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饲料工业 2013年第21期34卷 10-15页

作者：冯平张铁鹰王德山邹林源刘俊丽何宏媛中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 内蒙古农业大学动物科技学院内蒙古呼和浩特010018

试验采用亨氏滚管法从猪后肠内容物中分离获得一株可高效降解木聚糖的严格厌氧菌M9。M9为产芽孢革兰氏阳性杆菌，经16S rDNA分子生物学鉴定和API 20A厌氧菌生化鉴定系统鉴定为梭菌属细菌（Clostridium sp.）。M9在以木聚糖、麸皮、大豆... 详细信息

试验采用亨氏滚管法从猪后肠内容物中分离获得一株可高效降解木聚糖的严格厌氧菌M9。M9为产芽孢革兰氏阳性杆菌，经16S rDNA分子生物学鉴定和API 20A厌氧菌生化鉴定系统鉴定为梭菌属细菌（Clostridium sp.）。M9在以木聚糖、麸皮、大豆皮和玉米皮为底物的培养基中发酵培养时，产木聚糖酶活性在24~96 h内变化不明显，但从96 h开始出现明显升高。

关键词：猪后肠木聚糖降解菌厌氧培养细菌鉴定

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成年母猪后肠木聚糖降解菌的筛选、鉴定及其对饲草纤维降解作用的研究

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动物营养学报 2011年第11期23卷 1953-1960页

作者：董杰丽张铁鹰齐志国吴兴群欧阳张智中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 南京农业大学动物科技学院南京210095 西南民族大学生命科学与技术学院成都610041

本研究旨在通过对内蒙古黑猪成年母猪后肠木聚糖降解菌的分离、筛选及鉴定,并对比研究筛选菌和瘤胃液对饲草纤维降解的作用,获得可高效降解木聚糖的菌株。以木聚糖为唯一碳源,根据筛选平板上菌株透明圈大小和发酵液中木聚糖酶活性分离... 详细信息

本研究旨在通过对内蒙古黑猪成年母猪后肠木聚糖降解菌的分离、筛选及鉴定,并对比研究筛选菌和瘤胃液对饲草纤维降解的作用,获得可高效降解木聚糖的菌株。以木聚糖为唯一碳源,根据筛选平板上菌株透明圈大小和发酵液中木聚糖酶活性分离得到了2株活性较高的木聚糖降解菌(分别命名为ZF和MZ)。经形态学观察和16S rDNA核苷酸序列分析表明,菌株ZF和MZ分别为兼性厌氧产黄纤维单胞菌(Cellulomonas flavigena)和类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)。饲草纤维降解结果表明:瘤胃液对苜蓿和青贮玉米的中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)降解率均高于筛选菌;菌株ZF和MZ对3种饲草NDF和ADF降解率均有随发酵时间延长而增加的趋势,其中菌株ZF降解羊草ADF和NDF的效果等同甚至优于瘤胃液。结果提示,从成年母猪后肠中筛选的木聚糖降解菌株ZF和MZ可有效降解饲草中的纤维类物质,可作为生产饲用木聚糖酶的候选菌株。

关键词：成年母猪木聚糖降解菌筛选鉴定纤维降解

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成年母猪后肠木聚糖降解菌分离鉴定及相关基因克隆

成年母猪后肠木聚糖降解菌分离鉴定及相关基因克隆

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作者：董杰丽中国农业科学院

学位级别：硕士

大多饲用木聚糖酶在畜禽消化道内的稳定较差,开发在畜禽消化道内活性稳定的新型木聚糖酶是提高其应用效果的关键。本论文通从耐粗饲内蒙古黑猪成年母猪后肠中筛选出具有较强木聚糖降解活性和优良酶学性质的木聚糖降解菌,并对其相关基因... 详细信息

大多饲用木聚糖酶在畜禽消化道内的稳定较差,开发在畜禽消化道内活性稳定的新型木聚糖酶是提高其应用效果的关键。本论文通从耐粗饲内蒙古黑猪成年母猪后肠中筛选出具有较强木聚糖降解活性和优良酶学性质的木聚糖降解菌,并对其相关基因进行克隆,为开发新型饲用木聚糖酶提供材料。木聚糖降解菌分离鉴定。以木聚糖为唯一碳源,利用透明圈法从耐粗饲内蒙古黑猪成年母猪后肠筛选出2株具有较高木聚糖降解能力的细菌ZF和MZ。通过形态学观察、培养特性研究以及16S rDNA序列分析,鉴定ZF和MZ分别为兼性厌氧产黄纤维单胞菌（Cellulomonas flavigena）和类芽孢杆菌（Paenibacillus sp.）。ZF和MZ生长、产酶和饲草纤维降解研究。结果表明,ZF培养48 h达菌体高峰,60 h达产酶高峰;MZ培养24 h达菌体高峰,60 h达产酶高峰。与木聚糖作为唯一碳源相比,以苜蓿、羊草和青贮玉米混合物为碳源时,ZF和MZ木聚糖酶产量分别提高了51.3和16.8倍。瘤胃液对苜蓿、羊草、青贮玉米的NDF、ADF降解率均高于筛选菌,但是对于羊草ZF表现出优于瘤胃混合菌的NDF降解能力。ZF和MZ对3种饲草NDF、ADF降解率差异不明显。ZF和MZ粗酶酶学性质的研究。结果表明,ZF和MZ所产木聚糖酶最适温度分别为55和60℃,最适pH为7.0和6.0,在pH 3.0～9.0范围内稳定。ZF和MZ所产木聚糖酶均具有很好的胃蛋白酶、胰蛋白酶抗性,40℃温育60 min后仍保持80%以上的活性。在pH 6.0,40℃条件下,对于MZ木聚糖酶,Fe、Mn有较强的抑制作用,Ca、Mg有较强的激活作用,Cu、Zn抑制作用不明显。ZF所产木聚糖酶活性受金属离子影响较小。根据糖基水解酶第10家族（GH10）和第11家族（GH11）保守区域设计2对简并引物,利用降落PCR和热不对称交错（TAIL）-PCR获取全长木聚糖酶基因。来源于产黄纤维单胞菌菌株ZF的木聚糖酶基因片段11ZF-2 （1 931 bp）,同Cellulomonas flavigena DSM 20109第11家族糖基水解酶相似性最高达84%。来源于类芽孢杆菌菌株MZ的木聚糖酶基因片段10MZ-2（1 860 bp）,同Paenibacillus *** 786 str.D14木聚糖酶相似性最高达78%。

关键词：成年母猪木聚糖降解菌分离木聚糖酶克隆

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星天牛幼虫木聚糖的消化机制及β-1，4-木聚糖酶的纯化与酶学特性

星天牛幼虫木聚糖的消化机制及β-1，4-木聚糖酶的纯化与酶学特性

引用

作者：董亚敏西南农业大学

学位级别：硕士

以栖居于活树木上的危害严重、分布广泛的星天牛Anoplophorachinensis幼虫为试验材料，对其消化木聚糖的机制及肠道木聚糖酶进行了分析和研究。野外采集的和室内灭菌饲料饲养的星天牛幼虫，其肠道木聚糖酶活性均主要存在于中肠（占总... 详细信息

以栖居于活树木上的危害严重、分布广泛的星天牛Anoplophorachinensis幼虫为试验材料，对其消化木聚糖的机制及肠道木聚糖酶进行了分析和研究。野外采集的和室内灭菌饲料饲养的星天牛幼虫，其肠道木聚糖酶活性均主要存在于中肠（占总酶活的99％以上），尤其以中肠前部酶活最高（占总酶活的60％左右）;前肠酶活很低（仅占总酶活的0.3％）;后肠没有检测到酶活。这说明星天牛幼虫肠道中木聚糖的消化主要在中肠特别是中肠前部进行。采用木聚糖培养基，从星天牛幼虫肠道中分离到一株木聚糖降解细菌XY1。经鉴定，XY1为纤维单胞菌（Cellulomonas sp.）。该菌在肠道中的分离率（有菌虫数/检测虫数）为56％，数量很少（每条幼虫仅含1×10～3个以下）。该菌在除前肠外的各肠段中均有可能分离到，并且从中肠到后肠分离机率逐步提高。从幼虫栖居的树干虫道中也可分离到木聚糖降解菌。结合木聚精酶在幼虫肠道中的分布，可以推断星天牛幼虫肠道中的木聚糖降解菌对其消化木聚糖的贡献很小，极有可能仅是随幼虫取食而被摄入的过路菌。以木聚糖、微晶纤维素（CM）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和稻草粉作碳源液体培养纤维单胞菌XY1，其产生的木聚糖酶在木聚糖培养基中酶活最高。该菌也降解CMC-Na，其产生的内切-β-1，4-葡聚糖酶（Cx酶）活性也是在木聚糖培养基中最高。在CM、稻草粉和CMC-Na培养基中，木聚糖酶和Cx酶酶活则显著偏低。经丙酮沉淀、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、制备PAGE从星天牛幼虫肠道中纯化出一种木聚糖酶，纯化收率5.80％。该酶的分子量为25kD，等电点约为4.0。酶学特性测定显示，该酶的比活为4.45U/mg，最适作用温度和最适pH分别为50℃和pH5.4;酶活在pH3.0-7.8之间稳定;50℃处理 Zh后，该酶仍有 60％的残余酶活;该酶具有 CX N交叉活性;HgZ＼MnO。”、SDS、Cu‘“、Zn‘”、Ag”、Urea、Ph‘”、Mn‘”强烈抑帘该酶活性;在pH4．4、50’C条件下，以山毛择木聚糖为底物，其KmVm。值分别为2．47mg／thl、0．6pmol／minlml．从以上试验结果可以看出，星天牛幼虫主要利用中肠组织分泌的内源性木聚糟酶消化利用食物中的木聚糖，外界环境中的橄生物及其产生的木聚槽酶在星天牛幼虫肠道木聚糖消化中的作用不大。

关键词：星天牛木聚糖降解菌木聚糖酶分离纯化性质

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