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抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究

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第三军医大学学报 2006年第23期28卷 2333-2335页

作者：张萍陈香美许国双何娅妮吴镝杨聚荣第三军医大学大坪医院野战外科研究所肾内科重庆400042 中国人民解放军总医院肾科

目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位... 详细信息

目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FlT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜。结论成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础。

关键词：肾脏有机阴离子转运蛋白3 基因免疫抗体制备

硫酸吲哚酚通过有机阴离子转运蛋白-3和氧化应激诱导心肌肥大及纤维化的作用

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中国医师杂志 2023年第10期25卷 1484-1489页

作者：买买提艾力·艾则孜杜宇奎买买提·依斯热依力邵劲杰刘筠张总刚新疆维吾尔自治区人民医院心脏及泛血管医学诊疗中心心外一科，乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院医学研究与转化中心，乌鲁木齐830001

目的探讨硫酸吲哚酚(IS)通过有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)及氧化应激诱导心肌肥大及纤维化的作用。方法对大鼠心肌细胞(H9C2)进行传代培养,并分为四组:Control组、IS组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照组(siOAT-3)及siOAT-3+IS组。Control组... 详细信息

目的探讨硫酸吲哚酚(IS)通过有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)及氧化应激诱导心肌肥大及纤维化的作用。方法对大鼠心肌细胞(H9C2)进行传代培养,并分为四组:Control组、IS组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照组(siOAT-3)及siOAT-3+IS组。Control组常规培养,不进行IS刺激;IS组加入含250μmol浓度的IS刺激;siRNA阴性对照组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA;siOAT-3+IS组加入20 nmol/L OAT-3 siRNA 48 h后,加入IS刺激24 h。采用RT-PCR方法检测并分析各组细胞中OAT-3、NADPH氧化酶-4(Nox-4)、抗氧化蛋白[核因子E2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶1(HO-1)]、心肌肥大指标[心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链基因(β-MHC)]及纤维化指标[转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad-3)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)]的mRNA表达水平。H9C2细胞进一步分为Control组、IS组以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)组,NAC组以抗氧化剂NAC预处理后加入250μmol浓度的IS刺激24 h,采用RT-PCR试验方法检测上述指标的mRNA表达水平。结果IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著高于Control组,siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中OAT-3的mRNA表达水平显著低于IS组(P<0.001)。相较于Control组,IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及CollagenⅠ的mRNA表达水平明显升高(均P<0.001),Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显降低(均P<0.001)。相较于IS组,siOAT-3组及siOAT-3+IS组H9C2细胞中Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及CollagenⅠ的mRNA表达水平明显降低(均P<0.001),Nrf-2、HO-1的mRNA表达水平明显升高(均P<0.001)。以NAC预处理H9C2细胞,能显著抑制IS诱导的Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3以及CollagenⅠmRNA的高表达(均P<0.001),显著增高Nrf-2、HO-1 mRNA表达水平(均P<0.01)。结论IS在H9C2细胞中通过OAT-3和氧化应激诱导心肌肥大和纤维化因子高表达。

关键词：硫酸吲哚酚有机阴离子转运蛋白3 心肌细胞心肌肥大纤维化

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有机阴离子转运蛋白1和3的研究进展

齐鲁医学杂志 2009年第4期24卷 371-372页

作者：吕森森李长贵青岛大学医学院附属医院内分泌科山东青岛266003

尿酸是嘌呤代谢的终末产物,主要在肝脏产生,通过肾小球滤过,在近端肾小管重吸收后再排泌到尿液中。尿酸的排泌主要依靠近端肾小管上皮细胞中的转运因子。人有机阴离子转运蛋白1(hOAT1)和人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)是体内主要的尿酸-... 详细信息

尿酸是嘌呤代谢的终末产物,主要在肝脏产生,通过肾小球滤过,在近端肾小管重吸收后再排泌到尿液中。尿酸的排泌主要依靠近端肾小管上皮细胞中的转运因子。人有机阴离子转运蛋白1(hOAT1)和人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)是体内主要的尿酸-阴离子转运因子,对这些转运因子进行研究,不仅可进一步了解高尿酸血症的发生机制,并可为未来的药物研制提供实验依据。[第一段]

关键词：尿酸有机阴离子转运蛋白1 有机阴离子转运蛋白3 点突变综述

OAT1/3在肾小管表达差异及竞争性抑制对急性马兜铃酸Ⅰ肾小管损伤的影响

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药物评价研究 2024年第10期 2301-2308页

作者：杨心怡黄春华李小芬李茂娟夏铭汤海明刘德芳艾兴辉楼迪栋贵州中医药大学基础医学院法医学教研室贵州中医药大学司法鉴定所贵州中医药大学贵州省法医中药毒理学特色重点实验室

目的通过丙磺舒（PRB）抑制有机阴离子转运蛋白（OAT）1和3，观察马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）对大鼠肾小管上皮细胞的急性损伤，以探究AAⅠ进入肾小管上皮细胞的途径。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照（PEG300）组、PRB(150 mg·kg... 详细信息

目的通过丙磺舒（PRB）抑制有机阴离子转运蛋白（OAT）1和3，观察马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）对大鼠肾小管上皮细胞的急性损伤，以探究AAⅠ进入肾小管上皮细胞的途径。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照（PEG300）组、PRB(150 mg·kg-1)组、AAⅠ(80 mg·kg-1)组、AAⅠ(80 mg·kg-1)+PRB(150mg·kg-1)组，每2天ig给药1次，连续给药4次。观察大鼠肾脏指数；生化仪检测血清肌酐（CREA）和尿素氮（BUN）水平；苏木精-伊红（HE）染色观察肾脏组织病理学变化；免疫组化染色观察OAT1和OAT3在肾小管的组织定位和蛋白表达水平；免疫透射电镜观察OAT1和OAT3在肾小管上皮细胞的亚细胞定位和表达水平。结果与溶剂对照组相比，AAⅠ组肾脏指数、CREA和BUN水平显著增加（P<0.01、0.001）;AAⅠ+PRB组与AAⅠ组相比，肾脏指数、CREA和BUN水平显著降低（P<0.05、0.001）。HE染色结果显示，与溶剂对照组相比，AAⅠ组肾近端小管上皮细胞（PCTEC）出现空泡样变性、微绒毛脱落以及片状坏死脱落，而AAⅠ+PRB组与AAⅠ组相比，PCTEC空泡样变性率下降，无其他类型病理学变化；另外，肾远端小管上皮细胞（DCTEC）AAⅠ组与AAⅠ+PRB组呈现少量空泡样变性。免疫组化和电镜结果显示，OAT1主要在PCTEC基底膜侧表达，OAT3主要在DCTEC基底膜侧表达，且AAⅠ暴露后，与溶剂对照组比较，前者在近端小管（PCT）表达有下降趋势（P<0.05），后者在远端小管（DCT）表达有上升趋势（P<0.05）。结论 AAⅠ能够导致PCT和DCT的损伤，PRB抑制OAT1和OAT3后，能够改善肾脏功能，并减少肾小管上皮细胞的病理学损害；OAT1可能是AAⅠ进入PCTEC的主要通道，而OAT3则可能是其进入DCTEC的主要通道。

关键词：马兜铃酸I 有机阴离子转运蛋白1 有机阴离子转运蛋白3 丙磺舒肾小管损伤

健脾渗湿解毒汤对高尿酸血症大鼠的作用及机制探讨

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中国中医基础医学杂志 2024年第1期30卷 41-45页

作者：叶文静杨文奎符芸瑜吴小翠邱晓堂海南省中医院海口570203

目的通过观察健脾渗湿解毒汤对高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型大鼠尿酸盐转运蛋白表达的影响,探讨该方治疗HUA的作用机制。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、苯溴马隆组和健脾渗湿解毒汤低、中、高剂量组。... 详细信息

目的通过观察健脾渗湿解毒汤对高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型大鼠尿酸盐转运蛋白表达的影响,探讨该方治疗HUA的作用机制。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、苯溴马隆组和健脾渗湿解毒汤低、中、高剂量组。除空白对照组大鼠给予灌胃蒸馏水外,其他各组大鼠分别灌胃氧嗪酸钾和腺嘌呤建立HUA模型,各药物治疗组大鼠在造模1 h后予相应药物灌胃,持续给药21 d后处死,检测各组大鼠血尿酸(serum uric acid,SUA)、血肌酐(serum creatinine,SCR)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肾脏及肝脏组织病理学变化;Western blot和实时荧光定量PCR法检测肾脏组织尿酸盐转运蛋白(urate transporter,URAT)1、有机阴离子转运蛋白(organic anion transporter,OAT)3的表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清SUA、SCR含量明显升高(P蛋白和m RNA的表达水平明显升高(P蛋白和m RNA的表达水平明显降低(P蛋白及m RNA(P蛋白及m RNA的表达水平(P蛋白URAT1、上调尿酸分泌蛋白OAT3的表达相关。

关键词：高尿酸血症健脾渗湿解毒汤尿酸盐转运蛋白1 有机阴离子转运蛋白3

用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体

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中国现代医学杂志 2007年第15期17卷 1826-1830页

作者：许国双刘安第四军医大学西京医院肾脏病科陕西西安710032 西安市儿童医院急诊科陕西西安710003

目的用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体。方法提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hO... 详细信息

目的用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体。方法提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hOAT3载体,再从pCR2.1-hOAT3中用特异性内切酶BclI和XmaI切下hOAT3基因片段,亚克隆到载体pBQAP-TT中构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,酶切及序列分析鉴定正确后,用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fit3L同时免疫小鼠,12周后分离血清,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功扩增出228bp的hOAT3细胞内亲水序列片段,构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,经酶切及序列分析鉴定正确。Western blot结果显示小鼠抗hOAT3多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白57kD的hOAT3。免疫组化结果显示hOAT3定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜。结论用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT3多克隆抗体。

关键词：肾脏有机阴离子转运蛋白3 小鼠基因免疫抗体制备

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萆苓痛风方治疗高尿酸血症机制的实验研究

萆苓痛风方治疗高尿酸血症机制的实验研究

作者：任效冬河南中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过动物实验观察萆苓痛风方对高尿酸血症的治疗效果,并初步探讨其作用机理。方法:选取60只雄性健康SD大鼠,体重200±20g,适应性饲养后将60只大鼠随机分为6组:即空白对照组(A)、模型组(B)、萆苓痛风方高剂量组(C)、萆苓痛风方中剂... 详细信息

目的:通过动物实验观察萆苓痛风方对高尿酸血症的治疗效果,并初步探讨其作用机理。方法:选取60只雄性健康SD大鼠,体重200±20g,适应性饲养后将60只大鼠随机分为6组:即空白对照组(A)、模型组(B)、萆苓痛风方高剂量组(C)、萆苓痛风方中剂量组(D)、萆苓痛风方低剂量组(E)及别嘌醇组(F),各组10只。上午9点空白对照组予以蒸馏水灌胃;模型组、萆苓痛风方高、中、低各剂量组及别嘌醇组上午按腺嘌呤(100mg/kg)+乙胺丁醇(250mg/kg)灌胃造模,下午2点空白对照组及模型组给予蒸馏水灌服,萆苓痛风方高(24g/kg)、中(12g/kg)、低(6g/kg)各组和别嘌醇组(10mg/kg)分别灌以不同浓度的(1.6g/ml、0.8g/ml、0.4g/ml)的萆苓痛风方混悬液和0.68mg/ml浓度的别嘌醇药液治疗,所有动物给药容积按15ml/kg。每日1次,连续灌胃14天后,麻醉大鼠,腹主动脉采血,取左肾及剪取部分肝组织,取血清检测大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮及黄嘌呤氧化酶水平(XO);肝组织匀浆检测肝XO;肾组织行HE染色病理观察;免疫组化方法检测肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白1(OAT1)、有机阴离子转运蛋白3(OAT3)蛋白表达水平。结果:别嘌醇组、萆苓痛风方高剂量组及萆苓痛风方中剂量组均可明显降低实验大鼠血尿酸水平;萆苓痛风方高剂量组大鼠血尿酸水平与别嘌醇组相当。萆苓痛风方高剂量组、萆苓痛风方中剂量组及别嘌醇组均可明显降低实验大鼠血中肌酐及尿素氮水平;萆苓痛风方中剂量组血中肌酐及尿素氮水平与别嘌醇组相当,萆苓痛风方高剂量组血中肌酐及尿素氮水平明显低于别嘌醇组。别嘌醇组及萆苓痛风方高剂量组、中剂量组均能明显降低实验大鼠血清及肝黄嘌呤氧化酶活性;萆苓痛风方高剂量组、萆苓痛风方中剂量组血清及肝黄嘌呤氧化酶活性均明显高于别嘌醇组。萆苓痛风方高剂量组、萆苓痛风方中剂量组及别嘌醇组均能减少实验大鼠肾间质和肾小管部位尿酸盐沉积和炎性细胞浸润,以高剂量组最明显。萆苓痛风方高剂量组可以明显上调实验大鼠肾小管上皮细胞OAT1蛋白表达水平;萆苓痛风方高剂量组、中剂量组可以明显上调肾小管上皮细胞OAT3蛋白表达水平。结论:1萆苓痛风方可以有效降低实验大鼠血尿酸水平,与别嘌醇作用相当,且具有改善肾功能的作用,高剂量组改善肾功能作用优于别嘌醇。2萆苓痛风方可改善实验大鼠肾脏病理损害,保护修复肾单位,减轻肾组织炎症反应。3萆苓痛风方可抑制实验大鼠血清及肝XO活性。4萆苓痛风方可上调实验大鼠肾脏OAT1、OAT3蛋白表达水平。5萆苓痛风方降低血尿酸水平的机制可能与抑制实验大鼠血清及肝XO活性,上调肾小管OAT1、OAT3蛋白表达有关。

关键词：萆苓痛风方高尿酸血症黄嘌呤氧化酶有机阴离子转运蛋白1 有机阴离子转运蛋白3

达格列净在Nrf2/Keap1信号通路中降尿酸效果的研究

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达格列净在Nrf2/Keap1信号通路中降尿酸效果的研究

作者：蒋达成南昌大学

学位级别：硕士

目的:达格利净（Dapagliflozin）是一种钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT2）抑制剂,是一种新型降糖药物。近年来发现,达格利净除降糖作用外,还有降低血尿酸（SUA）作用,但机制未明。本研究拟在高尿酸血症和糖尿病模型中,观察达格列净干预后... 详细信息

目的:达格利净（Dapagliflozin）是一种钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT2）抑制剂,是一种新型降糖药物。近年来发现,达格利净除降糖作用外,还有降低血尿酸（SUA）作用,但机制未明。本研究拟在高尿酸血症和糖尿病模型中,观察达格列净干预后各组大鼠空腹血糖、血尿酸水平的变化,以及干预后大鼠肾脏病理改变和大鼠肾脏OAT3、Nrf2、Keap1的表达,探讨达格列净降尿酸的可能机制和达格列净对Nrf2、Keap1蛋白的影响。方法:选取SPF级健康雄性SD大鼠作为研究对象,动物房内饲养,饲料为普通饲料,适应性喂养1周后随机分为5组:正常空白组（N组）,高尿酸血症组（SUA组）,高尿酸血症+达格列净治疗组（SUA+DAP组）,糖尿病组（DM组）,糖尿病+达格列净治疗组（DM+DAP组）。盐酸乙胺丁醇300mg/（kg/d）+腺嘌呤100mg/（kg/d）造成高尿酸血症模型,链脲佐菌素50mg/（kg/d）一次性腹腔注射诱导糖尿病模型,达格列净1.0mg/（kg/d）灌胃治疗。3周后,大鼠眼眶取血留取血标本,测空腹血糖和血尿酸。处死大鼠,取大鼠肾脏组织。HE染色观察大鼠肾脏组织病理情况。免疫组化检测大鼠肾脏组织中OAT3的水平。Western Blot检测大鼠肾脏组织中OAT3、Nrf2、keap1的表达水平。结果:1.与N组比较,DM组、DM+DAP组空腹血糖明显升高;与SUA组比较,SUA+DAP组空腹血糖下降;与DM组比较,DM+DAP组空腹血糖下降。差异有统计学意义（P＜0.05）。2.与N组比较,SUA组、SUA+DAP组血尿酸明显升高;与SUA组比较,SUA+DAP组血尿酸下降;与DM组比较,DM+DAP组血尿酸下降。***染色显示SUA组大鼠出现肾小管扩张,小管上皮扁平化,炎性细胞渗出,肾小管管腔内出现尿酸盐结晶,提示高尿酸血症造模成功,SUA+DAP组大鼠病理较之明显改善,尿酸结晶明显减少。4.免疫组化显示:与N组比较,SUA组、SUA+DAP组大鼠肾脏组织OAT3表达减少;与SUA组相比,SUA+DAP组大鼠肾脏组织OAT3表达升高;与DM组比,DM+DAP组大鼠肾脏组织OAT3表达升高。差异有统计学意义（P＜0.05）。*** Blot结果显示:与N组相比,SUA组SUA+DAP组、DM组、DM+DAP组OAT3表达显著下降;与SUA组相比,SUA+DAP组OAT3表达显著上升;DM+DAP组与DM组比较,OAT3表达上升;与N组相比,SUA组、SUA+DAP组、DM组、DM+DAP组Nrf2、Keap1表达上升;与SUA组相比,SUA+DAP组Nrf2、Keap1表达显著下降。差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.达格列净能降低血大鼠血尿酸水平,上调OAT3。OAT3在达格列净降尿酸机制中可能有一定作用。2.在高尿酸血症大鼠中,达格列净可下调Nrf2/Keap1信号通路。

关键词：达格列净尿酸氧化应激有机阴离子转运蛋白3 核因子E2相关因子2 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1