检索结果-南通市图书馆

中国生物制品学杂志 2021年第2期34卷 207-212页

作者：戴兴德郑小芳火文琴张小林甘肃医学院药学系甘肃平凉744000

目的建立并优化牛奶中β-内酰胺酶含量的普鲁士蓝显色光度检测法。方法基于青霉素分子中硫原子将Fe3+还原为Fe2+后,可与[Fe(CN)6]3-反应生成可溶性普鲁士蓝KFeⅢ[FeⅡ(CN)6]的原理建立β-内酰胺酶含量的检测方法,并对方法中的吸收波长(5... 详细信息

目的建立并优化牛奶中β-内酰胺酶含量的普鲁士蓝显色光度检测法。方法基于青霉素分子中硫原子将Fe3+还原为Fe2+后,可与[Fe(CN)6]3-反应生成可溶性普鲁士蓝KFeⅢ[FeⅡ(CN)6]的原理建立β-内酰胺酶含量的检测方法,并对方法中的吸收波长(500~900 nm)、0.01 mol/L Fe3+硫酸溶液体积(0、1、2、3、4、5、6 mL)、0.1 mol/L[Fe(CN)6]3-体积(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2 mL)、显色反应温度(50、70、100℃)及时间(0~60 min)、pH(0.3~9.0)、酶促反应时间(1、2、3、4、5、7、9、11、13、15、17 min)进行优化。同时验证方法的专属性、线性范围、最低检出限及准确性。采用优化方法检测市售牛奶样品中β-内酰胺酶的含量。结果最适检测条件为:检测波长680 nm,0.01 mol/L Fe3+硫酸溶液体积5 mL,0.1 mol/L[Fe(CN)6]3-1 mL,显色反应条件为100℃水浴20 min,显色反应pH 4.5,酶促反应时间15 min。Fe3+与青霉素反应具有唯一性;β-内酰胺酶在4~24 U/mL范围内与ΔA呈良好的线性关系,回归方程为:y=0.091 7 E x-0.512 0,相关系数(r)=0.998 9;最低检测限为0.32 U/mL;加入300、400、500 U/mL的β-内酰胺酶的脱脂奶粉样品的酶浓度分别为215、267、332 U/mL,RSD 法具有良好的线性及准确性,且不受牛奶中其他成分的影响,可用于牛奶及奶制品中β-内酰胺酶含量的检测。

关键词： β-内酰胺酶牛奶普鲁士蓝显色光度检测法青霉素

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