏度。方法　以淋球菌隐蔽型质粒 p JD1的基因芯片检测为例 ,在荧光素标记引物的 PCR产物中加入不同浓度的Taq酶抑制剂 EDTA及位于固定探针所在位点的两翼的... 详细信息

目的　改进 PCR产物与固定探针杂交效率 ,提高信噪比 ,以提高基因芯片检测的灵敏度。方法　以淋球菌隐蔽型质粒 p JD1的基因芯片检测为例 ,在荧光素标记引物的 PCR产物中加入不同浓度的Taq酶抑制剂 EDTA及位于固定探针所在位点的两翼的荧光素标记探针 ,一起变性后再进行常规杂交、冲洗。结果　加入 EDTA和荧光素标记探针使基因芯片检测的荧光强度能提高 6倍以上。

关键词：基因芯片杂交信号荧光定量检测灵敏度荧光素标记探针

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DNA芯片制作原理及其杂交信号检测方法

生物工程进展 2000年第2期20卷 64-68页

作者：张天浩张春平张光寅陈瑞阳南开大学光子中心天津300071 南开大学生命科学院天津300071

文章讨论了DNA芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构 ,DNA芯片可分为两种形式 ,DNA阵列和寡核苷酸微芯片。DNA芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。DNA芯片与标记的探针或DNA样品杂交 ,并通过探测杂交信号谱型... 详细信息

文章讨论了DNA芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构 ,DNA芯片可分为两种形式 ,DNA阵列和寡核苷酸微芯片。DNA芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。DNA芯片与标记的探针或DNA样品杂交 ,并通过探测杂交信号谱型来实现DNA序列或基因表达的分析。适应于DNA芯片的发展 ,同时出现了许多新型的杂交信号检测方法。主要有激光荧光扫描显微镜、激光扫描共焦显微镜、结合使用CCD相机的荧光显微镜、光纤生物传感器、化学发生法、光激发磷光物质存储屏法、光散射法等。

关键词： DNA芯片分子杂交信号检测制作原理杂交信号

三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响

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安徽医科大学学报 2003年第6期38卷 432-434页

作者：周文明赵建龙曹慧敏张学军安徽医科大学皮肤性病研究所第一附属医院皮肤性病科合肥230022 中国科学院上海微系统与信息技术研究所上海200050

目的　观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。方法　将淋球菌 gyrA基因 91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为 10 0 0 μmol/L～ 0 2 5 μmol/L的梯度浓度点样并制作寡核苷... 详细信息

目的　观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。方法　将淋球菌 gyrA基因 91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为 10 0 0 μmol/L～ 0 2 5 μmol/L的梯度浓度点样并制作寡核苷酸芯片 ,PCR扩增荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段 ,与芯片杂交 ,分别记录三种标记方法的杂交信号强度。结果　标记引物法的荧光信号最强 ,随机渗入标记法的荧光信号强度次之 ,其Cy5 dUTP最佳浓度为0 1mmol/L(dTTP :Cy5 dUTP =10∶1) ,末端转移标记法反应时间在 6 0min和 12 0min时荧光信号值相近。点样的探针浓度达到 31μmol/L以上 ,荧光信号为平台期。结论　明确了三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。

关键词：荧光标记法寡核苷酸芯片杂交信号标记引物法随机渗入标记法末端转移标记法

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原位杂交变性温度对杂交信号强度的影响

中华病理学杂志 1995年第1期24卷 62-62页

作者：吕亚利张杰陈乐真笪冀平解放军空军总医院病理科北京解放军总医院病理科

原位杂交变性温度对杂交信号强度的影响吕亚利，张杰，陈乐真，笪冀平本项研究通过对原位杂交不同变性温度杂交信号强度的测定，探讨变性温度对杂交信号的影响程度。一、材料和方法１．标本来源：选用送检标本，人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）... 详细信息

原位杂交变性温度对杂交信号强度的影响吕亚利，张杰，陈乐真，笪冀平本项研究通过对原位杂交不同变性温度杂交信号强度的测定，探讨变性温度对杂交信号的影响程度。一、材料和方法１．标本来源：选用送检标本，人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６日和１１型原位杂交检测阳性蜡块１...

关键词：变性温度杂交信号解链温度原位杂交信号强度

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不同浓度蛋白酶K对杂交信号的影响

中国组织化学与细胞化学杂志 1998年第3期7卷 100-100页

作者：杨木兰周泽斌同济医科大学超微病理研究室

年来原位杂交技术的应用日益广泛，但出现的问题也不少。杂交信号的多少和强弱受到多重因素的影响，特别是蛋白酶Ｋ的作用。本实验比较观察了不同浓度蛋白酶Ｋ对肝癌组织切片杂交的影响，结果表明，用适量的蛋白酶Ｋ消化组织切片不仅能... 详细信息

年来原位杂交技术的应用日益广泛，但出现的问题也不少。杂交信号的多少和强弱受到多重因素的影响，特别是蛋白酶Ｋ的作用。本实验比较观察了不同浓度蛋白酶Ｋ对肝癌组织切片杂交的影响，结果表明，用适量的蛋白酶Ｋ消化组织切片不仅能保存组织结构的完整性，并且能使杂交...

关键词：杂交信号蛋白酶K 不同浓度组织结构组织切片原位杂交技术肝癌组织组织损伤消化处理肝癌细胞

一种新的荧光染料同时能观察到Q显带和FISH杂交信号

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医学分子生物学杂志 1996年第6期 285-285页

作者：阮庆国

近几年来荧光原位杂交(FISH)技术得到了迅速发展,例如联合使用荧光异疏氰酸盐(FITC)或若丹明异硫氰酸盐的avidin-biotin系统和敏感的显微图像数字处理系统。最近有报道利用一种新的染料,3-羟基-N-2′-联二苯-2-萘亚甲基胺磷酸酯(HNPP)... 详细信息

近几年来荧光原位杂交(FISH)技术得到了迅速发展,例如联合使用荧光异疏氰酸盐(FITC)或若丹明异硫氰酸盐的avidin-biotin系统和敏感的显微图像数字处理系统。最近有报道利用一种新的染料,3-羟基-N-2′-联二苯-2-萘亚甲基胺磷酸酯(HNPP)和碱性磷酸酶在组织和中期相染色体上进行FISH杂交。在该方法中,脱磷酸化的HNPP与重氮化盐结台成为一种橙色的荧光混合物,本文报道利用该方法来进行基因定位。

关键词： HNPP 碱性磷酸酶杂交信号 FISH FITC 33258