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杀虫单和甲维盐对水稻二化螟杀虫毒力室内配方筛选

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农药科学与管理 2012年第11期33卷 45-47页

作者：高鹏虞超李庆自贡市植物检疫站四川自贡643000 成都市园林科学研究所四川成都610083 四川农业大学农学院四川温江611130

通过微量点滴法,以水稻二化螟4龄幼虫为供试昆虫,测定杀虫单和甲维盐不同比例混配对水稻二化螟杀虫毒力,采用共毒因子和共度系数法进一步确定2种试验药剂的合适配比。结果表明:甲维盐和杀虫单混配具有明显的增效作用,且具有很宽的有效... 详细信息

通过微量点滴法,以水稻二化螟4龄幼虫为供试昆虫,测定杀虫单和甲维盐不同比例混配对水稻二化螟杀虫毒力,采用共毒因子和共度系数法进一步确定2种试验药剂的合适配比。结果表明:甲维盐和杀虫单混配具有明显的增效作用,且具有很宽的有效配比谱。室内毒力测定表明甲维盐LD50为0.596 4ng/larva,杀虫单LD50为21 501ng/larva,2者的毒力差异达36 051.31倍。共毒系数研究表明甲维盐和杀虫单的配比在1∶1 000～1∶36 051(质量比)均有显著的增效作用。

关键词：杀虫单甲维盐二化螟杀虫毒力配方筛选

草地贪夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾的毒力及其侵染特征

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植物保护学报 2024年第3期51卷 629-635页

作者：彭倩易磊曾洋施玉双傅悦谌祖文黄冈师范学院生物与农业资源学院经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室湖北黄冈438000 黄冈市疾病预防控制中心湖北黄冈438000

为明确草地贪夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus,SfMNPV)对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的毒力及其体内外侵染特性,于室内测定SfMNPV对草地贪夜蛾的毒力,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色分析SfMNPV侵染后草地贪夜蛾的组织病理学特征,通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)技术分析SfMNPV在草地贪夜蛾体内和Sf9细胞系中的复制特征。结果表明,SfMNPV对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC_(50)和LT_(50)分别为7.39×10~5 OBs/mL和3.82 d;SfMNPV可侵染草地贪夜蛾幼虫的真皮、气管、脂肪体和中肠等组织,未侵染肌肉组织;SfMNPV侵染96 h后草地贪夜蛾体内SfMNPV基因组拷贝数最大,为3.91×10~6拷贝数/ng,SfMNPV侵染96 h后Sf9细胞培养上清液中SfMNPV基因组拷贝数最大,为2.08×10~7拷贝数/mL。

关键词：草地贪夜蛾杆状病毒杀虫毒力侵染特性组织

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杀虫真菌孢子活力与毒力相关性研究

杀虫真菌孢子活力与毒力相关性研究

球孢白僵菌对马铃薯块茎蛾的毒力及其与常用农药的生物相容性测定

中国菌物学会2015年学术年会

作者：卢海泉王四宝李木旺江苏科技大学中科院植物生理生态研究所

白僵菌（Beauveria bassiana（Bals.）Vuill）是经济昆虫家蚕的重要病原真菌之一,家蚕白僵病是影响蚕业生产的重要因素,对我国蚕业生产造成巨大损失。同时,白僵菌分布广,寄主多,对人畜无害的特性,是害虫自然调节的重要因子,已成为农林... 详细信息

白僵菌（Beauveria bassiana（Bals.）Vuill）是经济昆虫家蚕的重要病原真菌之一,家蚕白僵病是影响蚕业生产的重要因素,对我国蚕业生产造成巨大损失。同时,白僵菌分布广,寄主多,对人畜无害的特性,是害虫自然调节的重要因子,已成为农林害虫和卫生害虫重要的生防真菌。杀虫毒力是评定一个生防真菌的重要标准,而孢子活力（萌发速率）是影响杀虫毒力的一个重要因素。因此,探明孢子活力与毒力相关机制,找到其中的关键基因,对日后改造生防真菌具有重要意义。本研究测定了不同白僵菌株系的萌发速率及其对家蚕毒力的差异,结果表明白僵菌毒力高低与萌发速率快慢存在相关性。我们进一步通过比较转录组学技术对不同毒力菌株在不同萌发阶段的基因表达谱差异进行分析,并通过基因敲除等手段对靶标基因进行功能验证。以上研究为生防菌株快速筛选和深入了解真菌毒力的分子机理提供重要参考价值。

关键词：白僵菌孢子活力杀虫毒力比较转录组

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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植物保护 2005年第3期31卷 57-61页

作者：李正跃张青文中国农业大学植物保护学院

室内测定了从云南分离的7株球孢白僵菌对马铃薯块茎蛾幼虫的毒力,结果表明,在接菌孢子浓度为105个/mi和107个/mL下,接种后7d马铃薯块茎蛾幼虫累积死亡率分别为23.3%～70.0%和33.3%～86.7%,添加吐温80的清水对照死亡率仅为3.3%.筛选出毒... 详细信息

室内测定了从云南分离的7株球孢白僵菌对马铃薯块茎蛾幼虫的毒力,结果表明,在接菌孢子浓度为105个/mi和107个/mL下,接种后7d马铃薯块茎蛾幼虫累积死亡率分别为23.3%～70.0%和33.3%～86.7%,添加吐温80的清水对照死亡率仅为3.3%.筛选出毒力较高的Eb7001、Bb7004、Bb8001 3个菌株,其中菌株1b8001对马铃薯块茎蛾幼虫的毒力最高,在孢子浓度1×105、1×107个/mi下,第7天的累计死亡率分别为70.0%和86.7%,其毒力回归方程Y=0.366X+3.409(R=0.956),剂量效应LC50=2.24×104个/mL,孢子浓度107个/mL下的LT50为4.3do测定了毒力较高的菌株与12种农药的生物相容性,结果表明在供试农药推荐用量及其10、100倍稀释液下,球孢白僵菌Eb7001、Bb7004、Bb8001的3个菌株孢子在含所选农药的营养液中生物相容性良好的农药有:苏云金芽孢杆菌可湿性粉剂(Bt)、10%吡虫啉可湿性粉剂、2.5%菜喜悬浮剂及松毛虫病毒可湿粉剂,可配伍使用;而阿维菌素、农安、卡死克、抑太保对球孢白僵菌有很强的抑制作用,应避免配伍使用.

关键词：有害生物生物防治球孢白僵菌马铃薯块茎蛾杀虫毒力生物相容性

蜡蚧轮枝菌VL17油剂配方筛选及室内毒力评价

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农药 2013年第5期52卷 337-339页

作者：谷祖敏周飞陈思纪明山沈阳农业大学植物保护学院辽宁省生物农药工程技术研究中心沈阳110161

[目的]筛选杀虫真菌蜡蚧轮枝菌VL17的油剂配方,确定其室内杀虫效果。[方法]以孢子的活力为评价指标,筛选出各种助剂;采用喷雾法评价室内毒力。[结果]蜡蚧轮枝菌VL17油剂配方为大豆油作溶剂油,吐温TW-80作稳定剂,抗坏血酸作紫外保护剂,... 详细信息

[目的]筛选杀虫真菌蜡蚧轮枝菌VL17的油剂配方,确定其室内杀虫效果。[方法]以孢子的活力为评价指标,筛选出各种助剂;采用喷雾法评价室内毒力。[结果]蜡蚧轮枝菌VL17油剂配方为大豆油作溶剂油,吐温TW-80作稳定剂,抗坏血酸作紫外保护剂,优化筛选出2号油剂各成分的配比为孢子粉28%,溶剂油65%,吐温TW-80 5%,紫外保护剂2%。室内毒力测定表明2号油剂第7天对蚜虫和白粉虱的LC50值分别为5.63×108、2.80×108个孢子/L,LT50值分别为3.61、4.92 d。[结论]配制的蜡蚧轮枝菌的油剂可用于治理害虫。

关键词：蜡蚧轮枝菌油剂杀虫毒力

绿僵菌mad2敲除株构建及其生物学和诱导植物响应的功能分析

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中国农业科学 2021年第22期54卷 4800-4812页

作者：蔡霓闫多子农向群王广君涂雄兵张泽华中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室

【目的】昆虫病原真菌绿僵菌兼具植物内生性。已知黏附素MAD2是绿僵菌两种黏附蛋白之一,在实现绿僵菌与植物的黏附、定殖中起重要作用,但其作用机理知之甚少。本研究通过构建金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)mad2敲除突变株(Δmad... 详细信息

【目的】昆虫病原真菌绿僵菌兼具植物内生性。已知黏附素MAD2是绿僵菌两种黏附蛋白之一,在实现绿僵菌与植物的黏附、定殖中起重要作用,但其作用机理知之甚少。本研究通过构建金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)mad2敲除突变株(Δmad2),探究MAD2蛋白对绿僵菌生物学功能的影响。【方法】从NCBI中获取mad2前后基因组DNA序列,设计扩增mad2前后同源臂特异性引物,以绿僵菌基因组DNA为模板,扩增得到前后同源臂基因S1、S2;设计特异性引物Hyg-F/R,以pKH-KO载体为模板,扩增得到带有启动子序列的潮霉素基因hyg;再通过overlap PCR构建mad2的同源敲除盒S1H、S2H;最后利用PEG介导的原生质体转化,获得稳定遗传的mad2敲除株。通过对比敲除株与野生株(WT)的生长特性、黏附作用、杀虫毒力以及诱导花生共生基因转录水平的变化,分析MAD2蛋白的生物学功能。【结果】原生质体转化获得了敲除mad2的同源重组转化子;敲除株与野生株对比分析表明,敲除株的孢子萌发率显著低于野生株,萌发中时间比野生株延长5.47 h;培养12 h和14 h时,敲除株的菌丝长度显著均小于野生株,分别为野生株的77.8%和76.3%;培养12 d的产孢量也比野生株减少33.3%。敲除株对洋葱内表皮的黏附力明显降低,但对蝗虫后翅的黏附性无显著影响。敲除mad2并不影响绿僵菌对家蚕的毒力。敲除株处理花生12 h后,与野生株处理相比,花生共生受体SYMRK、钙信号解码相关基因(CaM、CCaMK和DELLA)、脂质氮素转运相关基因(LTP1、NRT24、ABCC2)的转录水平出现显著下调;而与空白对照相比,mad2缺失后SYMRK转录水平仍有一定的上调,CaM、CCaMK和DELLA的转录水平产生显著抑制,对ABCC2、LTP1、NRT24的转录无明显影响。【结论】金龟子绿僵菌黏附素MAD2影响菌株的孢子萌发、早期菌丝生长、产孢及对植物的黏附力,但对昆虫的黏附和杀虫毒力无影响;在菌株与花生互作早期,MAD2触发了花生共生基因的转录。

关键词：金龟子绿僵菌黏附素MAD2 基因敲除黏附性杀虫毒力生长特性

苏云金芽孢杆菌3'端缺失的vip3A基因在大肠杆菌中的表达

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农业生物技术学报 2006年第4期14卷 594-599页

作者：师永霞徐炜袁美妗孙钒庞义中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室广州510275 南方医科大学基因工程研究所广州510515

将苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)缺失C端154个氨基酸编码区的vip3A基因(vip3T)插入原核表达载体pQE30,构建了重组表达载体pQEvip3T,并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)M15进行IPTG诱导表达,比较了完整的Vip3A蛋白和C端缺失的蛋白Vip3T的可溶性和杀虫活性。与Vip3A不同,融合蛋白Vip3T以不可溶的包含体形式存在,诱导表达的菌液中没有检测到可溶性Vip3T蛋白。生物测定结果表明,M15(pOTP)诱导表达的Vip3A蛋白对初孵斜纹夜蛾(Spodopteralitua)和甜菜夜蛾(***)幼虫具有较高的杀虫活性,其提纯的包含体无毒,但包含体的碱性裂解液却又恢复了对夜蛾科害虫的活性;M15(pQEvip3T)菌液、包含体及其碱性裂解液对这两种昆虫幼虫则完全无毒,说明在大肠杆菌中,Vip3A蛋白C端氨基酸可能对Vip3A蛋白的可溶性和杀虫活性具有重要的影响。

关键词：苏云金芽孢杆菌大肠杆菌 vip3A基因表达杀虫毒力

与植物共生对罗伯茨绿僵菌环境宿存能力贡献的机制研究

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与植物共生对罗伯茨绿僵菌环境宿存能力贡献的机制研究

作者：张明祥浙江大学

学位级别：硕士

自然界中的许多真菌具有多种生活方式(腐生、寄生或共生),人们通过常理推理认为,多样的生活方式使得它们在自然环境中拥有更强的宿存能力。但是,人们对一个真菌特定的生活方式在其环境宿存中真正贡献的认识却十分有限。罗伯茨绿僵菌(Met... 详细信息

自然界中的许多真菌具有多种生活方式(腐生、寄生或共生),人们通过常理推理认为,多样的生活方式使得它们在自然环境中拥有更强的宿存能力。但是,人们对一个真菌特定的生活方式在其环境宿存中真正贡献的认识却十分有限。罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)在环境中分布广泛,宿存能力很强,这是因为其所具备的多种生活方式和较强的抗逆能力。该菌可以营腐生,寄生于昆虫和与植物共生。作为一种促进植物健康与发育的有益共生微生物,罗伯茨绿僵菌能够定殖于植物根内和根际土壤中,作为一种昆虫病原真菌,它具有较广的杀虫谱,因此是研究不同生活方式对真菌环境宿存能力的贡献这一问题的良好材料。发现并阐明罗伯茨绿僵菌生活方式与环境宿存能力之间的关系可为开发环境友好、高效稳定的真菌杀虫剂提供理论依据。本文对罗伯茨绿僵菌三种生活方式与环境宿存能力之间的关系开展研究,并以这些基础研究的结果为指导,创建一个生产高质量罗伯茨绿僵菌孢子的培养方法。主要研究结果简述如下:1)与腐生(在PDA培养基)和寄生(感染大蜡螟)生活方式所产孢子相比,共生生活方式(与拟南芥共生)所产孢子的杀虫能力更强。进一步分析表明,共生生活方式所产孢子在昆虫翅膀上萌发速度更快,这使得侵染结构——附着胞形成提前,附着胞内膨压升高,穿透昆虫体壁能力增强,最终较快地杀死昆虫。共生生活方式所产孢子内含有更多的脂滴和三酰甘油;自噬是孢子萌发时利用脂滴的重要方式,自噬途径中关键蛋白ATG8在共生生活方式所产孢子萌发时具有更高的表达水平,使得这些孢子在昆虫体壁上萌发时脂滴的利用速度更快,为孢子萌发和芽管伸长更快更多地提供营养。2)与腐生和寄生生活方式所产孢子相比,共生生活方式所产孢子在营养丰富、瘠薄甚至是无碳氮源的环境中的萌发速率都更快,对UV辐射、高温和冰冻等关键环境胁迫具有更强的耐受力。3)与绿僵菌共生诱发植物产生更高水平的5-羟色胺。类似于与植物共生所产孢子,在添加5-羟色胺的普通培养基上所产孢子的杀虫能力和抗逆能力也更强,表明植物的5-羟色胺是提高与之共生所产罗伯茨绿僵菌孢子环境宿存能力的一个重要因素。4)通过在培养基中添加5-羟色胺模拟与植物共生时的环境来生产高质量的罗伯茨绿僵菌孢子,用于生产更高效的真菌杀虫剂。5-羟色胺价格高,不适于大规模生产孢子。价格便宜的5-羟色胺类似物5-羟色胺盐酸盐可以作为5-羟色胺的替代品,在培养基中添加该化合物也能生产杀虫能力和抗逆能力均增强的高质量罗伯茨绿僵菌孢子,为生产高效的真菌杀虫剂奠定基础。综上,本文研究了三种生活方式对罗伯茨绿僵菌环境宿存能力的贡献,发现与植物共生所产孢子抗逆能力和杀虫能力更强,具有更强的环境宿存能力,表明与植物共生的生活方式在罗伯茨绿僵菌环境宿存中起更重要的作用。进一步发现,植物次级代谢产物5-羟色胺是提高孢子环境宿存能力的一个重要因素。并以该基础研究成果为指导,创建了一种生产杀虫能力和抗环境逆境能力均增强的高质量绿僵菌孢子的培养方法,具有较好的应用价值。

关键词：昆虫病原真菌植物共生真菌罗伯茨绿僵菌共生 5-羟色胺环境宿存能力杀虫毒力非生物胁迫

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多杀菌素生产菌种复壮方法及其效应的研究

工业微生物 2012年第2期42卷 28-32页

作者：沈淑媛傅盼翰裘娟萍浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

用分离纯化复壮、淘汰法复壮及虫体复壮三种复壮方法对一株多杀菌素生产能力已经衰退的刺糖多孢菌进行复壮研究。结果显示:淘汰法复壮可显著提高菌株的杀虫毒力及多杀菌素的产量。通过红霉素抗性复壮筛选得到菌株杀虫死亡率达到100%,多... 详细信息

用分离纯化复壮、淘汰法复壮及虫体复壮三种复壮方法对一株多杀菌素生产能力已经衰退的刺糖多孢菌进行复壮研究。结果显示:淘汰法复壮可显著提高菌株的杀虫毒力及多杀菌素的产量。通过红霉素抗性复壮筛选得到菌株杀虫死亡率达到100%,多杀菌素相对效价达1058.83%;通过NaCl抗性复壮筛选得到一菌株杀虫死亡率达到95%,多杀菌素相对效价达825.80%,因此淘汰法可作为有效的复壮方法。

关键词：刺糖多孢菌复壮杀虫毒力多杀菌素